ВВЕДЕНИЕ

Для фармацевтического анализа на современном этапе характерны значительные темпы развития. Особое внимание уделяется совершенствованию методов анализа, применяемых для определения качества лекарственных средств. Они подразделяются на химические, физические, физико-химические и биологические методы анализа [11].

В последнее время преимущественное развитие получили инструментальные или физико-химические методы анализа. С их помощью измеряют различные физические величины, такие как плотность, вязкость, прозрачность показатель преломления, вращение плоскости поляризации оптически активных веществ, электропроводность, радиоактивность и другие. Из физико-химических методов можно выделить оптические, электрохимические и хроматографические методы.

Наряду с этим, широкое развитие получают комбинированные методы исследования, суть которых заключается в сочетании различных методов при анализе лекарственных веществ. Например, хроматомасс-спектрофотометрия включает сочетание хроматографии и масс-спектрофотометрии.

При анализе лекарственных средств важна быстрота проведения исследования, взятие малого количества лекарственного средства, точность полученного результата. Всем этим требованиям удовлетворяют физико-химические методы анализа, обладающие специфичностью, чувствительностью, экспрессностью. Поэтому данная тема является актуальной.

Целью выпускной квалификационной работы является изучение физико-химических методов анализа и определение качества глазных капель сульфацила-натрия методом спектрофотометрии.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

Методом контент-анализа изучить теоретический материал, содержащий информацию о физико-химических методах анализа.

Расширить знания о оптических, хроматографических и электрохимических методах анализа.

Выявить особенности физико-химических методов анализа и обозначить их роль в фармацевтическом анализе.

Овладеть навыками работы с аппаратурой по определению качества глазных капель.

Определить концентрацию сульфацила-натрия в глазных каплях методом спектрофотометрии.

Объекты исследования:

1. Сульфацил – натрия, сульфацетамид капли глазные 20% - 5 мл, АО «Производственная фармацевтическая компания Обновление», РФ, г. Новосибирск. Серия – 10122

2. Капли глазные 20% - 5 мл, Сульфацил – натрия, сульфацетамид, ООО «ГРОТЕКС» Россия, г. Санкт-Петербург. Серия - 231221

Методы исследования: контент-анализ, фармакопейный анализ, сравнительный анализ.

ГЛАВА 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ МЕТОДОВ АНАЛИЗА

Физико-химические или инструментальные методы анализа основаны на измерении с помощью приборов физических параметров анализируемой системы, которые возникают или изменяются в ходе выполнения аналитической реакции.

Бурное развитие физико-химических методов анализа было вызвано тем, что классические методы химического анализа (гравиметрия, титриметрия) уже не могли удовлетворять многочисленные запросы химической, фармацевтической, металлургической, полупроводников атомной и других отраслей промышленности, требовавших повышенной чувствительности методов до 10,8 – 10,9% их селективности и экспрессности, что позволило бы управлять технологическими процессами по данным химического анализа, а также выполнять их в автоматическом режиме и дистанционно[12].

Ряд современных физико-химических методов анализа позволяют одновременно в одной и той же пробе выполнять как качественный, так и количественный анализ компонентов. Точность анализа современных физико-химических методов сопоставления с точностью классических методов, а в некоторых, например, в кулонометрии, она существенно выше.

Физико-химические методы анализа имеют ряд преимуществ перед другими методами анализа. Наряду с высокой специфичностью, чувствительностью, экспрессивностью очень важна возможность выполнения этими методами анализа двух и даже трех компонентных смесей веществ без предварительного разделения с достаточной для фармацевтического анализа точностью [10].

К недостаткам некоторых физико-химических методов следует отнести дороговизну используемых приборов, необходимость применения эталонов, поэтому классические методы анализа по-прежнему не потеряли своего значения и применяются там, где нет ограничений в скорости выполнения анализа и требуется высокая его точность при высоком содержании анализируемого компонента.

В основу классификации физико-химических методов анализа положена природа измеряемого физического параметра анализируемой системы, величина которого является функцией количества вещества. В соответствии с этим все физико-химические методы делятся на три большие группы: электрохимические, хроматографические, оптические.

1.1. Электрохимические методы анализа

Электрохимические методы основаны на измерении электрических параметров электрохимических явлений, возникающих в исследуемом растворе. Такое измерение осуществляют с помощью электрохимической ячейки, представляющей собой сосуд с исследуемым раствором, в который помещены электроды. Электрохимические процессы в растворе сопровождаются появлением или изменением разности потенциалов между электродами или изменение величины тока, проходящего через раствор.

Электрохимические методы классифицируют в зависимости от типа явлений, замеряемых в процессе анализа. В общем случае различают две группы электрохимических методов:

Методы без наложения постороннего потенциала, основанные на измерении разности потенциалов, который возникает в электрохимической ячейке, состоящей из электрода и сосуда с исследуемым раствором. Эту группу методов называют потенциометрическими. В потенциометрических методах используют зависимость равновесного потенциала электродов от концентрации ионов, участвующих в электрохимической реакции на электродах.

Методы с наложением постороннего потенциала, основанные на измерении:

а) электрической проводимости растворов – кондуктометрия;

б) количества электричества, прошедшего через раствор – кулонометрия;

в) зависимости величины тока от приложенного потенциала – вольт-амперометрия

г) времени, необходимого для прохождения электрохимической реакции – хроноэлектрохимические методы (хроновольтамперометрия, хронокондуктометрия). В методах без наложения постороннего потенциала она представляет собой гальванической элемент, в котором вследствие протекания химических окислительно-восстановительных реакций возникает электрический ток. В ячейке типа гальванического элемента в контакте с анализируемым раствором находятся два электрода – индикаторный электрод, потенциал которого зависит от концентрации вещества, и электрод с постоянным потенциалом – электрод сравнения, относительно которого измеряют потенциал индикаторного электрода. Измерение разности потенциалов производят специальными приборами – потенциометрами.

В методах с наложением постороннего потенциала применяют электрохимическую ячейку, названную так потому, что на электродах ячейки под действием наложенного потенциала происходит электролиз – окисление или восстановление вещества. В кондуктометрическом анализе используют кондуктометрическую ячейку, в которой замеряют электрическую проводимость раствора. По способу применения электрохимические методы можно классифицировать на прямые, в которых концентрацию веществ измеряют по показанию прибора, и электрохимическое титрование, где индикацию точки эквивалентности фиксируют с помощью электрохимических измерений. В соответствии с этой классификацией различают потенциометрию и потенциометрическое титрование, кондуктометрию и кондуктометрическое титрование и т.д. [10].

