XV Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2023

Введение

Бронхиальная астма - гетерогенное заболевание, которое характеризуется хроническим воспалением дыхательных путей и диагностируется по респираторным симптомам свистящего дыхания, одышки, стеснения в груди или кашля, вариабельных по длительности и интенсивности, в сочетании с лабильной обструкцией дыхательных путей [1].

Астма является одним из основных неинфекционных заболеваний, от которого страдают все люди вне зависимости от возраста и пола. На развитие бронхиальной астмы влияет огромное количество факторов, как внутреннего происхождения, такие как генетическая предрасположенность, пол и ожирение, так и внешнего, различные аллергены, инфекционные агенты, различные аэрополлютанты. На основании патогенеза бронхиальной астмы выделяют два ее типа: атопическую, также известную как аллергенную, и неатопическую, то есть неаллергическую.

Развитие бронхиальной астмы приводит к чрезмерному сокращению гладких мышц, утолщение стенок бронхов, рассинхронизации работы гладкой мускулатуры легких, сужению дыхательных путей, обструкции легких и нарушению дыхания.

На основании всей совокупности факторов бронхиальная астма представляет огромный интерес для изучения с целью выяснения точных механизмом возникновения, которые на данный момент достоверно не известны, и разработки новых, более совершенных методов лечения и профилактики. Особый интерес представляет атопический тип бронхиальной астмы в связи с постоянной напряженной экологической обстановкой в атмосфере. Для изучения атопической БА используются различные методики моделирования бронхиальной астмы на лабораторных животных, однако определение хода протекания и развития заболевания на основе наблюдения за симптоматикой болезни достаточно проблематично. Поэтому используются биохимические маркеры, которые точно дают понять состояние модельного объекта и влияние патологии на него [1][2][3][4].

В этой работе будут освещены основы количественного определения этих самых иммунологических маркеров.

Определение показателя клеточного иммунитета

Клеточный иммунитет неотъемлемая часть иммунного ответа организма на действие различных аллергенов. В случае атопической бронхиальной астмы, которая как раз и является следствием гиперреакции иммунной системы в легких, клеточные элементы - лейкоциты, такие как нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, альвеолярные макрофаги и тучные клетки увеличиваются в количестве и начинают миграцию в очаг воспаления, то есть бронхи. Общегематологический анализ позволяет определить их содержание в образце крови модельного объекта или пациента [1] [2][3].

Для исследования может использоваться как венозная, так и капиллярная кровь, при этом использование венозной крови предпочтительнее.

В настоящее время клинический анализ крови чаще всего выполняется на гематологическом анализаторе – высокотехнологичном приборе, способном определять и автоматически рассчитывать более 30 характеристик крови, в том числе осуществлять подсчет форменных элементов, включая основные популяции лейкоцитов[5]. Принцип работы гематологических анализаторов основан на прохождении суспензии клеток через чувствительный элемент – лазерный луч или электрический ток. Каждая клетка преломляет лазер или меняет сопротивление электрического тока, эти изменения пропорциональны размеру клетки, на чем и основано их различение анализатором.

При наличии отклонений по результатам исследования на гематологическом анализаторе производится морфологическое изучение мазка крови.  Для визуального подсчета форменных элементов одну-две капли крови капают на предметное стекло, другим стеклом одним движением размазывают её тонким слоем и фиксируют специальными веществами. Затем мазки окрашиваются красителями для удобства различения и визуализации клеток и изучаются под микроскопом. По стандарту подсчет проводят на сто клеток и полученные цифры записывают в процентах. Зная общее количество лейкоцитов, проценты можно пересчитать в абсолютные значения, которые гораздо более объективно отражают состояние лейкоцитарной популяции[6].

Количественное определение показателей гуморального иммунитета

Для количественного определения цитокинов в крови можно использовать два метода: иммунохимический (ИФА) и биотестирование[7][8]. Биотестирование считается самым чувствительным методом, но по точности и специфичности анализа заметно уступает ИФА. В целом ИФА получило наибольшее распространение как раз из-за своей скорости и точности, которые позволяют проводить анализ практически на любое белковое вещество, в том числе цитокины, иммуноглобулины и факторы некроза, которые как раз и являются ключевыми веществами в иммунологическом исследовании. Биотестирование же чаще всего проводится для подтверждения результатов ИФА или для конкретных исследовательских целей.

ИФА исследование следует проводить по протоколу, который прилагается в коммерческом комплекте реагентики.

В качестве анализируемого вещества можно использовать любые организменные жидкости тестового объекта, в том числе и образцы крови.

В целом ИФА является главным методом для количественного определения показателей гуморального иммунитета[8].

Список литературы

Шагарова С. Г., Смирнова С. В. Показатели иммунного статуса и метаболизм лимфоцитов крови при бронхиальной астме // Сибирское медицинское обозрение. 2010. №5. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/pokazateli-immunnogo-statusa-i-metabolizm-limfotsitov-krovi-pri-bronhialnoy-astme (дата обращения: 20.12.2022).

Virchow, J.-C., Kroegel, C., Walker, C., & Matthys, H. (1994). Cellular and immunological markers of allergic and intrinsic bronchial asthma. Lung, 172(6). doi:10.1007/bf00172846 

Смольникова Марина Викторовна, Смирнова С.В., Ильенкова Н.А., Коноплева О.С. Иммунологические маркеры неконтролируемого течения атопической бронхиальной астмы у детей // Медицинская иммунология. 2017. №4. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/immunologicheskie-markery-nekontroliruemogo-techeniya-atopicheskoy-bronhialnoy-astmy-u-detey (дата обращения: 23.12.2022).

Kenyon, N. J., Ward, R. W., & Last, J. A. (2003). Airway fibrosis in a mouse model of airway inflammation. Toxicology and Applied Pharmacology, 186(2), 90–100. doi:10.1016/s0041-008x(02)00025-x 

Last, J. A., Ward, R., Temple, L., Pinkerton, K. E., & Kenyon, N. J. (2004). Ovalbumin-Induced Airway Inflammation and Fibrosis in Mice Also Exposed to Ultrafine Particles. Inhalation Toxicology, 16(2), 93–102. doi:10.1080/08958370490265077

Выхристенко Л.Р., Смирнова О.В. Иммунотерапия бронхиальной астмы // Медицинские новости. 2011. №10. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/immunoterapiya-bronhialnoy-astmy-1 (дата обращения: 23.12.2022).

Зенкина Л. В., Смирнова С. В., Кадричева С. Г. Бронхиальная астма: концентрация IL2, IL4, IL6, ifn. . . . . . И tfna в сыворотке периферической крови и изменения в иммунном статусе при атопии и псевдоатопии // Вестник КБ №51. 2008. №2. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/bronhialnaya-astma-kontsentratsiya-il2-il4-il6-ifn-i-tfna-v-syvorotke-perifericheskoy-krovi-i-izmeneniya-v-immunnom-statuse-pri-atopii-i (дата обращения: 21.12.2022).

А. Ш. Орадова, К. З. Садуакасова, С. Д. Лесова Лабораторная диагностика цитокинов (обзорная статья) // Вестник КазНМУ. 2017. №2. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/laboratornaya-diagnostika-tsitokinov-obzornaya-statya-1 (дата обращения: 23.12.2022).