XIII Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2021

Определение органического вещества в природных объектах, в частности, в почвах, всегда было важной и актуальной задачей. Органическое вещество почв играет главную роль в функционировании почвы как основного элемента экосистемы. Известно, что гумус составляет приблизительно 90% органического вещества почвы и является важным критерием при оценке её плодородия. Гумусовые кислоты являются наиболее активной и реакционноспособной компонентой гумуса, активно участвующей в химических процесса, протекающих в экосистемах. Компонентный состав органического вещества почв – динамический показатель, отражающий влияние экологических условий на геохимический цикл углерода экосистемы. Обычно определение органических веществ основывается на хорошо развитых спектральных и других инструментальных методах разделения и определения вещества. В данной работе рассмотрен метод определения гумусовых веществ - ИК-Фурье спектроскопия, также большое внимание уделено методам выделения гумусовых кислот.

Введение.

Определение гуминовых веществ в почвах играет важную роль в биологии, экологии и природопользовании. Не смотря на то, что изучение гуминовых веществ ведется довольно давно, до сих пор есть некоторые споры и выявляются противоречивые факты в этой области.

Гуминовые вещества - это высокомолекулярные темноокрашенные органические соединения природного происхождения, образующиеся при разложении растительных и животных остатков под влиянием микроорганизмов и абиотических факторов среды. Механизмы образования гуминовых веществ могут быть немного различными, в зависимости от географического, климатического, физического и биологического обстоятельств. Их содержание в почвах составляет 60-80% от органического вещества. Классификация ГВ основана на различии в растворимости в кислотах и щелочах. Гумусовые вещества подразделяются на 3 составляющие:

Гуминовые кислоты- полидисперсная группа высокомолекулярных азотсодержащих оксикарбоновых кислот, извлекаемых из почвы растворами щелочей и некоторыми другими растворителями с образованием темноокрашенных растворов - гуматов натрия, аммония, калия. В зависимости от концентрации и типа почвы растворы гуматов имеют окраску от бурой до черной. Из растворов гуматов гуминовые кислоты легко осаждаются кислотами в виде амфорфного осадка. Они содержат 50-62% углерода, 2,8-6% водорода, 31-40% кислорода, 1,7-6% азота, серу, фосфофор и др. элементы. Непостоянство элементного состава гуминовых кислот объясняется гетерогенностью, возрастом и условиями образования. Средневесовые молекулярные массы гуминовых кислот составляют от 10-20 тыс. до 150-200 тыс. атомных единиц массы. Средние значения близки к 60-70 тыс. а.е.м. Основная масса гуминовых кислот присутствует в почвах в виде нерастворимых в воде соединений с ионами кальция, алюминия, железа и/или их гидроксидами.

Фульвокислоты - соединения желтой или красной окраски, которые остаются в растворе после подкисления щелочной вытяжки из почвы. Они также представлены в виде гетерогенной и полидисперсной группой высокомолекулярных, азотсодержащих органических кислот. Содержат азота и углерода меньше, а кислорода и водорода больше, по сравнению с гуминовыми кислотами. Средневесовая молекулярная масса фульвокислот находится в пределах от 5-7 до 12-15 тыс. а.е.м.

Гумин - нерастворимая ни в щелочах, ни в кислотах фракция.

Гуминовые кислоты и фульвокислоты объединяют под общим названием гумусовые кислоты. Гумусовые кислоты являются самой реакционоспособной частью гумусовых веществ, которые участвуют в процессах, протекающих в экосистемах. [6]

Гипотезы строения гумусовых веществ

Серией многочисленных экспериментов было установлено, что гумусовые вещества представляют собой соединения стохастического характера. Такое строение обусловлено процессом их образования. Образование гуминовых веществ осуществляется по принципу естественного отбора наиболее устойчивых к разложению структур. Но общее для всех гумусовых веществ - это наличие ароматического углеродного скелета, замещенного алкильными и функциональными группами, в которых преобладают карбоксильные, гидроксильные, метоксильные, и периферической части, содержащей полисахариды и полипептидные единицы.