Метод потенциометрии

Потенциометрия основана на измерении разности электрических потенциалов, возникающих между разнородными электродами, опущенными в раствор с определяемым веществом. Электрический потенциал возникает на электродах при прохождении на них окислительно-восстановительной (электрохимической) реакции. Окислительно-восстановительные реакции протекают между окислителем и восстановителем с образованием окислительно-восстановительных пар, потенциал Е которых определяется по уравнению Нернста концентрациями компонентов пар (ок) и (вос).

Для проведения потенциометрических определений собирают электрохимическую ячейку из индикаторного электрода сравнения, который опускают в анализируемый раствор и подсоединяют к потенциометру. Применяемые в потенциометрии электроды имеют большое внутреннее сопротивление (500-1000 МОм), поэтому существуют типы потенциометров представляют собой сложные электронные высокоомные вольтметры. Для измерения ЭДС электродной системы в потенциометрах применяют компенсационную схему, позволяющую уменьшить ток в цепи ячейки.

Наиболее часто потенциометры применяют для прямых измерений pH, показатели концентраций других ионов pNa, pK, pNH4, pCl и мВ. Измерения проводят, используя соответствующие ион-селективные электроды.

Потенциометрическое титрование проводят в тех случаях, когда химические индикаторы использовать нельзя или при отсутствии подходящего индикатора. В качестве индикаторов используют электроды потенциометра, опущенные в титруемый раствор. При этом применяют электроды, чувствительные к титруемым ионам. В процессе титрования изменяется концентрация ионов, что регистрируется на шкале измерительного пробора потенциометра. Записав показания потенциометра в единицах pH или мВ, строят график их зависимости от объема титранта (кривую титрования), определяет точку эквивалентности.

Данный метод один из наиболее употребляемых методов инструментального анализа вследствие простоты, доступности, селективности и широких возможностей [12].

Метод кондуктометрии

Кондуктометрия основана на измерении электрической проводимости раствора. Если в раствор вещества поместить два электрода и подать на электроды разность потенциалов, то через раствор потечёт электрический ток. Как и каждый проводник электричества, растворы характеризуются сопротивлением и обратной ему величиной – электрической проводимостью.

Кондуктометрический анализ проводят с помощью кондуктометров – приборов, измеряющих сопротивление растворов. По величине сопротивления определяют обратную ему по величине электрическую проводимость растворов.

Определение концентрации растворов осуществляют прямой кондуктометрией и кондуктометрическим титрованием. Прямая кондуктометрия используется для определения концентрации раствора по калибровочному графику. Для составления калибровочного графика замеряют электропроводность серии растворов с известной концентрацией и строят калибровочный график зависимости электропроводимости от концентрации. Затем измеряют электропроводимость анализируемого раствора и по графику определяют его концентрацию.

Кондуктометрическое титрование обладает рядом преимуществ. Его можно проводить в мутных и окрашенных средах, в отсутствии химических индикаторов. Метод обладает повышенной чувствительностью и позволяет анализировать разбавленные растворы веществ (до моль/дм3). Кондуктометрическим титрованием анализирует смеси веществ, т.к. различия в подвижности различных ионов существенны и их можно дифференцированно оттитровывать в присутствии друг друга.

Кондуктометрический анализ легко автоматизировать, если раствор титранта подавать из бюретки с постоянной скоростью, а изменение электрической проводимости раствора регистрировать на самописце. Эта разновидность кондуктометрии получила название хронокондуктометрического анализа.

В кислотно-основном титровании кондуктометрическим путем можно определять сильные кислоты, слабые кислоты, соли слабых оснований и сильных кислот.

В осадительном кондуктометрическом титровании электропроводимость титруемых растворов сначала уменьшается или остается на некотором постоянном уровне вследствие связывания титруемого электролита в осадок, после т.э. при появлении избытка титранта – снова возрастает [12].

В комплексометрическом кондуктометрическом титровании изменения электропроводимости раствора наступают вследствие связывания катионов металла в комплексе с ЭДТА.

В последние годы получило развитие высокочастотная кондуктометрия, в которой электроды с раствором не контактируют, что важно при анализе агрессивных сред и растворов в закрытых сосудах.

Метод кулонометрии

В кулонометрии вещества определяют измерением количества электричества, затраченное на их количественное электрохимическое превращение. Этот анализ проводят в электролитической ячейке, в которую помещают раствор определяемого вещества. При подаче на электроды ячейки соответствующего потенциала происходит электрохимическое восстановление или окисление вещества. Согласно законам электролиза, открытым Фарадеем, количество вещества, прореагировавшего на электроде, пропорционально количеству электричества, прошедшего через раствор.

Кулонометрический анализ позволяет определять вещества, не осаждающиеся на электродах или улетучивающиеся в атмосферу при электрохимической реакции.

Различают прямую кулонометрию и кулонометрическое титрование. Высока точность и чувствительность методов измерения электрического тока обеспечивает кулонометрическому анализу уникальную точность 0.1-0.001%, и чувствительность до 1*10^-8 – 1*10^-10 г. Поэтому кулонометрический анализ применяется для определения микропримесей и продуктов разрушения веществ, что важно при контроле их качества.

Для индикации т.э. при кулонометрическом титровании можно применять химический и инструментальные методы – добавление индикаторов, обнаружение окрашенных соединений фотометрическим или спектрофотометрическим путём.

В отличии от других методов анализа кулонометрия может быть полностью автоматизирована, что сводит к минимуму случайные ошибки определения. Эта особенность использована при создании автоматических кулонометрических титраторов – чувствительных приборов, применяющихся для особо точных анализов, когда другие методы оказываются недостаточно чувствительными [10].

Кулонометрическое титрование - перспективный метод инструментального анализа. Он может найти широкое применение для решения ряда специальных аналитических задач – анализа примесей, малых количеств лекарственных препаратов, определение в биологическом материале и окружающей среде токсических веществ, микроэлементов и других соединений.

Хроматографические методы анализа

Хроматография – это физико-химический метод разделения и определения веществ, основанный на распределении компонентов между двумя фазами, неподвижной и подвижной. Неподвижной (стационарной) фазой служит твердое пористое вещество или пленка высококипящей органической жидкости, нанесенная на твердое вещество. Подвижная фаза представляет собой жидкость или газ, протекающий через неподвижную фазу.

