XVI Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2024

Трансплантация эмбрионов – метод репродукции животных, сущность которого состоит в извлечении из половых путей самки-донора эмбрионов на ранних стадиях развития и переносе в половые пути самки-реципиента.

Практический смысл данный метод репродукции животных получил после того, как его дополнили техникой вызывания множественной овуляции.

Трансплантация эмбрионов включает ряд биотехнических приемов:

- отбор коров-доноров и коров-реципиентов;

- вызывание суперовуляции у доноров;

- синхронизацию охоты у доноров и реципиентов;

- осеменение доноров и извлечение эмбрионов (зигот);

- поиск эмбрионов и оценку их жизнеспособности;

- долговременное хранение или краткосрочное хранение;

- подготовку к использованию;

- пересадку реципиентам.[1]

Трансплантация эмбрионов крупного рогатого скота

Отбор доноров и реципиентов. Важнейшим критерием при отборе доноров является высокая племенная ценность животных. Критерии оценки для коров молочных пород удой от 7000 до 12000 кг. Молока жирностью 3,6-4,3%. Также оцениваются оценки продуктивности отца и матери донора. Идеальный возраст коров для включения в группу доноров – 4-5 лет.

Вызывание суперовуляции у коров (множественная овуляция). Важный момент в технологии трансплантации эмбрионов – вызывание суперовуляторной реакции яичников коров-доноров, которая является решающим фактором биотехнологии трансплантации эмбрионов.

В практике для вызова суперовуляции применяют в основном два гонадотропных препарата: сыворотку жеребых кобыл (СЖК) и фолликулостимулирующий гормон (ФСГ). После введения простагландина большинство коров-доноров (95,9%) проявляют признаки охоты через 48 ч. Между числом овуляций и количеством извлеченных зародышей существует прямая зависимость. Оптимальный уровень, при котором обеспечивается удовлетворительная оплодотворяемость яйцеклеток и выход нормальных эмбрионов – 4-15 овуляций. [2]

Синхронизация охоты у коров-доноров и коров-реципиентов. При пересадке свежеизвлеченных эмбрионов необходимо обеспечить синхронную охоту у доноров и реципиентов (разница не должна превышать 12 ч.) С этой целью применяют лютеолитические гормоны (эстрофан, суперфан и др.) путем двойной (синтервалом 2 суток) внутримышечной инъекции реципиентам с таким расчетом, чтобы повторное введение приходилось на 3-й день от начала обработки ФСГ доноров. [2]

Осеменение доноров

Охота у коров-доноров наступает в среднем через 45 ч. после инъекции эстрофана и длится дольше чем обычно (на 24 ч). Овуляция начинается спустя 54-60 ч. после первой инъекции эстрофана. Искусственное осеменение проводится первый раз через 8-12 ч после обнаружения охоты быком-пробником и повтроно – через 12 ч. Для осеменения используют двойную дозу оттаянной спермы, содержащую не менее 40 млн подвижных спермиев. [3]

Извлечение эмбрионов

Имеются два способа извлечения эмбрионов: хирургический (через разрез стенки живота по белой линии либо в области голодной ямки) и нехирургический (через естественные половые пути применяя специальный катетер) – легко выполним и безопасен, чем хирургический. Эмбрионы крупного рогатого скота следует извлекать на 7-8 сутки (отсчет ведется от первого осеменения). [3]

Поиск эмбрионов и оценка их качества

Емкость с промывной жидкостью переносят в термостат при температуре 37 оС и оставляют на 20-30 мин. За это время эмбрионы оседают на дно. Верхний слой жидкости удаляют, а нижний слой жидкости, примерно 60-100 мл разливают в 2-3 чашки Петри и просматривают под микроскопом при увеличении в 25 раз. Обнаруженные эмбрионы с помощью микропипетки переносят в чашку Петри диаметром 40 мм с небольшим объемом среды Дюльбекко с добавлением фетальной сыворотки теленка. [2,3]

Хранение эмбрионов

Эмбрионы хранят краткосрочно либо долгосрочно При краткосрочном хранении эмбрионы пересаживают реципиентам в течение 2-4 ч. после извлечения. Эмбрионы можно краткосрочно хранить 24- 48 ч. в специальной среде в пайетах поместив в термостат при температуре 37 оС. Долгосрочно спермии хранят после глубокого замораживания в жидком азоте при температуре -196 оС в пайетах объемом 0,25 мл. [2,3]

Пересадка эмбрионов реципиентам

Существуют два способа пересадки эмбрионов реципиентам: 1) хирургический метод пересадки эмбрионов. Доступ к матке обеспечивался лапаротомией по белой линии живота или в области подвздоха. 2) При нехирургическом методе пересадки животному делают низкую сакральную анестезию, вводят маточный релаксант. Нехирургическую пересадку эмбрионов проводят с помощью модифицированного катетера Кассу, предназначенного для искусственного осеменения.

Через 50-60 дней после пересадки проводят ректальное исследование на стельность. [3]

Трансплантация эмбрионов у лошадей

Кобыла-донор, которая должна стать генетической мамой, проходит полную гинекологическую диспансеризацию для оценки рисков и плановой эффективности эмбриотрансфера. К ней подбирается кобыла-реципиент с успешным опытом репродуктивной деятельности.Половые циклы кобыл синхронизируются. Кобыла донор осеменяется выбранным жеребцом, после чего у всех кобыл четко регистрируется время овуляции. У донора и реципиента должны быть синхронизированы овуляции в пределах 24-72 часов.

На 8й-9й день проводится процедура вымывания эмбриона из матки кобылы-донора. После того, как в промывной среде эмбрион обнаружен, проводят оценку его жизнеспособности по внешним признакам, промывают в нескольких «водах», чтобы не осталось материнской среды, и специальным прибором или пипеткой переносят в матку кобылы-реципиента. Для надежности операции кобыле-реципиенту назначают гормональную терапию для сохранения беременности на ранних стадиях. 

Наряду с пересадкой только что полученных эмбрионов, практикуется транспортировка охлажденных и замороженных. По расчетам, используя пересадку эмбрионов, от одной кобылы-донора за год можно получить 10 и более жеребят. [4]

Оценивая эффективность трансплантации эмбрионов 

 При соблюдении идеальных условий работы эффективность эмбриотрансфера может составлять 70-90% для свежеполученных жизнеспособных эмбрионов. Охлажденные эмбрионы доходят до рождения жеребенка в 60-80% случаев, а эффективность работы с замороженными эмбрионами составляет 30-60%.

В мировой практике хорошо себя зарекомендовала продажа готовых эмбрионов через интернет-аукционы, цена за выдающиеся генотипы доходит до нескольких десятков тысяч евро. Для удобства многие эмбрионы продаются уже в утробе кобылы-реципиента.[4]

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК

1. Некрасов, Г.Д. Акушерство, гинекология и биотехника воспроизводства животных: учебное пособие / Г.Д. Некрасов, И.А. Суманова. – Барнаул: Издательство АГАУ, 2007. – 204 с.

2. Никитин, В.Я Практикум по акушерству, гинекологии и биотехнике размножения животных: учебник/ В.Я. Никитин [и др.]. – Москва: КолосС, 2004. – 208 с.

3. Полянцев, Н.И Ветеринарное акушерство, гинекология и биотехника размножения: учебник/ Н.И. Полянцев. – СПб: Лань, 2015. – 480 с.

4. https://horsefarm.ru/stati/sovremennye-tehnologii-v-reproduktsii-loshadej

Код для цитирования: Скопировать