XVI Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2024

Актуальность. Кишечный микробиом является неотъемлемым фактором жизнедеятельности организма человека в норме [1]. Кишечная палочка (Escherichia coli) - часть микрофлоры кишечника животных и людей, ее содержание в норме — не более 1% от общей массы микроорганизмов. Бактерия препятствует проникновению в организме болезнетворных микробов, вырабатывает витамины B и K и др.

Исследование бактерий является важным фактором при изучении влияния опухоли на микробиом желудочно-кишечного тракта. Для идентификации микроорганизмов применяют как классические методы посева пробы на селективные питательные среды, так и современные. Метод масс-спектрометрии используется в клинической диагностике для идентификации грамотрицательных и грамположительных бактерий, позволяет получить бактериальный спектр в течение нескольких минут [2].

Цель работы – выбор метода идентификации бактерий группы кишечной палочки микробиома толстого кишечника экспериментальных мышей с перевитым штаммом опухоли.

Методика исследований. Проведен забор проб экскрементов у контрольной группы лабораторных мышей линии BALB/c с трансплантированной интракраниально опухолью Эрлиха (содержание опухолевых клеток - 10⁵-10⁷). Каждая биопроба была растворена в 0,9 % растворе натрия хлорида с последующим посевом пробы, разведенной в 10⁴, на дифференциально-диагностическую среду - лактозный ТТХ агар с тергитолом 7 для обнаружения и учета E.coli и бактерий группы кишечной палочки. После анаэробной инкубации проб в течение 48 часов при температуре + 37° С на чашках Петри выросли колонии бактерий. Проведена морфологическая оценка колоний. Выросшие колонии в последующем были отобраны и нанесены на матрицу микробиологического масс-спектрометра MALDI-TOF AUTOF MS 1000 для получения бактериального спектра.

Результаты и их обсуждение. Выросшиеколонии были круглые, слизистые, желто-оранжевого цвета и желтой зоной вокруг на фоне зеленого цвета среды, диаметром 2,0-3,0 мм. Морфологическая оценка колоний подтвердила факт роста колиформных бактерий в исследуемой пробе, общее время исследования с учетом приготовления среды – 60 часов. Масс-спектрометрический анализ отобранных колоний бактерий также подтвердил наличие в биопробах E.coli, но общее время исследования бактериального спектра – 5 минут.

Заключение. Классический микробиологический и масс-спектрометрический методы анализа подтвердили наличие E.coli в толстом кишечнике экспериментальных мышей. Метод идентификации бактерий группы кишечной палочки рекомендован к выбору в зависимости от условий проведения исследований.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Ким Н.В., Шевелева С.А. Роль микробиома кишечника в норме и при алиментарно-зависимых заболеваниях // Вопросы питания. - 2021. - Т. 90. - № 6. - С. 31–41.

2. Бактериологические методы исследования: учебное пособие / под ред. Н.Г. Перовой, А.М. Левина. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2015. - 352 с.