Наиболее важными хроматографическими параметрами, позволяющими оценить эффективность и селективность колонки и степень разделения различных веществ, являются: время удерживания, удерживаемый объем, коэффициент емкости, коэффициент удерживания, число теоретических тарелок, высота, эквивалентная теоретической тарелке, коэффициент селективности и коэффициент разделения.
Хроматография позволяет разделять не только компоненты смеси, но и определять ее качественный и количественный состав, поскольку положения хроматографического пика на хроматограмме (удерживаемый объем и время удерживания) для данной хроматографической системы характеризует природу данного вещества. Площадь, ограниченная этой кривой и нулевой линией детектора (хроматографический пик), пропорциональна количеству данного вещества, прошедшего через детектор [10].

Качественный анализ хроматографическими методами – это, прежде всего, идентификация по параметрам удерживания (tR, VR), поскольку они отличаются хорошей воспроизводимостью, относильные стандартные отклонения не превышают 2%. Совпадение величин удерживания неизвестного и стандартного соединения говорит о том, что эти соединения могут быть идентичными. Однако возможен случай, когда различные вещества имеют одинаковое время удерживания. Поэтому для большей достоверности идентификации сравнение хроматографических параметров известного и неизвестного вещества проводят в сильно различающихся условиях, например, получают данные об их хроматографическом поведении на колонках с различными неподвижными фазами. Если хроматографическое поведение стандартного и неизвестного вещества в таких случаях идентично, то достоверность идентификации возрастает до 99%.

Оптические методы

Оптические методы анализа являются важнейшим разделом спектроскопии, использующейся в научных исследованиях, в любой отрасли промышленности, в космических исследованиях. Оптические и спектральные методы анализа основаны на измерении параметров, характеризующих эффекты взаимодействия электромагнитного излучения с веществами: интенсивности излучения возбужденных атомов поглощения монохроматического излучения, показателя преломления света, угла вращения плоскости поляризованного луча света и др. Изменение интенсивности электромагнитного излучения после взаимодействия с веществом связано с качественным и количественным составом вещества, что обуславливает широкое распространение и интенсивное развитие методов спектроскопии в анализе.

В число оптических методов входит:

- молекулярно-абсорбционный спектральный анализ, основанный на измерении ослабления светового потока, происходящего вследствие избирательного поглощения света анализируемым веществом (системой) – фотоколориметрия и спектрофотометрия:

- атомная спектроскопия, использующая спектры испускания или поглощения вещества после перевода его в атомарное состояние внешним высокоэнергетическим воздействием – эмиссионная и абсорбционная атомная спектроскопия;

- рефрактометрический анализ, основанный на зависимости показателя преломления света от природы и концентрации вещества;

- люминесцентный анализ, в основе которого лежит зависимость интенсивности свечения вещества при поглощении внешней энергии от его состава – флуоресценция, катодолюминесценция, хемилюминесценция [10].

Метод поляриметрии

Поляриметрический метод анализа основан на способности веществ отклонять плоскость поляризации при прохождении через них поляризованного света.

Вещества, отклоняющие плоскость поляризации света вправо или влево, называются оптически активными.

Величину отклонения плоскости поляризации от начального положения, выраженной в угловых градусах, называют углом вращения и обозначают греческой буквой а.

Величина угла вращения зависит от природы оптически активного вещества, толщины его слоя, температуры, природы растворителя и длины волны света.

Как правило, определение оптического отклонения вращения проводят при 20°С и при длине волны линии D спектра натрия (589,3).

Метод поляриметрии широко используется в фармацевтическом анализе для установления оптической активности лекарственных веществ, качественной и количественной оценки их.

Для изменения угла вращения плоскости поляризации применяют приборы, называемые поляриметрами.

1.3.2. Метод фотометрии

Фотометрический метод анализа основан на способности определяемого вещества поглощать электромагнитное излучение оптического диапазона. Концентрацию поглощающего вещества определяют, измеряя интенсивность поглощения. Поглощение при определенной длине волны является информацией о качественном и количественном составе определяемого вещества и составляет аналитический сигнал.

Фотометрический анализ относится к молекулярному абсорбционному анализу, т.е. анализу, основанному на поглощении света молекулами анализируемого вещества и сложными ионами в ультрафиолетовой, видимой и инфракрасной областях спектра. Фотометрические исследования проводятся на фотометрах и спектрофотометрах, с помощью которых измеряют оптические плотности окрашенных растворов исследуемых веществ в спектральном диапазоне поглощения веществ.

Большинство фотометров имеют набор из 10-15 светофильтров и представляет собой двухлучевые приборы, в которых пучок света от источника излучения проходит через светофильтр и призму, которая делит пучок на два, направляемые через кюветы с исследуемым раствором и с раствором сравнения. После кювет параллельные световые пучки проходят через диафрагмы, предназначенные для уравнивания интенсивностей световых потоков, и попадают на два фотоэлемента. Недостаток приборов – отсутствие монохроматора, что приводит к потере селективности измерений; достоинства фотометров – простота конструкций и высокая чувствительность благодаря большой светосиле [10].

1.3.3. Метод рефрактометрии

Рефрактометрия – физико-химический метод анализа, основанный на измерении показателя преломления света в исследуемом растворе.

В основе этого метода лежит явление рефракции, т.е. преломление световых лучей на границе раздела двух различных по своей природе оптических сред. При прохождении луча света из одной среды в другую на границе этих сред направление луча меняется, происходит преломление.

Показатель преломления зависит от природы вещества; длины волны падающего света; температуры; от плотности раствора, но так как плотность зависит от его концентрации, то и показатель преломления раствора зависит от его концентрации.

Каждое индивидуальное вещество характеризуется определенным значением показателя преломления. Следовательно, для раствора одного и того же вещества при одинаковой температуре и других условиях преломления будет зависеть от концентрации. Зная показатель преломления можно определить концентрацию раствора, пользуясь или калибровочным графиком, или таблицами зависимости показателя преломления от концентрации или по формуле.

Показатели преломления заметно изменяются с изменением температуры. Поэтому измерять показатель преломления нужно при той температуре, при которой составлялась таблица или калибровочная кривая для определения концентрации. Обычно измерения проводят при 20°С.

Прибор при помощи которого определяется показателем преломления называется рефрактометром. В аптеках применяют рефрактометры различных систем, отличающихся внешним оформлением различным расположением призмы пределом измерений, но принцип работы у них одинаковый он основан на изменении предельного угла преломления [4].

