ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА АСПЕРГИЛЛЕЗА ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ - Студенческий научный форум

XIII Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2021

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА АСПЕРГИЛЛЕЗА ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ

Галимова А.Р. 1, Ильясова З.З. 1
1ФГБОУ ВО Башкирский ГАУ, факультет биотехнологий и ветеринарной медицины
 Комментарии
Текст работы размещён без изображений и формул.
Полная версия работы доступна во вкладке "Файлы работы" в формате PDF

Диагностика аспергиллеза

Патологоанатомические данные при хроническом аспергиллезе могут сказать существенную помощь в постановке диагноза на аспергиллез в хозяйстве.

Патологоанатомический диагноз. Острый аспергиллез птицы характеризуется эксудативной пневмонией; отечностью легочной ткани, иногда на поверхности и на разрезе обнаруживаются узелки сероватого цвета, в центре узелков - некроз. В воздухоносных путях - гнойно-катаральный эксудат.

Хронический аспергиллез птицы характеризуется образованием узелкового процесса. Гранулематозные образования чаще плотные на ощупь, на разрезе состоят из концентрических наслоений соединительной ткани и казеозной массы. В просветах бронхов, трахее, воздухоносных мешках обнаруживается развитие гриба - мицелия, тогда и органов спороношения, окрашенных в зависимости от вида возбудителя в зеленый различных оттенков или черный цвет.

При появлении заболевания и гибели животного с клиникой и данными патологоанатомического вскрытия, подозрительными на аспергиллез, для микологического исследования в лабораторию направляют трупы птиц.

Микроскопия. При получении лабораторией трупа производят вскрытие его, микроскопическое исследование и высевы из подозрительных гранулематозных или воспалительных очагов для выделения возбудителя в чистую культуру.

Свежие неокрашенные препараты из эксудата, гранулематозных очагов, предварительно обработанных в капле 10 % раствора едкого натрия или в лактофеноле, исследуют под покровным стеклом. В препаратах обнаруживают многочисленные септированные гифы мицелия, иногда и органы спороношения.

Для окраски препаратов из пораженных очагов используют лактофуксин или хлопчатобумажную синь. Гранулематозную ткань, предварительно расщепленную, гной или соскоб помещают на предметное стекло, покрывают покровным стеклом и под него подводят несколько капель красителя. Через 3 - 5 минут иглой осторожно придавливают покровное стекло и рассматривают препарат при среднем увеличении микроскопа.

При окраске лактофуксином фон препарата розовый, мицелий гриба бледно-голубой. Хлопчатобумажный краситель окрашивает мицелий в синий цвет.

Лактофуксин готовят следующим образом: 0,1 г кислого фуксина растворяют в 100 мл молочной кислоты. Окраска длится 3 - 5 минут. Хлопчатобумажная синь представляет собой 1 % водный или молочнокислый раствор. Окрашивание длится 5 секунд.

Культивирование. Посевы производят на агар Чапека или агар Сабуро в пробирках. При наличии гранулематозных очагов посевы производят в бактериологические чашки. Небольшие кусочки пораженной ткани обжигают над пламенем горелки, из середины вырезают стерильными ножницами кусочки ткани, которые и раскладывают на поверхности агаровой питательной среды. Культивируют при температуре 37°.

Патологоанатомические данные, наличие типичных колоний в культуре и характерная микроскопическая картина в препаратах позволяют правильно поставить диагноз на аспергиллез.

Лабораторная диагностика аспергиллеза заключается в микроскопическом исследовании патологического материала с целью обнаружения мицелия гриба и выделения из пораженных органов чистой культуры возбудителя методом культивирования на средах Сабуро, Чапека, Сусле-агаре и др. Кроме того, исследуют корма и подстилку, овоскопируют яйца.

Для подтверждения патогенности выделенных культур проводят экспериментальное заражение лабораторных животных (кроликов, морских свинок и белых мышей), что приводит к развитию генерализованного процесса с типичным поражением органов дыхания, почек, сердца. При вскрытии в этих органах наблюдают множество мелких узелков с интенсивным развитием гриба.

Для диагностики аспергиллеза применяют реакции иммуноэлектрофореза, тест ELISA. Также для этих целей можно использовать РИФ, РП и РСК. Положительно зарекомендовали себя также аллергические пробы (рисунок 1).

Рисунок 1- Лабораторная диагностика аспергиллеза

Культуральные свойства. Колонии гриба Аспергиллюс фумигатус появляются на 2 - 3-й день. На агаре Чапека они бархатистые с выраженным воздушным мицелием, голубоватые, зеленые, с возрастом темнеющие. Конидиеносцы густо скученные, с перегородками или без них, на верхушке с бутыльчатым вздутием до 20 - 30 микрон, в диаметре, в верхней части несущие одноярусные конидии, расположенные параллельно оси конидиеносца. Конидии в массе темно-зеленые, шаровидные, 2,5 - 3 микрон в диаметре. Цепочки конидий склеены в колонки.