Основным способом использования информации об элементном, молекулярномассовом и структурно-групповом составе для описания структуры ГК является расчет средних структурных формул. В данной работе мы рассмотрим лишь несколько гипотез строения гумусовых кислот. Одна из них принадлежит Кляйнхемпелю (рис.1)

Рис.1. Гипотетический структурный фрагмент гумусовых кислот почв (Кляйнхемпель, 1970г.)

Данный структурной фрагмент Кляйнхемпеля сохраняет детальное описание структуры гумусовых кислот и показывает статистический характер. Возможно, данная формула наиболее полно отражает набор структурных единиц гумусовых кислот, но она, как и многие другие гипотезы, подвергается критике, в связи тем, что в структуре указано большое количество азота.

С развитием представлений о специфике строения гумусовых кислот, в 1990 году

Орловым была предложена блок-схема структурной ячейки. (рис.2)

Рис. 2. Строение структурного фрагмента гумусовых кислот почв (Орлов, 1990г.)

Гипотеза Орлова на сегодняшний день является наиболее удобной. Она представляет собой минимальную часть молекулы, которая содержит в себе все важнейшие структурные единицы. На блок-схеме приводятся фрагменты негидролизуемой части и способы их соединения, гидролизуемая часть показана в виде структурных компонентов, характер и количество которых разнится. Гипотеза объясняет построение молекул, окраску и др. свойства гумусовых кислот. Но несмотря на удобность описания общей характеристики статистического строения гумусовых кислот, блок-схемы не позволяют описывать и прогнозировать определенные механизмы гумусовых кислот в химических превращениях. Из-за этого многие исследования направлены на попытки перехода к молекулярному уровню описания структуры. [5]

Основные биосферные функции

Наличие в гумусовых кислотах таких групп, как карбоксильная, гидроксильная, карбонильная с присутствием ароматических структур обеспечивает способность гумусовых кислот вступать в ионные и донорно-акцепторные взаимодействия, образовывать водородные связи, участвовать в сорбции. Гумусовые кислоты хорошо связывают воду, способны к ионному обмену, образуют комплексы с металлами и аддукты с различными классами органических веществ. Из-за ряда этих свойств, они выполняют множество биосферных функций, таких как:

1)Аккумулятивная. Накопление и переход элементов питания в растения, сохранение плодородия почв на протяжении долгого времени.

2)Транспортная. Миграционная способность комплексных соединений гумусовых кислот.

3)Регуляторная. Регулирование теплового режима почвы, формирование почвенной структуры, участие процессов ионного обмена между твердой и жидкой фазами грунта, растворении минеральных компонентов и высвобождение труднодоступных элементов, регуляция выхода углекислого газа.

4)Протекторная функция. Связывание и вытеснение из процессов природной миграции токсичные и радиоактивные элементы, формирование комплексов с пестицидами, углеводородами, останавливая их попадание в природные среды.

5)Физиологическая функция. Повышение урожайности растений, рост производительности животноводческих хозяйств.

Диагностика идентификации гумусовых кислот

Идентификация гумусовых кислот имеет свои отличия от классических методов определения органических соединений. Для идентификации гумусовых кислот осовершенно непригодны такие методы, как определение температуры плавления (гумусовые кислоты разлагаются, не плавясь), определение молекулярных масс (из-за их полидисперсности и высокомолекулярности), нельзя воспользоваться показателями преломления, эмпирическими формулами с целочисленными значениями (вследствие переменного состава).

Многие исследования опираются на способы выделения гумусовых кислот, а именно – на их растворимость в водных щелочных, кислотных растворах и этаноле. Однако, способ выделения не может быть явным диагностическим признаком вещества. Кроме всего прочего, возникает проблема в отождествлении разных исследований, включающих выделение гумусовых, это связано с большим количеством методов выделений, которые на сегодняшний день не имеют четкой стандартизвции. В данной работе мы попытались выбрать наиболее оптимальные методы выделения. Подробнее об этих методах выделения написано в гл.