При определении показателя преломления исследуемого раствора его помещают между осветительной и измерительной призмами. Лучи света проходят осветительную призму, входят в исследуемый раствор и падают на полированную грань измерительной призмы. Показатель преломления измерительной призмы известен. Так как на рефрактометре исследуются вещества, показатель преломления которых меньше показателя преломления измерительной призмы, то лучи всех направлений, преломившись на границе жидкости и света, войдут в измерительную призму. В окуляр наблюдают преломление или отражение света, при этом верхняя часть поля зрения освещена, а нижняя остается темной. Величину предельного угла определяют по границе света и тени, совмещая ее с точкой пересечения линий. По шкале отсчитывают показатель преломления исследуемого раствора.

Определение концентрации веществ в растворе ведут:

а) с помощью калибровочного графика

б) рассчитывают по формуле 4:

где n – показатель преломления раствора

n₀ – показатель преломления дистиллированной воды

F – фактор пересчета показывает величину, на которую увеличивается показатель преломления при увеличении % концентрации на 1%.

в) по таблице показателей преломления веществ.

1.3.4. Метод спектрофотометрии

Спектрофотометрический метод, несмотря на наличие множества физико-химических методов анализа, находит широкое применение в анализе лекарственных препаратов и в ряде случаев имеет существенное преимущество перед другими методами, благодаря сравнительной доступности, дешевизне, простоте в сочетании с хорошей точностью.

Спектрофотометрический метод гарантирует сверхчувствительность измерений концентрации газов инертного типа. Это особенно важно, поскольку способы исследования подобных смесей химические неприменимы, а физические методики либо тоже невозможно использовать, либо они обладают ограниченной чувствительностью [17].

Достоинства спектрофотометрического метода:

• Значительная избирательность. Можно определять элементы в сложных пробах без химразделения.

• Точность. Погрешность обычно составляет 3-5% или 0,5-1% в благоприятных случаях.

• Применимость для анализа веществ с большим или малым содержанием каких-либо компонентов.

• Возможность определения примесей.

• Высокая чувствительность.

• Экспрессность.

• Простота.

Спектрофотометрический метод задействуется в поэтапном контроле при выпуске особо чистых веществ.

Методы спектрофотометрии - методы исследования и анализа веществ, основанные на поглощении молекулами вещества монохроматического электромагнитного излучения в ультрафиолетовой (УФ), видимой и инфракрасной (ИК) областях спектра. Природа полос поглощения в УФ и видимой областях спектра связана с различными электронными переходами в поглощающих молекулах и ионах (электронные спектры). В ИК-области она связана с колебательными переходами и изменением колебательных состояний ядер, входящих молекулу поглощающего вещества (колебательные спектры).

В случае поглощения веществами немонохроматического излучения выделяют фотоколориметрические (колориметрические) методы анализа. Фотоколориметрия отличается от спектрофотометрического анализа тем, что анализируемое вещество помощью какого-либо реагента переводят (количественно) в окрашенное соединение. Вначале получают окрашенные растворы, используя растворы стандартных образцов (ГСО или РСО). Затем строят градуировочный график зависимости интенсивности поглощения окрашенных растворов от концентрации стандартного раствора, по графику рассчитывают содержание вещества в испытуемых образцах.

Метод абсолютной спектрофотометрии (фотоколориметрии) основан на измерении светопоглощения анализируемого раствора относительно раствора сравнения, в качестве которого может использоваться чистый растворитель или раствор, содержащий все компоненты анализируемого раствора, кроме определяемого вещества.

Метод дифференциальной спектрофотометрии (фотоколориметрии) основан на измерении светопоглощения анализируемого раствора относительно раствора сравнения, содержащего 11 определенное количество стандартного образца испытуемого вещества или его заменителя. Такой прием приводит к изменению рабочей области шкалы прибора и снижению относительной погрешности определения до ±(0,5-1) %, т. е. сопоставимой с титриметрическими методами.

Спектрофотометрические и фотоколориметрические методы анализа основаны на использовании объединенного закона Бугера - Ламберта - Бера.

Спектрофотометрия в УФ- и видимой областях один из наиболее широко используемых физико-химических методов в фармацевтическом анализе (ОФС 42-0042-07 ГФ РФ XIV). Идентификацию лекарственных веществ можно провести по характеру спектров поглощения в различных растворителях, положению максимумов и минимумов поглощения или по их отношению (при различных длинах волн). Спектр поглощения вещества является его специфической характеристикой и представляет собой кривую зависимости интенсивности поглощения (оптической плотности) от длины волны (1, нм).

Для количественного спектрофотометрического анализа важен выбор аналитической полосы поглощения. Последняя должна быть свободна от наложения полос поглощения других компонентов смеси и иметь достаточно высокий удельный показатель поглощения анализируемого вещества.

Одним из вариантов дифференциальной спектрофотометрии является производная УФ-спектрофотометрия.

Если дифференциальной спектрофотометрии используют разность оптических плотностей при одной и той же длине волны, то в производной при двух длинах волн в небольшом интервале. Этот вариант позволяет выделять индивидуальные полосы в «сложном» УФ-спектре, представляющем собой сумму налагающихся полос поглощения или полос, имеющих четко выраженного максимума.

Другим вариантом дифференциальной спектрофотометрии является AE-метод, основанный на превращении одного из веществ, входящих в состав анализируемой пробы, в таутомерную (или иную) форму, отличающуюся по характеру и интенсивности поглощения. Затем измеряют оптическую плотность раствора одной таутомерной формы по отношению к другой, т. е. используют в качестве раствора сравнения раствор исходного определяемого вещества[13].

Спектроскопия в ИК-области (ОФС 42-0043-07 ГФ РФ XIV). Инфракрасные спектры возникают вследствие поглощения электромагнитного излечения при колебаниях ядер атомов в молекулах или ионах, которые сопровождаются изменением дипольных моментов, и представляют собой зависимость пропускания или поглощения от длины волны или частоты колебаний.