Рисунок 2 - Культура Aspergillus fumigatus

Биохимические и токсигенные свойства возбудителя. Aspergillus spp. имеют ряд особенностей, способствующих выживанию гриба в организме хозяина и распространению в тканях и органах. К таким факторам патогенности относят способность к росту при температуре наличие адгезионных молекул, способствующих фиксации клеток гриба на тканях хозяина, продукцию различных ферментов (фосфолипаз, протеаз) и токсинов (афлатоксина, фумагиллина и пр.), оказывающих повреждающее действие на ткани. Для Aspergillus spp. характерна выраженная ангиоинвазивность, что при развитии инфекции приводит к формированию инфаркта и некроза окружающих тканей с последующей гематогенной диссеминацией. Некоторые виды Aspergillus способны ингибировать функцию компонентов иммунной системы. Например, A. fumigatus продуцирует каталазу, маннитол и меланин, которые нейтрализуют окислительные продукты фагоцитов и сдерживают «респираторный взрыв», препятствуя за счет этого киллингу конидий гриба фагоцитами. Некоторые штаммы A. fumigatus продуцируют глиотоксин - иммуносупрессивный микотоксин, который вызывает апоптоз антигенпредставляющих клеток и ингибирует фактор ядерной транскрипции NF-kB. В результате нарушается функция нейтрофилов и макрофагов: блокируется фагоцитоз и транскрипция медиаторов воспаления. В экспериментах показано, что штаммы A. fumigatus, которые не производят глиотоксин, обладают меньшей вирулентностью.

Антигенное строение возбудителя. Антигенное строение микробной клетки. Обладая сложным химическим строением, бактериальная клетка представляет собой целый комплекс антигенов. Антигенными свойствами обладают жгутики, капсула, клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана, рибосомы и другие компоненты цитоплазмы, а также различные продукты белковой природы, выделяемые бактериями во внешнюю среду, в том числе токсины и ферменты. В связи с этим различают следующие основные виды микробных антигенов: соматические, или

О-антигены; жгутиковые, или Н-антигены; поверхностные, или капсульные К-антигены.

Для медицинской микробиологии наибольший интерес представляют антигенные свойства бактерий, токсинов и вирусов. Результаты их изучения используются в практике получения высокоэффективных иммуногенных препаратов, а также для совершенствования методов идентификации возбудителей болезней.

Токсикологический анализ (биопроба):

готовят вытяжки (экстракты) из пораженного корма или выросшей культуры эфиром или хлороформом. Вытяжку выпаривают в водяной бане при 45-50С под тягой;

токсичность определяют алиментарно, путем скармливания корма в течение трех дней белым мышам, морским свинкам, кроликам, цыплятам и др.;

токсичность определяют путем постановки кожной пробы на кроликах: на свежевыбритый участок (4-5 см2) втирают вытяжку. При положительной реакции через 1-3 дня отмечается гиперемия, отечность и некроз;

токсичность определяют на куриных эмбрионах, простейших, аквариумных рыбках.

Биопроба. Метод применяют для подтверждения патогенности выделенных культур аспергилл. Кроликам, морским свинкам или белым мышам в/вводят суспензию спор грибов, что вызывает развитие генерализованного процесса с типичным поражением органов дыхания, почек, сердца. При вскрытии обнаруживают узелки. Птице скармливаю корм, зараженный спорами аспергилла или, проводят ингаляцию спор в дыхательные пути.

Дифференциальная диагностика. Дифференциальный диагноз проводят с другими микозами (гистоплазмоз, кандидоз), туберкулезом, абсцессами легких, пневмонией, хроническим бронхитом.

Патологоанатомические изменения. В период острого течения аспергиллеза у павших или вынужденно убитых животных легкие отечны. На плевре, миокарде, селезенке, серозной оболочке тонкого отдела кишечника кровоизлияния. В легких, реже в печени и почках, находят серовато-белые или сероватые узелки величиной от макового зерна до горошины.

При подостром течении болезни обнаруживают гранулематозные узелки, возникающие в результате лобулярной пневмонии или перибронхита. В центре узелков видны некротические массы, в которых находят гифы мицелия.

Хроническое течение аспергиллеза характеризуется образованием в легких белых или желтовато-белых плотных узелков, окруженных соединительнотканной капсулой.

При распаде гранулем в легких образуются каверны. Нередко можно наблюдать серозное или серозно-фибринозное воспаление бронхов. При этом бронхи полностью забиты фибринозными массами, проросшими гифами гриба. Воздухоносные мешки растянуты фибринозным экссудатом, стенки уплотнены, иногда покрыты пушистым налетом, образованным сиороносящими колониями аснергил- лов. Слизистые оболочки желудочно-кишечного тракта катарально воспалены.

Таким образом, в диагностике, лечении и профилактике аспергиллеза имеются многие, оставшиеся без ответа и нерешенные эпидемиологические, лабораторные и клинические вопросы. Необходимы более совершенные диагностические тесты как для более точного определения больных инвазивным аспергиллезом, так и для более раннего начала лечения. Доступность более активных и лучше переносимых антифунгальных препаратов значительно улучшает лечение пациентов, входящих в группу риска аспергиллезной инфекции. Тем не менее, остаются критические провалы в знаниях относительно лечения аспергиллеза, включая применение комбинированный терапии, тестов для раннего определения этой инфекции, оценки ответа, лечения больных с тяжелыми или рефрактерными поражениями и определения популяции пациентов, у которых наиболее успешной тактикой может быть профилактика.

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК

Масимов Н.А., Горбатова Х.С., Калистратов И.А. Инфекционные болезни пушных зверей. 1-е изд. изд. Москва: Лань, 2013.

https://www.krasotaimedicina.ru/diseases/infectious/aspergillosis

https://helpiks.org/6-7456.html

https://studme.org/107015/geografiya/aspergillez

https://findpatent.ru/patent/223/2230567.html

http://www.cnshb.ru/AKDiL/0006/base/RA/002921.shtm

https://medbe.ru/materials/infektsionnye-zabolevaniya/aspergillez/

Просмотров работы: 66