VI Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2014

Согласно литературным данным, заражение людей бактериями рода Proteus происходит при употреблении воды и пищевых продуктов, в том числе мясных [2]. Причем, значение и роль этих микроорганизмов в развитии заболеваний не дооценивается, поэтому разработка методов идентификации протеев в мясе и в других продуктах питания имеет актуальное значение [1].Сведений о применении реакции нарастания титра фага (РНФ) для обнаружения бактерий рода Proteus в объектах внешней среды и санитарного надзора мы не встречали. Поэтому изучение возможности использования РНФ для обнаружения данных микроорганизмов в объектах ветеринарно-санитарного надзора на примере мясного сырья мы посчитали актуальным.

Методика исследования. Кусочки свинины (говядины) массой 5-10 г. растирали в фарфоровой ступке и вносили в колбы объемом 100 мл, заливали стерильным МПБ из расчета 10 мл бульона на 1 г. В опытные колбы вносили индикаторные культуры P. vulgaris3 и P. vulgaris261 в концентрации 10⁵;10⁴; 10³; 10²; 10¹ м.к./мл. Отдельно ставили контроль – брали колбу с пробой мяса, которую не контаминировали бактериями рода Proteus. Рабочее разведение фага должно содержать 1х10⁴ корпускул в 1мл. При титре фага, равном 10⁸ частиц в 1мл, фаг разводили 1:10000.В пробирки № 2 и 2к вносили по 1 мл стерильного МПБ (контроль на присутствие свободного фага). Пробирки № 1 и 1к, в которых находились взвеси мяса и индикаторный фаг, являлись опытными. Пробирки № 2 и 2к - без фага - были контрольными, то есть служили для выявления в пробах мяса свободного фага. Пробирки № 3 и 3к – контроль на титр индикаторного фага. После культивирования в термостате при температуре 37 ⁰С в течение 5 часовсодержимое каждой пробирки разводили МПБ (рН 7,4-7,6) так, чтобы при высеве 1 мл содержимого из пробирки № 3 и 3к (контроль на титр фага) на чашках образовалось несколько десятков негативных колоний (зон лизиса) фага. В пробирке № 3 и 3к индикаторный фаг находился в концентрации нескольких тысяч корпускул в 1 мл, и для того, чтобы получить в конечном разведении несколько десятков корпускул в 1 мл, содержимое пробирки № 3 разводили в 20 раз, т.е. 0,25 мл исследуемой смеси вносили в 4,5 мл МПБ. Содержимое опытных пробирок № 1, 1к и № 2, 2к разводили аналогично. Ввиду того, что используемые фаги являются термостабильными, то инактивацию микрофлоры разведенных смесей пробирок № 1 и 1к, № 2 и 2к, № 3 и3к проводили путем прогревания в водяной бане при температуре 58-60 ⁰С в течение 30 минут. После этого содержимое пробирок исследовали на определение количества корпускул бактериофага методом агаровых слоев по Грациа.

Анализ полученных результатов показал, что увеличение титра фагов Pr-1 УГСХА и Pr-2 УГСХА более чем в 5 раз произошло при концентрации 10³ микробных клеток бактерий в 1 г мяса.Таким образом, в мясе, обсемененном бактериями рода Proteus, с помощью РНФ, данные бактерии обнаруживались в концентрации 10³ м.к./г без выделения чистой культуры, при наличии посторонней микрофлоры за 18 часов. Опираясь на полученные данные, можно отметить, что РНФ является высокочувствительным методом, позволяющим обнаружить бактерии рода Proteus даже в тех случаях, когда выделение культуры в чистом виде, практически, невозможно из-за наличия большого количества посторонней микрофлоры, маскировавшей рост протеев.

Библиографический список:

1. Бакулов И.А., Смирнов А.М., Васильев Д.А. Токсикоинфекции и токсикозы. Вопросы профилактики. – Ульяновск,2003. – С.26-28.

2. Urbanova E., Manova K., Pacova Z. Bacteria of the tribe proteeae - occurrence in raw materials and food, and resistance to antibiotics // Vet. med. – 2000. – №6. – Р. 171-176.