Область применения ИК-спектроскопии аналогична, но более широка, чем УФ-метода. ИК-спектр однозначно характеризует всю структуру молекулы, включая незначительные ее изменения. Важные преимущества данного метода для измерения оптической плотности и регистрации спектров поглощения применяют спектрофотометры приборы, позволяющие проводить анализ как окрашенных, так и бесцветных соединений по избирательному поглощению монохроматического излучения в видимой, УФ-и ИК-области спектра. Сегодня на рынке имеется большое разнообразие чем спектрофотометров различных производителей. Сконструированы спектрофотометры, работающие в различных областях спектра, например, только в УФ- или только в ИК-области, в УФ- и видимом диапазоне. Существуют приборы, работающие во всех диапазонах, что позволяет на одном и том же оборудовании проводить различные исследования. Современная аппаратура дает возможность измерять УФ-спектры в области от 190 до 380 нм, видимые спектры - от 380 до 780 нм, ИК-спектры - от 780 до 40000 нм (40 мкм).

Преимущества использования спектрофотомерии в фармацевтическом анализе: высокая чувствительность; воспроизводимость; возможность анализа лекарственных веществ, не дающих химические реакции в стехиометрическом соотношении; возможность анализа многокомпонентных лекарственных форм, для которых нет методик количественного определения химическими методами; возможность сочетания с другими методами [14].

ГЛАВА 2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАЧЕСТВА ГЛАЗНЫХ КАПЕЛЬ С СУЛЬФАЦИЛОМ – НАТРИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТОДА СПЕКТРОФОТОМЕТРИИ

Анализ глазных капель различных изготовителей проводили по ОФС.1.4.1.0003.15 ст. ГФ XIV издания «Глазные лекарственные формы», согласно которой, капли глазные – жидкие лекарственные формы, представляющие собой истинные растворы, растворы высокомолекулярных соединений, тончайшие суспензии или эмульсии, содержащие одно или более действующих веществ, предназначенные для инсталляции в глаз. Они представлены водными растворами, качество которых определяют по показателям: «Прозрачность», «Цветность», «рН», «Осмоляльность», «Механические включения (видимые)», в соответствии с требованиями соответствующих ОФС [20].

Глазные лекарственные формы выпускаются в стерильных однодозовых и многодозовых упаковках с контролем первого вскрытия. На упаковке приводят указание о стерильности лекарственного препарата и указывают названия действующих веществ, их количества и перечень названий всех вспомогательных веществ. На упаковке многодозных лекарственных форм указывают срок хранения лекарственного препарата после вскрытия.

В соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственных средств». В стерильной упаковке, обеспечивающей стабильность в течение указанного срока годности лекарственного препарата, в защищенном от света месте при температуре от 8 до 15°С, если нет других указаний в фармакопейной статье или нормативной документации [3].

2.1. Описание и стандартизация исследуемых образцов

На исследование были представлены глазные капли различных изготовителей и серий:

Объект №1. Сульфацил – натрия, сульфацетамид, капли глазные 20% - 5 мл, производитель – АО «Производственная фармацевтическая компания Обновление», РФ, г. Новосибирск. Серия – 10122.

Рисунок 1. Сульфацил – натрия, сульфацетамид, капли глазные 20% - 5 мл

Состав на 1 мл:

Активное вещество: Сульфацетамид – 200 мг;

Вспомогательные вещества: натрия тиосульфат – 1 мг, хлористоводородная кислота (1 М раствор хлористоводородной кислоты) – до pH 8,5, вода для инъекций – до 1 мл

Срок годности: 2 года

Форма выпуска: капли глазные 20% по 1 мл, 1,5 мл, 2 мл в тюбик-капельницы с клапаном или по 5 мл, 10 мл в тюбик-капельницы с винтовой горловиной из полимерных материалов. Тюбик-капельницы с винтовой горловиной укупоривают навинчиваемыми крышками из полимерных материалов. 2 тюбик-капельницы по 1 мл, 1,5, 2 мл или 1 тюбик-капельницу по 5 мл, 10 мл с инструкцией по применению помещают в пачку из картона

Описание: прозрачная бесцветная жидкость или слегка окрашенная жидкость [18].

Объект №2. Сульфацил – натрия, сульфацетамид, капли глазные 20% - 5 мл, производитель – ООО «ГРОТЕКС» Россия, г. Санкт-Петербург. Серия – 231221 [6].

Рисунок 2. Сульфацил – натрия, сульфацетамид, капли глазные 20% - 5 мл

Состав на 1 мл:

Действующее вещество: сульфацетамида натрия моногидрат (в пересчете на сульфацетамид натрия) 200 мг

Вспомогательные вещества: натрия тиосульфата пентагидрат 1 мг, 1 М раствор хлористоводородной кислоты до pH 8,0, вода для инъекций до 1 мл

Срок годности: 2 года

Форма выпуска: капли глазные 20%, по 0,5 или 1 мл в тюбик-капельницы из полиэтилена низкой плотности или полипропилена. По 0,5 или 1 мл в тюбик-капельниц в пакете из фольгированной пленки или без него. По 3 или 5 тюбик-капельниц или 1 пакету с тюбик-капельницами вместе с инструкцией по применению помещают в пачку из картона.

Описание: прозрачная бесцветная или окрашенная жидкость.

Условия хранения: капли хранят при температуре 25°C

Глазные капли приобретены в аптечной сети ООО «Азбука здоровья», которая имеет соответствующую лицензию, которая гарантирует качество лекарственных средств [1].

2.2. Качественный анализ

На первом этапе нашего исследования определили подлинность сульфацила – натрия в глазных каплях согласно ВФС 42-2974-97, ВФС 42-3436-99 «Сульфацетамид натрия капли глазные» ГФ XIV следующими реакциями:

Реакция на первичную ароматическую аминогруппу

Реакция образования азокрасителя

Методика: к 1 млпрепарата прилили 0,5 мл кислоты хлористоводородной разведенной и 0,5 мл раствора нитрита натрия. Полученный раствор прилили к 1 мл щелочного β-нафтола. Появилось вишнево – красное окрашивание [7].

Рисунок 3. Эффект реакции – вишнево-красное окрашивание

Реакция с раствором меди сульфата

Методика: к 1 млпрепарата прибавили 1 мл 10% раствора меди сульфата. Образовался осадок голубовато-зеленоватого цвета, не изменяющийся при стоянии [5].

Рисунок 4. Эффект реакции – осадок голубовато-зеленоватого цвета

Реакция окрашивания пламени

Методика: 0,5 мл препарата выпаривают и проводят реакцию окрашивания пламени. Соль при внесении в бесцветное пламя горелки окрасило его в желтый цвет [19].

Рисунок 5. Эффект реакции – пламя желтого цвета

Результаты этого исследования представлены в таблице 1.

