XVI Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2024

Введение:Африканская чума свиней (лат. pestis africana suum) – высококонтагиозная вирусная инфекция свиней, характеризующаяся выраженной вариабельностью вирулентности различных изолятов вируса и высокой его устойчивостью к физическим и химическим факторам инактивации. [1]

Важнейшей особенностью АЧС является быстрое изменение форм течения инфекции у домашних пород свиней от острого с летальностью 100% до хронического и бессимптомного носительства и непредсказуемого распространения. В естественных условиях к ВАЧС (вирус африканской чумы свиней) восприимчивы домашние и дикие свиньи всех возрастов. [2]

Источниками инфекции в передачи АЧС являются кровь, ткани, секреты, экскреты больных и павших животных.

Возбудителем АЧС является вирус (Africanswinefevervirus) семейства Asfaviridae рода asfivirus. Он является представителем крупных ядерно-цитоплазматических дезоксирибовирусов, принадлежность к которой объясняет его своеобразие по целому ряду важных таксономических, патогенетических и иммунологических свойств. [3]

Вирус АЧС устойчив в широком диапазоне pH: от 2 до 13; резистентен к протеолитическим ферментам и нуклеазам. [3] Может длительно сохраняться при низких температурах в экскретах, секретах, крови и продуктах свиноводства. Инактивация ВАЧС происходит при температуре от 55 ^оС и выше. Размер вириона составляет от 175 до 215 нм; капсид состоит из 1892-2172 структурных единиц, а геном представляет из себя молекулу двухцепочечной ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) размером от 170 до 195 тысяч пар оснований. [4]

Передача вируса АЧС в пределах пораженной группы свиней происходит путем прямого контакта больных особей со здоровыми или через контаминированные объекты. Для человека данное заболевание опасности не представляет, однако он может выступать переносчиком.

Цель работы – определение единого консервативного участка в геноме среди нескольких изолятов вируса АЧС с целью его дальнейшего использования в качестве матрицы для построения диагностической тест-системы, основанной на методе ПЦР-РВ (полимеразная цепная реакция с детекцией в режиме реального времени).

Экспериментальная часть. Для проведения поиска консервативной последовательности была осуществлена выборка 10 последовательностей изолятов вируса АЧС, взятых в разные периоды времени. Далее было проведено их выравнивание с использованием алгоритма ClustalW, встроенного в компьютерную программу MEGA 11. При их сравнении была выбрана последовательность с наименьшим количеством изменений: ВАЧС из Грузии от 2007 года. С помощью компьютерной программы Unipro UGENE v41.0 в этой последовательности был определен участок, похожий на открытую рамку считывания (ORF) (Рис. 1).

Рисунок 1: Участок ORF B646L ВАЧС: Georgia 2007

С помощью сервиса NCBI BLAST было выявлено, что данный участок относится к гену B646L, кодирующего основной капсидный белок ВАЧС p72. Для подтверждения консервативности данной последовательности было осущестлвено сравнение B646L у отобранных 19 изолятов с помощью выравнивания с использованием скрипта, основанного на алгоритме ClustalW2, и построения филогенетического дерева с использованием компьютерной программы MEGA 11 (Рис. 2).

Рисунок 2: Филогенетическое дерево 19 изолятов ВАЧС участка B646L

Обсуждение результатов. После выравнивания последовательностей B646L от разных изолятов вируса АЧС и расположения их в хронологическом порядке наблюдается закономерность:

• Изоляты вируса на участке B646L АЧС от 1950 г. до 2003 г. включительно несут множество точечных замен нуклеотидов относительно других образцов.

• Изоляты вируса на участке B646L АЧС от 2008 г. до 2020 г. идентичны друг другу, только один образец обладает двумя точечными несовпадениями относительно всей группы (MN194591.1:105256-107196 ASFV Kyiv 2016: делеция А, сайт 822 ; инсерция А, сайт 231)

Заключение. Опираясь на вышеуказанные данные можно сделать вывод, что последовательность B646L консервативна и возможно ее использовать в качестве матрицы для детекции вируса АЧС методом ПЦР-РВ.

Список литературы:

1. Коротков О. В. ОСОБО ОПАСНЫЕ ИНФЕКЦИИ ДИКИХ ЖИВОТНЫХ: АФРИКАНСКАЯ ЧУМА СВИНЕЙ //Министерство образования Московской области Государственное образовательное учреждение высшего образования Московской области «Государственный гуманитарно-технологический университет». – 2018. – Т. 50. – С. 75.

2. Макаров В. В. Африканская чума свиней //Российский ветеринарный журнал. – 2018. – №. 6.

3. Макаров В. В., Бучацкий Л. П. О природе вирусов и радикальном изменении их таксономии //Ветеринария сегодня. – 2021. – №. 4. – С. 266-270.

4. Середа А. Д., Колбасов Д. В. Белки вируса африканской чумы свиней //Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета. – 2012. – №. 77. – С. 21-37.