XIII Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2021

Эпизоотологические данные

Источник возбудителя инфекции - больные поросята и свиноматки-бактерионосители. Патогенные микроорганизмы обнаруживают на слизистых оболочках носовой полости клинически здоровых свиней. Возбудителя выделяют из носовой слизи, мокроты при кашле, экссудата из глаз, фекалий Заболеваемость гемофилезным полисерозитом молодняка свиней составляет 20-60%. Чаще болезнь регистрируют среди поросят подвергшихся воздействию неблагоприятных факторов внешней среды. Поросята заболевают обычно через 8-15 дней после отъема от свиноматок. Однако нередки случаи болезни их под матками до 25-дневного возраста. Такие поросята представляют особую опасность как источник возбудителя инфекции при переводе их на групповое содержание. В России по данным о заболеваемости свиней инфекционными болезнями заболеваемость гемофилезом составляет 4,2%, летальность - 76,4%, а количество неблагополучных пунктов - 0,7%. Чаще всего заболевание регистрируется на крупных фермах и комплексах, поэтому ее еще называют болезнью комплексов.

Заражение происходит аэрогенно, возможно и через корм сильно контаминированный возбудителем. Болезнь проявляется во все сезоны года с обострением в холодное время.

Кроме эпизоотологических и патологоанатомических данных, для постановки диагноза проводят лабораторные (бактериологические) исследования патологического материала, отобранного от павших или вынужденно убитых поросят, а также ставят биопробу. Материал для лабораторного исследования берут не позднее чем через 4-6 ч после смерти от 2-3 трупов поросят, павших с признаками острого полисерозита и не подвергавшихся антибиотикотерапии. Поверхность кожи в области разреза обрабатывают дезинфицирующим раствором и стерильным инструментом вскрывают брюшную и грудную полости. Затем стерильным шприцем или пастеровской пипеткой набирают экссудат и из перитонеальной, плевральной и перикардиальной полостей и переносят в одну стерильную пробирку или флакон. В эту же пробирку(флакон) вносят соскобы, сделанные стерильным скальпелем с поверхности пораженных серозных оболочек. От каждого животного патологический материал помещают в отдельную пробирку, закрывают резиновой пробкой, маркируют и в термосе со льдом нарочным отправляют в ветеринарную лабораторию.

Исследование патологического материала заключается в выделении чистой культуры Н. parasuis и складывается из микроскопии мазков и патологического материала, выделения культур возбудителя на специальных средах, их идентификации и определения патогенности на морских свинках.

Доставленный патологический материал суспендируют непосредственно в пробирке (флаконе). Из суспензии готовят мазки, высушивают их на воздухе, фиксируют над пламенем горелки, окрашивают по Граму и Гинсу и микроскопируют. В мазках возбудитель имеет вид мелких, полиморфных, грамотрицательных палочек, диплобактерий, нитей или коротких цепочек.

Высевы на питательные среды должны быть проведены не позднее 24 часов после взятия патологического материала. Две-три капли суспензии из экссудата и соскобов с серозных оболочек наносят на поверхность предварительно подсушенного кровяного мясопептонного агара в чашке Петри. Стерильным стеклянным шпателем материал распределяют по всей поверхности агара, а затем дробно рассеивают на 3 чашки с питательной средой. После 20-30 минутного подсушивания бактериологической петлей делают крестообразный посев штрихом по диаметру чашки культуры не гемолитического штамма белого стафилококка или кишечной палочки («Баккормилка»). Посевы инкубируют в аэробных условиях при 37-38 градусах Цельсия в течение 24 часов.

Субкультуры не гемолитических штаммов белого стафилококка или эшерихий поддерживают в лаборатории. Для исследований используют агаровую или бульонную культуры, которые хранят в холодильнике при 4-8 градусах Цельсия не более 10 дней.

На кровяном МПА рост гемофильных бактерий наблюдается в зоне, прилегающей к культуре «баккормилки», в виде мелких (0,1-0,2 мм), правильной круглой формы не гемолитических колоний с гладкой, выпуклой, блестящей поверхностью, слизистой консистенции. Сателлиты рост гемофильных бактерий около «баккормилки» обусловлен диффузией в агаровую среду У - фактора, выделяемого культурой кишечной палочки или стафилококка. Микроскопически видимые колонии гемофильных бактерий растут не далее 1-2 сантиметра от штриха «баккормилки».

При обнаружении в посевах сателлитах не гемолитических колоний из них делают мазки, которые окрашивают по Граму и Гинсу. В мазках из культуры Н. parasuis имеет вид мелких (0,2-0,5 мкм) грамотрицательных палочек и нитей различной длины. При окраске по методу Гинса в мазке на темном фоне находят мелкие, палочковидные(нитевидные) бактерии красного цвета, окруженные узкой светлой зоной (капсула).

Из 3-4 сателлитах не гемолитических колоний бактерий, имеющих типичную для Н. parasuis морфологию, делают пересевов чашки Петри а шоколадный агар, на 10%-ный сывороточный МПА последующим посевом «баккормилки». Одновременно делают высев культур на тот же сывороточный МПА без «баккормилки». Посевы инкубируют 24 часа при 37-38 градусах по Цельсию.

Культуры, не обладающие гемолитических свойствами, не растут на сывороточном МПА, но дают рост на шоколадном и на сывороточном МПА с «баккормилкой», относят к виду Н. parasuis.

При росте в жидких средах с ростовыми добавками стафилококка гемофильные бактерии образуют умеренную опалесценцию и продуцируют эндотоксин. Гемолизин и урезу не образуют. В мазках, приготовленных из колонии и окрашенных по методу Гинса, на темном фоне видны мелкие палочковидные (нитевидные) бактерии красного цвета, окруженные узкой светлой зоной (капсула).

Различают 4 серологических варианта H parasuis –A, B, C, D, из которых заболевание чаще взывают сероварианты D и A. Патогеннные для поросят и морских свинок при внутрибрюшинном, интратрахеальном, интраназальном заражении. Возбудитель чувствителен к антибиотикам и другим антибактериальным препаратам. Растворы дезинфицирующих средств (гидроксид натрия, формальдегид, хлорсодержащие препараты) действуют на микробы губительно.

Биологическое исследование для определения патогенных свойств Н. parasuis проводят на морских свинках. Для этой цели исследуемую культуру высевают на шоколадный агар и выращивают при 37-38 градусах по Цельсию в течение 24 часов. Выращенную культуру смывают стерильным 0,85%-ным раствором поваренной соли и доводят концентрацию бактериальной суспензии до 20 ед. мутности по оптическому стандарту. Эту суспензию в дозе 1 мл вводят внутрибрюшинно трем морским свинкам массой 300-350 г.Наблюдение за зараженными животными ведут в течение 5 суток.

Культуру признают патогенной в случае гибели одной или более морских свинок из перитонеального и плевральноко экссудатов, а также из печени, селезенки и крови сердца каждой павшей морской свинки делают посевы на кровяной или сывороточный МПА в чашках Петри с «баккормилкой». Наличие в посевах роста сателлитных колоний бактерий с типичными морфологическими и тинктоиальными свойствами свидетельствует о выделении исходной культуры Н. parasuis.

Лабораторный диагноз на гемофилезный полисерозит считают установленным при выделении из патологического материала культуры Н. parasuis, патогенной для морских свинок.