блица 1

Результаты исследования глазных капель сульфацила – натрия по показателю «Подлинность»

№ п/п	Объекты исследования	Определяемое вещество	Подлинность	Вывод
1	Сульфацил – натрия, сульфацетамид, капли глазные 20% - 5 мл, производитель – АО «Производственная фармацевтическая компания Обновление», РФ, г. Новосибирск.	Сульфацил - натрия	+	Соответствует ФС
2	Сульфацил – натрия, сульфацетамид, капли глазные 20% - 5 мл, производитель – ООО «ГРОТЕКС» Россия, г. Санкт-Петербург.	Сульфацил - натрия	+	Соответствует ФС

Из таблицы видно, что оба объекта по показателю «Подлинность» выдержали испытания

2.3 Определение рН

Измерения величины pH проводили на pH-метре ИПЛ-301 «Мультитест» с постоянным измерением температуры (рисунок 6).

Рисунок 6. pH-метр ИПЛ-301 «Мультитест»

Методика. Прибор включали в сеть. Открывали заслонку. 100 мл раствора сульфацила - натрия наливали в стакан, куда опускали электроды. На дисплее отображался результат [9]. Результаты исследования по показателю «pH» представлены в таблице 2.

Таблица 2

Результаты исследования глазных капель сульфацила – натрия по показателю «pH»

Исследуемый объект	Значение pH фактическое	Значение pH согласно ФС	Вывод
Объект №1. Сульфацил – натрия,сульфацетамид, капли глазные 20% - 5 мл, производитель – АО «Производственная фармацевтическая компания Обновление», РФ, г. Новосибирск.	pH = 7,9	От 7,5 до 8,5	Соответствует требованиям ФС
Объект №2. Сульфацил – натрия, сульфацетамид, капли глазные 20% - 5 мл, производитель – ООО «ГРОТЕКС» Россия, г. Санкт-Петербург.	pH = 7,6	От 7,5 до 8,5	Соответствует требованиям ФС

Из таблицы видно, что для глазных капель - Сульфацил – натрия, сульфацетамид, капли глазные 20% - 5 мл, производитель – АО «Производственная фармацевтическая компания Обновление», РФ, г. Новосибирск рН = 7,9. А для глазных капель - Сульфацил – натрия, сульфацетамид, капли глазные 20% - 5 мл, производитель – ООО «ГРОТЕКС» Россия, г. Санкт-Петербург рН = 7,6, что соответствует требованиям ФС, согласно которой, оно принимает значение от 7,5 до 8,5

2.4. Количественное определение содержания сульфацила – натрия в глазных каплях методом спектрофотометрии

Для определения концентрации сульфацила – натрия в глазных каплях нами был выбран метод спектрофотометрии.

Этот метод отличается высокой специфичностью, чувствительностью, экспрессностью и позволяет проводить анализ не только однокомпонентных, но и многокомпонентных лекарственных средств без предварительного разделения с достаточной для фармацевтического анализа точностью. Метод спектрофотометрии позволяет проводить анализ достаточно быстро и используется для идентификации соединений, исследования состава, строения и количественного определения. Определение содержания компонентов в лекарственной форме проводят путем сравнения оптических плотностей испытуемого и стандартного растворов. Спектрофотометрия в видимой и УФ-области спектра относится к числу методов, получивших наибольшее распространение в анализе лекарственных средств [16].

Прибор, на котором производили измерения – спектрофотометр.

Рисунок 7. Спектрофотометр СФ-2000

Исследование проводили, соблюдая порядок работы на спектрофотометре:

Спектрофотометр включили за 15 минут до начала работы

Приготовили анализируемый раствор

Подготовили две кюветы с одинаковой толщиной. Одну кювету заполнили чистым растворителем, другую анализируемым раствором. Предварительно кюветы вымыли водопроводной водой, ополоснули дистиллированной водой и два раза анализируемым раствором. Кюветы заполнили выше метки, указанной на ее боковой стенке. Капли раствора с внешних поверхностей сняли, промокая фильтровальной бумагой.

Установили кюветы в держатели, затем в кюветное отделение спектрофотометра. Кювету с чистым растворителем установили в правый световой поток (поток сравнения), кювету с анализируемым раствором в левый световой поток (индикаторный поток). Работу выполнили аккуратно, не допустив попадания растворов в кюветное отделение. Во время записи спектра кюветное отделение закрыли

Запись спектров поглощения автоматически проводилось на специальном бланке, который закрепляется на барабане спектрофотометра. На бланке нанесена шкала абсорбций (0-2,5), шкала длин волн (400-750 нм), что позволяет измерять абсорбцию на любой аналитической длине волны, принимая масштаб 1 нм = 1 единице абсорбции.

Перед началом записи спектра перо самописца устанавливается на линии бланка, соответствующей 400 нм. При этом на шкале длин волн спектрофотометра также должно быть установлено 400 нм.

Установили первую или вторую скорость развертки спектра, включили тумблер «развертка спектра». Записали спектр поглощения раствора.

Выключили тумблер «развертка спектра», когда на шкале длин волн вновь появилось значение 400 нм.

Для записи следующего спектра кювету с раствором вынули из кюветного отделения, вылили раствор в специальную склянку для слива. Затем заполнили кювету следующим раствором и провели запись спектра согласно пунктам 3-5.

После окончания работы выключили спектрофотометр, бланк сняли только при положении барабана длин волн, соответствующем отметке 400 нм, и при поднятом самописце.

Кюветы помыли, ополоскали дистиллированной водой, привели рабочее место в порядок [15].

Приготовление стандартного образца сульфацила – натрия

В качестве оптимального растворителя для спектрофотометрического определения сульфацила – натрия была выбрана вода очищенная. В качестве аналитической длины волны для сульфацила – натрия мы выбрали длину волны 258 Нм. При данной длине волны наблюдается минимальная погрешность измерения величины измерения оптической плотности.

Оптимальным оптическим образцом сравнения для спектрофотометрического анализа глазных капель сульфацила – натрия является субстанция сульфацила – натрия.

Методика: отвесили 0,1 субстанции сульфацила – натрия на аналитических весах, поместили в мерную колбу, вместимостью 100 мл. Растворили в 50 мл воды очищенной и довели объем до метки тем же растворителем. Перемешали (раствор А). Взяли пипеткой из этой колбы 10 мл раствора А и поместили в колбу вместимостью 100 мл. Затем довели объем водой до метки (раствор Б).