Для уверенного отнесения органических соединений к классу гумусовых кислот необходим ряд признаков, выведенных Орловым:

Содержание углерода в пределах 46—61% для гуминовых кислот и от 36—44% для фульвокислот, при обязательном содержании азота от 3 до 6%. Это обязательный признак, хотя только элементный состав не может быть достаточным для отнесения получаемых препаратов к гумусовым веществам.

Обязательное присутствие не окисляемых щелочным раствором перманганата калия бензол (пиридин) - карбоновых кислот; характерная особенность этих продуктов — наличие в них 3—6% азота

Наличие «негидролизуемого», или гуминового, азота в количестве 25—55% от общего.

Электронные спектры поглощения при значениях Е 0,01% 1см,465нм порядка

0,01-0,1.

Инфракрасных спектров поглощения в интервале от 2 до 10 мкм могут служить подтверждением принадлежности вещества к гумусовым кислотам.

Приведенные данные основаны на большом наборе усредненных данных: MM -

6386; Элементный анализ (%): C - 53.9; N - 5.0; H - 5.8; O - 35.1; S - 0.5; C/N - 10.7;

Функциональные группы (моль/г): карбоксильные - 376; фенольные – 188; общая кислотность – 564. Распределение атомов С, % на основе данных ЯМР спектроскопии: алифатические группы – 18.1, ароматические – 20.9, карбоксильные - 23.7, метоксильные – 4.9, карбоновые – 8.4, кетонные – 4.5, фенольные – 4.2, другие группы – 15.3

Правильная идентификация гумусовых кислот возможна только в сочетании этих признаков. Совершенно не пригодны для идентификации такие показатели, как растворимость, содержание соединений, который легко гидролизируются; визуальная оценка окраски. [6]

Выделение гумусовых кислот

Пробоподготовка

Высушенные на воздухе образцы почвы рассыпают на бумаге, осторожно раздавливая крупные комки, и методом квартования берут среднюю пробу. Из этой пробы отбирают корни и другие растительные остатки. Почву растирают в фарфоровой ступке и пропускают через сито с диаметром отверстий 1 мм. Крупные фрагменты растительного материала отбирают пинцетом, а мелкие - методом скручивания растертой почвы на сите и легкого сдувания их с поверхности почвы.

Техника извлечения гумусовых кислот

Гумусовые кислоты извлекают из почвы 0,1н раствором гидроксида натрия после предварительного декальцинирования. Карбонатные почвы необходимо предварительно обработать 10%-ой соляной кислотой для разрушения карбонатов, а только потом проводить декальцинирование.

Подготовленную навеску почвы переносят в бутыли, приливают 0,05 н раствор серной кислоты и перемешивают (количество кислоты должно в 5-6 раз превышать количество грунта), дают смеси отстояться. Затем фильтруют раствор через стеклянный фильтр и отбрасывают вместе с всплывшими на поверхность неразложившимися растительными осадками. Декальцинирование продолжают до тех пор, пока проба на кальций не покажет только следы последнего в растворе. Затем промывают 1-2 раза дистилированной водой и экстрагируют гумусовые вещества 0,1н раствором гидроксида натрия (6-7 л на 1 кг почвы), дают смеси отстояться. После этого, уже темноокрашенный раствор, который содержит гуматы и фульваты натрия, сливают через сифон в приемную склянку. Обработку продолжают до видимого осветления щелочного экстракта.

Из-за того, что полученный раствор гумусовых веществ содержит минеральные примеси в виде тонкой взвеси, надо отстоявшийся раствор слить, не взмучивая осадок и пропустить через проточную центрифугу при скорости вращения 12-18 тыс. об/мин, где минеральные коллоиды будут осаждаться.

