XVI Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2024

Актуальность: Большинство заболеваний сопровождается изменениями иммунного статуса человека. Кроме того изменения иммунной системы могут быть своеобразным индикатором наличия в регионе экологически неблагоприятных факторов. Идентификация нарушенного звена иммунитета позволяет подтвердить (или отклонить) клинический диагноз, а также правильно выбрать соответствующие методы лечения. Следовательно, оценка иммунного статуса при различных патологических состояниях проводится с целью диагностики, лечения и, возможно, профилактики данного заболевания. По результатам иммунологического исследования можно поставить предварительный диагноз и предположительно определить уровень повреждения иммунной системы .

Мононуклеарные клетки периферической крови (МНК) – это клетки периферической крови с круглыми ядрами. Они состоят из лимфоцитов (Т-, В-и NK-клеток) и моноцитов, в то время как эритроциты и тромбоциты лишены ядер, а гранулоциты (нейтрофилы, базофилы и эозинофилы) имеют многоядерные ядра. Роль мононуклеаров заключается в захвате и уничтожении вирусов и некоторых патогенных бактерий. Определение количества МНК является одним из обязательных параметров иммунного статуса.

Цель работы: изучить правила и методику выделение мононуклеаров из крови.

Мононуклеарные клетки выделяют из периферической крови человека по методу Boyum (1968), основанному на седиментации в одноступенчатом градиенте плотности фиколл-урографин. Фиколл в этой смеси действует как агглютинирующий эритроциты агент, а изопак (или урографин) необходим для создания изотоничности и плотности 1,077 г/см3.

Принцип метода: Обработанную гепарином кровь разводят в 3 раза средой для культивирования клеток и аккуратно выкладывают на градиент фиколл-уграфина. Кровь задерживается на фиколле и не смешивается с ним. Эритроциты постепенно прилипают к фиколлам и оседают на дно пробирки. Гранулоциты плотнее, чем осадок, и оседают вместе с эритроцитами. Лимфоциты остаются в интерфазе с моноцитами, собираются, переносятся в другую пробирку и отмываются центрифугированием.

После центрифугирования интерфазное кольцо, содержащее мононуклеарные клетки, собирается в отдельную пробирку. Эритроциты склеиваются с фиколлам и осаждаются на дно пробирки вместе с гранулоцитами. Суспензию мононуклеарных клеток трижды промывают средой для культтивирования клеток и центрифугируют при 200 g в течение 10 минут каждую. Жизнеспособность клеток определяют с помощью 0,1% раствора трипанового синего. Необходимо рассчитать выход жизнеспособности клеток (>90%). Для этого подсчитывают исходное и изолированное количество клеток.

Далее выделенные мононуклеары обрабатывают моноклональными антителами с флуорохромами и подсчитывают количество клеток различных субпопуляций с использованием люминисцентной микроскопии или проточной цитометрии.

Заключение. Выделение и исследование мононуклеаров позволяет точно определять нарушения иммунной системы и облегчает диагностику и лечения иммунодефицитов.

Литература:

1. Тис А.А., Мороз В.Л., Горецкая М.В., Шейбак В.М. ОЦЕНКА ИММУННОГО СТАТУСА В НОРМЕ И ПАТОЛОГИИ Журнал ГГМУ 2003 № 2 с.71-74