Итак, мы получили 2 раствора:

1. 0,1% раствор А

2. 0,01% раствора

Для того, чтобы выбрать стандартный раствор субстанции сульфацила – натрия мы приготовили серию стандартных растворов. Из раствора Б готовили растворы разных концентраций. Для этого определенный объем раствора Б, поместили в колбу на 100 мл и довели объем водой очищенной до метки. Затем определили оптическую плотность каждого раствора на спектрофотометре при максимальной длине волны 258 Нм в УФ-области.

В спектрофотометр поместили 2 кюветы, в одной из которых вода очищенная, а в другой – раствор определенной концентрации.

Рисунок 8. Кюветы

Результаты измерения серии растворов субстанции сульфацила – натрия различной концентрации отражены в таблице 3.

Таблица 3

Результаты измерения серии растворов субстанции сульфацила – натрия различной концентрации

Концентрация	Длина волны	Оптическая плотность	Объем раствора Б до 100 мл	pH
0,00005%	258 Нм	0,054	0,5 мл	5,43
0,0001%	259 Нм	0,0835	1 мл	5,56
0,0002%	260 Нм	0,1346	2 мл	5,74
0,0004%	265 Нм	0,2654	4 мл	5,78
0,0006%	264 Нм	0,4257	6 мл	5,89
0,0008%	261 Нм	0,5538	8 мл	5,94
0,001%	261 Нм	0,6942	10 мл	6,02
0,0012%	258 Нм	0,7838	12 мл	6,03
0,0014%	258 Нм	0,8280	14 мл	6,10
0,0016%	258 Нм	0,9557	16 мл	6,14
0,0018%	257 Нм	1,0763	18 мл	6,19

 

Продолжение таблицы 3

По результатам полученных измерений построили калибровачный график (рисунок 9).

Рисунок 9. УФ – спектр раствора сульфацила - натрия

Из серии стандартных растворов взяли раствор той концентрации, оптическая плотность которой, укладывается в диапазон от 0,3 до 0,5. Поэтому раствором сравнения в исследовании служит 0,0006 % раствор субстанции сульфацила - натрия, оптическая плотность которого равна 0,4257.

Объект №1. Сульфацил – натрия капли глазные 20% 5 мл, производитель – АО «Производственная фармацевтическая компания Обновление», РФ, г. Новосибирск.

Методика: 1 мл глазных капель поместили в мерную колбу вместимостью 100 мл. Довели объем водой очищенной до метки (раствор А). 5 мл раствора А поместили в мерную колбу вместимостью 100 мл. Довели объем водой очищенной до метки (раствор Б). 6 мл раствора Б поместили в колбу вместимостью 100 мл. Довели объем водой до метки (раствор B).

В итоге мы получили 3 раствора:

1. 0,2% раствор A

2. 0,01% раствор Б

3. 0,0006% раствор В

Затем определили оптическую плотность раствора на спектрофотометре при максимальной длине волны 258 Нм в УФ – области. В спектрофотометр поместили 2 кюветы, в одной из которых вода очищенная, а в другой – 0,0006% раствор сульфацила – натрия.

Оптическая плотность испытуемого раствора = 0,43Нм

На приборе мы измерили оптическую плотность стандартного раствора и исследуемого раствора и теперь рассчитали концентрацию по следующей формуле:

, где

С_ст – концентрация раствора стандартного образца;

D_x – оптическая плотность испытуемого раствора;

D_ст – оптическая плотность раствора стандартного образца;

a – навеска испытуемого раствора;

100 – разведение в мл.

Затем рассчитали содержание сульфацила – натрия в граммах

20,23 – 100 мл

X – 5 мл

Для оценки качества лекарственных форм рассчитываем пределы допустимых норм отклонений:

20,0 - 100 мл

X – 5 мл

.

X = 1,0

1,0 – 100%

X - ± 6%

.

Находим допустимый интервал:

1,0 – 0,06 = 0,94

1,0 + 0,06 = 1,06 [2].

Сравнивая полученное значение сульфацила – натрия с интервалом допустимых норм отклонений, делаем выводы

Объект №2. Сульфацил – натрия СОЛОфарм капли глазные 20% 5 мл, производитель – ООО «ГРОТЕКС» Россия, г. Санкт-Петербург.

Методика: 1 мл глазных капель поместили в мерную колбу вместимостью 100 мл. Довели объем водой очищенной до метки (раствор А). 5 мл раствора А поместили в мерную колбу вместимостью 100 мл. Довели объем водой очищенной до метки (раствор Б). 6 мл раствора Б поместили в колбу вместимостью 100 мл. Довели объем водой до метки (раствор B).

В итоге мы получили 3 раствора:

1. 0,2% рaствор A

2. 0,01% раствора Б

3. 0,0006% раствор В

Затем определили оптическую плотность раствора на спектрофотометре при максимальной длине волны 258 Нм в УФ – области. В спектрофотометр помещаем 2 кюветы, в одной из которых вода очищенная, а в другой – 0,0006% раствор сульфацила – натрия.

Оптическая плотность испытуемого раствора = 0,4210 Нм

Рассчитали концентрацию глазных капель:

Рассчитали содержание сульфацила – натрия в граммах в глазных каплях:

19,78 – 100 мл

X – 5 мл

Для оценки качества лекарственных форм рассчитываем пределы допустимых норм отклонений:

20,0 - 100 мл

X – 5 мл

.

X = 1,0

1,0 – 100%

X - ± 6%

.

Находим допустимый интервал:

1,0 – 0,06 = 0,94

1,0 + 0,06 = 1,06

Сравнивая полученное значение сульфацила – натрия с интервалом допустимых норм отклонений, делаем выводы

Результаты исследования по показателю «Количественное определение» представлены в таблице 4.