Выделение гуминовых кислот

После центрифугирования пробу собирают в склянки, добавляют при перемешивании 10%-ую серную кислоту или соляную кислоту (из расчета 20-25 мл на литр экстракта) до признаков коагуляции (жидкость теряет прозрачность, цвет становится бурым), дают гуминовому осадку отстоятся, а надсадочную жидкость (не взмучивая осадок) сливают в склянку. Рыхлый осадок пропускают через воронку Бюхнера или центрифугу, кислые растворы объединяют, а гуминовую кислоту промывают 1-2 раза дистиллированной водой в центрифужных пробирках.

Переосаждение и очистка гуминовых кислот от примесей

Так как препарат гуминовых кислот содержит примеси фульвокислот, неспецифических органических соединений и имеет высокую зольность, необходимо растворить гуминовую кислоту в 0,1 н гидроксида натрия. От примесей осадок можно очистить методом электродиализа. Напряжение на электроды в котором подается от сети через выпрямители (должны обеспечивать ток хотя бы в несколько десятков миллиампер при напряжении 220В).

В электрическую схему электродиализатора включен прерыватель, отключающий ток при сильном перегреве раствора. Перед началом разбавляют осадок гуминовой кислоты дистиллированной водой до сметанообразного состояния и переносят в среднюю камеру электродиализатора. Боковые камеры заполняют дистиллированной водой, уровень которой устанавливают на пару миллиметров ниже уровня смеси в средней камере, после этого подают на электроды напряжение. На электроде должны выделяться пузырьки газа. Сначала происходит разложение свободных солей, и сила тока нарастает, при увеличении силы тока, раствор разогревается в средней и боковых камерах электродиализатора. Как только температура поднимается до 45-50 градусов, растворы сливают и отбрасывают из боковых камер, заполняют свежей дистиллированной водой. После удаления основной массы солей, сила тока изменяется медленно. Раствор меняют 1-2 раза в сутки. Когда сила тока упадет до нескольких миллиампер, надо взять пробу из средней камеры на зольность гуминовых кислот, а из боковых - на содержание ионов. Зольность должна быть не более 0,5 - 1,5%, однако для многих работ допустима зольность до 5-8%. Очищенную смесь гуминовой кислоты из средней камеры сливают в стаканы и центрифугируют. Полученный осадок высушивают при 60 градусах. Сухой препарат имеет черный или буровато-черный цвет, блестящий раковистый излом и хорошо растворяется в 0.1н гидроксида натрия без нагревания.

Фракционирование гуминовых кислот

Препараты, полученные методом, описанным выше, полидисперсны. Для исследования строения гуминовых кислот надо смесь фракций разделять так, чтобы каждая фракция была представлена однородной совокупностью молекул. Относительно гомогенные фракции можно получить методом дробного высаливания по Орлову, Глебовой и Мироненковой. Сущность метода заключается в том, что к щелочному раствору гумата натрия добавляют возрастающие количества хлорида натрия. Часть гуминовых кислот выпадает в осадок уже при минимальной концентрации хлорида натрия. По мере возрастания концентрации хлорида натрия, в осадок переходят новые и порции гуминовых кислот. Собирая раздельно выпадающие осадки, можно разделить препарат гуминовых кислот на относительно однородные фракции.

Инфракрасная спектроскопия (ИК-спектроскопия)

Для начала разберемся с понятием спектроскопия.

Спектроскопия – это наука о взаимодействии электромагнитного излучения с веществом, которое даёт информацию о самом веществе, атомах и молекулах, составляющих вещество, о его строении и свойствах. Спектроскопия использует весь диапазон электромагнитного излучения, включая гамма - лучи, рентгеновские лучи, инфракрасные лучи, видимые и ультрафиолетовые лучи, микроволновое излучение и радиочастоты.

Инфракрасная спектроскопия основана на записи инфракрасных спектров поглощения вещества. Поглощение веществом в области инфракрасного излучения происходят за счёт колебаний атомов в молекулах. Колебания подразделяются на валентные (в ходе колебания изменяются расстояния между атомами) и колебательные (в ходе колебания изменяются углы между связями).

