XIV Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2022

Консервация (лат. conservatio, сохранение) - действия, направленные на долгосрочное сохранение объектов (напр. пищевых продуктов, древесины, предприятий, исторических памятников и др.).

Для сохранения жизнеспособности вирусов на длительное время используют такие методы как:

- хранение кусочков паталогического материала в глицерине;

- замораживание вирусов при температуре ниже кристаллизации воды;

- лиофилизация.

Сущность всех методов сводится к вытеснению молекул воды из вируссодержащего материала под воздействием физических или химических факторов.

Для эффективного сохранения инфекционных свойств вирусов, следует учитывать их особенности:

Многократные процессы замораживания, оттаивания, лиофильной сушки и восстановления образцов со временем приводят к понижению инфекционности патогенных биологических агентов (ПБА), поэтому объемы сохраняемых образцов должны быть небольшими.

Для консервации используют препарат, содержащий наибольший титр вируса;

Вирусы сохраняют свои свойства в нейтральной или слабощелочной среде рН 7,0 – 8,0.

На продолжительность сохранения влияние оказывает не только температура, но и химический состав среды. При наличии в среде белков повышается устойчивость вирусов при замораживании.

Хранение вируссодержащего материала в глицерине – самый простой, удобный и экономически выгодный способ сохранения вирусов. Кусочки тканей и органов, пораженных ПБА помещают в стерильную, герметичную посуду и заливают 50%-ным фосфатно-буферным раствором глицерина. Хранят при температуре не выше 4°С, инфекционность ПБА сохраняется до одного года.

Криоконсервация – способ консервации вирусов с помощью низких температур, основанный на кристаллизации воды. Готовят вируссодержащую суспензию и очищают ее с помощью центрифугирования 3000 об/мин, отделяют надосадочную жидкость. Существует несколько способов криконсервации:

Хранение надосадочной жидкости, содержащей ПБА в холодильниках при температуре 4°С или морозильных камерах при температуре -20°С;

Хранение вируссодержащего образца с добавлением протекторов в специальных морозильных камерах при температуре -70°С. Каждая камера оборудована датчиком, оповещающем в случае повышения температуры;

Хранение вируссодержащего материала с использованием азотных кислот. Для этого надосадочную жидкость с протектором заливают в криотрубки, которые впоследствии запечатываются в специальные трубки или эквиваленты. Последние используют для предупреждения перекрестного заражения, а также воздействия на оператора вируссодержащих аэрозолей при извлечении криотрубок из азота.

Лиофилизация или лиофильная сушка – процесс высушивания вируссодержащего материала в вакууме из замороженного состояния. Сущность лиофилизации складывается из следующих операций:

1) подготовка ПБА (патогенный биологический агент) суспензии к лиофилизации;

2) выбор защитной среды;

3) режим высушивания;

4) остаточная влажность и укупорка ампул.

Защитные среды при лиофилизации играют роль буфера, обеспечивающего равномерное обезвоживание в процессе сушки всех компонентов, давая защитный эффект при воздействии на ПБА экстремальных факторов замораживания, лиофилизации и последующего хранения, что достигается путем лиофилизации физико-химической структуры суспензии с помощью защитной среды, не образующей с ПБА химически прочных связей.

Высушенный вирус запаивают в ампулах и в таком состоянии хранят несколько лет при температурном оптимуме 4...18°С. Наиболее длительно вирус сохраняется при 4 °С и ниже [1, 2,3].

Литература

1. Бекер, М. Е. Торможение жизнедеятельности клеток / М. Е. Бекер, А. И. Рапопорт, Л. В. Калакуцкий [и др.]. - Рига : Зинатне, 1987. - 240 с.

2. Госманов, Р. Г. Ветеринарная вирусология : учебник для вузов / Р. Г. Госманов, Н. М. Колычев, В. И. Плешакова. — 7-е изд., стер. — Санкт-Петербург : Лань, 2021. — 500 с.

3. (1999) Methods for long-term virus preservation by Ernest A Gould Natural Environment Research Council Institute of Virology and Environmental Microbiology, Mansfield Road, Oxford OX1 3SR – 57-66

Код для цитирования: Скопировать