Таблица 4

Результаты исследования глазных капель с сульфацилом – натрия по показателям «pH», «Подлинность», «Количественное определение»

№ п/п	Объекты исследования	Значение pH	Подлинность	Количественное определение (%)	Вывод
1	Сульфацил – натрия, сульфацетамид, капли глазные 20% - 5 мл, АО «Обновление», РФ, г. Новосибирск.	7,9	+	20,23%	Соответствует ФС
2	Сульфацил – натрия, сульфацетамид, капли глазные 20% - 5 мл, ООО «ГРОТЕКС» Россия, г. Санкт-Петербург.	7,6	+	19,78%	Соответствует ФС
Согласно ФС:				19% - 21%

Таким образом, результаты нашего исследования качества глазных капель с сульфацилом – натрия показали, что оба объекта выдержали испытания показателям «pH», «Подлинность», «Количественное определение», что гарантирует гарантируют качество данных препаратов и безопасность их применения.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Методом контент-анализа был изучен теоретический материал и нормативная документация по физико-химическим методам анализа. Было установлено, что в основу классификации физико-химических методов анализа положена природа измеряемого физического параметра анализируемой системы, величина которого является функцией количества вещества. В соответствии с этим все физико-химические методы делятся на три большие группы: электрохимические, хроматографические, оптические. [10]

При рассмотрении теоретического материала было выявлено, что физико-химические или инструментальные методы анализа основаны на измерении с помощью приборов физических параметров анализируемой системы, которые возникают или изменяются в ходе выполнения аналитической реакции.

Изучены требования, достоинства и недостатки физико-химических методов анализа. Установлено, что главными их достоинствами являются высокая специфичность, чувствительность, экспрессивность, а также, возможность выполнения этими методами анализа двух и даже трех компонентных смесей веществ без предварительного разделения с достаточной для фармацевтического анализа точностью. Недостатками являются дороговизна используемых приборов и необходимость применения эталонов.

Проведен анализ качества глазных капель с сульфацилом – натрия разных производителей по показателям «pH», «Подлинность», «Количественное определение». [2]

Установлено:

По показателю «Подлинность» 1. Сульфацил – натрия, сульфацетамид, капли глазные 20% - 5 мл, АО «Обновление», РФ, г. Новосибирск и 2. Сульфацил – натрия, сульфацетамид, капли глазные 20% - 5 мл, ООО «ГРОТЕКС» Россия, г. Санкт-Петербург, выдержали испытания, что соответствует требованиям ФС.

Значение «pH» для первого объекта составило 7,9, а для второго объекта 7,6, что соответствует требованиям ФС, согласно которой оно принимает значение от 7,5 - 8,5

По показателю «Количественное определение» оба объекта выдержали испытания. Концентрация для сульфацил – натрия, сульфацетамид, капли глазные 20% - 5 мл, АО «Обновление», РФ, г. Новосибирск равна 20,23%, а для сульфацил – натрия, сульфацетамид, капли глазные 20% - 5 мл, ООО «ГРОТЕКС» Россия, г. Санкт-Петербург 19,78%, согласно ФС от 19% - 21%.

Результаты нашего исследования гарантируют качество данных препаратов и безопасность их применения.

ЛИТЕРАТУРА

1. Федеральный закон Российской Федерации от 24 марта 2010 года №61 – «Об обращении лекарственных средств»

2. Приказ Минздрава России от 26.10.2015 N 751н «Об утверждении правил изготовления и отпуска лекарственных препаратов для медицинского применения аптечными организациями, индивидуальными предпринимателями, имеющими лицензию на фармацевтическую деятельность»

3. Приказ Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (Минздравсоцразвития РФ) от 23.08.2010 N 706н «Об утверждении Правил хранения лекарственных средств»

4. Аксенова А.П. Руководство к лабораторным занятиям по фармацевтической химии/ Э.Н.Аксенова, О.П.Андрианова, А.П.Арзамасцев и др.; Под ред. А.П.Арзамасцева – М.:Медицина, 2012. – 352 с.

5. Алесковский В.Б. Физико-химические методы анализа. Практическое руководство/В.Б.Алесковский, В.В.Бардин, М.И.Булатов – Л.: Химия, 2015. – 376 с.

6. Глубоков Ю.М. Аналитическая химия/ Ю.М.Глубоков, В.А.Головачева, Ю.А.Ефимова – М.Академия, 2017. – 215 с.

7. Ермилова Е.В. Анализ лекарственных средств: учебное пособие. /Е.В.Ермилова, Т.В.Кадырова, В.В.Дудко – Томск: СибГМУ, 2015 – 49 с.

8. Краснов, Е.А. Курс лекций по фармацевтической химии: Учебное пособие/Е.А.Краснов., Е.В.Ермилов – Томск: СИБГМУ, 2016. – 126 с.

9. Машковский М.Д. Лекарственные средства: пособие для врачей. – М: Новая волна, 2017 – 1216 с.

10. Никитина Н.Г. Аналитическая химия и физико-химические методы анализа: Учебник и практикум для академического бакалавриата/ Н.Г.Никитина, А.Г.Борисов, Т.И.Хаханина; Под ред. Н.Г.Никитиной. – 4-е изд., перераб. и доп. – Москва: Издательство Юрайт, 2018. – 394 с.

11. Новиков О.О. Контроль качества лекарственных средств: учеб. пособие/ О.О.Новиков, Д.И.Писарев – Ростов н/Д: Феникс, 2018 – 446-448 с.

12. Плетёнова Т.В. Контроль качества лекарственных средств: учебник/ Т.В.Плетёнова, Е.В.Успенская / под. Ред. Т.В.Плетёновой – М. :ГЭОТАР – Медиа, 2019

13. Farm.ru [Электронный ресурс] Режим доступа: https://farmf.ru/prochee/spektrofotometriya-v-uf-i-vidimoj-oblastyah-ofs-1-2-1-1-0003-15/, свободный

14. Studopedia.ru [Электронный ресурс] Режим доступа: https://studopedia.ru/10_188390_sushchnost-spektrofotometrii.html , свободный

15. Farm.ru [Электронный ресурс] Режим доступа: https://farmf.ru/lekcii/lekciya-6-kolichestvennyj-analiz-lekarstvennyx-sredstv/ , свободный

16. Io.udsu.ru [Электронный ресурс] Режим доступа: http://io.udsu.ru/pub/docs/stud/62116.pdf , свободный

17. lkmprom.ru [Электронный ресурс] Режим доступа: http://lkmprom.ru/analitika/spektrofotometricheskiy-metod---zadachi-i-primenen/, свободный

18. Справочник лекарственных средств. [Электронный ресурс] Режим доступа: https://www.rlsnet.ru., свободный

19. Государственная фармакопея Российской Федерации XIII издание [Электронный ресурс] Режим доступа: https://femb.ru/record/pharmacopea13, свободный

20. Государственная фармакопея Российской Федерации XIV издание [Электронный ресурс] Режим доступа: https://femb.ru/record/pharmacopea14, свободный

Код для цитирования: Скопировать