Переходы между различными колебательными состояниями в молекулах квантованы, благодаря чему поглощение в ИК-области имеет форму спектра, где каждому колебанию соответствует своя длина волны. Длина волны для каждого колебания зависит от того, какие атомы в нём участвуют, и мало зависит от их окружения. То есть для каждой функциональной группы (С=О, О-Н, СН2 и пр) характерны колебания определённой длины волны.

Чтобы качественно характеризовать ИК-спектр, пользуются длиной волны λ, (мкм=10⁻⁶ м) или волновым числом v (см⁻¹). Волновое число показывает число волн на расстоянии 1 см. Соотношение между длиной волны и волновым числом: λ=10000/v.

В области ИК-излучения энергии квантов колеблются в пределах 1х10⁻² -1, что соответствует волновым числам 100-10000 см⁻¹.

Электромагнитные колебания наиболее интенсивно поглощаются тогда, когда энергия кванта отвечает разности 2-ух возможных энергетических уровней молекулы. Изменение энергии молекулы при поглощении кванта излучения связано с колебаниями отдельных групп атомов или вращением молекулы. Для количественной характеристики используют пропускание, поглощение, оптическую плотность, связанные с параметрами объекта.

ИК-спектроскопия позволяет получить содержательную информацию о функциональных группах в составе гумусовых кислот и типах связи, характерных для их молекул. Также она позволяет сравнивать спектры гумусовых кислот со спектрами исходных образцов почвы.

Основные области инфракрасного спектра и интерпретация

В ИК-спектрах органических соединений можно выделить три основные области:

4000-2500 см-1. Область валентных колебаний простых связей X–H: O– H, N–H, C– H, S–H.

2500-1500 см-1. Область валентных колебаний кратных связей X=Y, X≡Y: C=C,

C=O, C=N, C≡C, C≡N.

1500-500 см-1. Область валентных колебаний простых связей X–Y: C–C, C–N, C–O и деформационных колебаний простых связей X–H: С–H, O–H, N–H. Важным является то, что положение и интенсивность полос поглощения в этом диапазоне сугубо индивидуальны для каждого конкретного органического соединения и только по полному совпадению частот и интенсивностей линий в этой области ИКспектра можно говорить об идентичности сравниваемых объектов. [13]

Пробоподготовка

Водные растворы гуминовых кислот, фульвокислот, гуматов щелочных металлов практически невозможно исследовать из-за того, что вода поглощает ИК-излучение и растворяет материал, из которого изготовлены кюветы. Органические растворители также не подходят, потому что в них растворяются специфические гумусовые вещества.

Гумусовые кислоты ИК-спектроскопией изучают в твердом состоянии.

Существует 2 основных метода подготовки образца: растирание в минеральном масле (нужоль, вазелиновое масло) до получения тонкой однородной взвеси гумусовых кислот и запрессовывание растертых препаратов в солевые пластины. Данные методы снижают помехи от рассеивания света и позволяют получить качественные спектры. 1 метод имеет недостатки, так как масла имеют свои полосы поглощения около 3 и 6,5 мкм, но этот метод позволяет снизить помехи от адсорбированной воды 4000-3000 см-1.

Также удобно применять приставку нарушенного полного внутреннего отражения.

Инфракрасные спектры гумусовых кислот

В интервале длин волн от 2,5 до 10-12 мкм (в интервале волновых чисел 4000800см⁻¹) спектры кислот характеризуются большим набором полос поглощения изза присутствия в молекулах этих веществ атомных групп. Достаточно хорошо идентифицируются полосы, относимые за счет групп CH, CH2, CH3, OH, COOH, C=C, NH2, C=N и т.д.

Рис 3. ИК-спектр поглощения гумусовой кислоты

Очень широкая и интенсивная полоса в области 3600-3300 см⁻¹ обуславливается

валентными колебаниями гидроксильных групп. Смещение этой полосы с одновременным уменьшением интенсивности в метилированных образцах гумусовых кислот свидетельствует о наличии межмолекулярных водородных связей.

Особенностью гумусовых кислот является отсутствие резкой полосы с максимумом при 3030 см⁻¹, характерной для соединений, содержащих ароматические =С-Н группы.

Полосы в области 2960-2840 см⁻¹ свидетельствуют о наличии в составе гумусовых кислот метиленовых групп. В то же время отсутствие сильной полосы поглощения при 720 см⁻¹ указывает на малую длину углеводородных цепей – не более четырёх атомов углерода. Эти факты приводят к выводу о незначительной роли алканов в построении гумусовых кислот – алифатическая (гидролизуемая) часть ГК и ФК составлена, в основном, углеводами и аминокислотами.

ИК-спектры ГК имеют максимум поглощения при 1720 см⁻¹ – эта полоса характерна для карбонильной группы. Препараты гумусовых кислот, богатые азотом, имеют отдельные полосы при 1650-1640 и 1550-1540 см⁻¹, характерные для амидной группы. ФК сильно отличаются от ГК интенсивными полосами, свойственными полисахаридам. В целом же, ИК спектры наглядно демонстрируют общность строения гумусовых кислот почв.

При определении гумусовых кислот ИК-спектроскопией, лучше не использовать серную кислоту в выделении, так как сульфатные ионы могут вызвать накладывание на полосы гумусовых кислот. В таком случае интерпретация спектра будет затруднена.

Стеклянная и кварцевая оптика не подойет из-за сильного поглощения ИК-лучей этими материалами. Призмы, защитные стекла, линзы, кюветы изготавливают из фторида лития, хлорида натрия, бромида калия. Только в области 2 мкм применяют оптику из специального стекла.

Но как и многие методы анализа, ИК-спектроскопия имеет свои недостатки при определении гумусовых кислот. Так как гумусовые кислоты содержат слишком большой набор атомных группировок, инфракрасные полосы получаются составными и широкими, что обусловлено колебаниями различных групп. Осложнения вносят минеральные компоненты, многие из которых дают собственные полосы поглощения в тех областях, что и гумусовые вещества. Также неравные количества воды в таблетках KBr вызывают иногда отрицательное поглощение из-за появления ложных полос. Однако огромным плюсом идентификации гумусовых кислот ИК-спектроскопией являются однотипные ИК-спектры различных типов почв.

Экспериментальная часть.

Спектры инфракрасного поглощения регистрировали на ИК-Фурье-спектрометре FTIR IRAffinity (Shimadzu, Япония) с приставкой НПВО Miracle 10, в интервале частот 700-4000 см^-1, с разрешением 4 см^-1. Результаты представлены на рисунке 1.

Для расшифровки ИК-спектров использовали стандартные справочные таблицы и литературу, посвященную исследованию почв и торфа [2]. В образцах заметно разное содержание воды. Исследуемые образцы гумусовых веществ практически идентичны и существенной разницы в составе функциональных групп нет. В левой части спектра (область 2000-4000 см^-1) валентные колебания для исследуемых образцов схожи. В области 3100-3500 см^-1 – наблюдается уширенный пик О-Н-колебаний, обусловленный водородными связями, полосы в области 2800 см^-1 указывают на наличие С-Н колебаний алифатических фрагментов. Возможные характеристические пики C-H в ароматическом кольце в области 3080-3050 см^-1 перекрываются и однозначно не идентифицируются.

В правой части спектра (область 1000-1800 см^-1) находятся характеристические полосы поглощения ГВ. В этой области проявляются полосы на 1050 см^-1, соответствующие деформационным колебаниям замещенных аренов, 1650 см^-1 валентные колебания ароматических С=С связей, колебания 1700 см^-1 отвечают наличию карбоксильных групп, которые наблюдаются только в одном из образцов. Обнаруженные характеристические пики хорошо сочетаются с литературными данными.

Рис. 4. ИК-спектры гумусовых веществ образцов почвы: стандартный образец «Биолар» (зеленая линия), исследуемый образец (желтая линия)

Рис. 5. Сравнение образцов почв с различным содержанием гумусовых веществ.

При описании гумусовых веществ, области ИК-спектров (рис. 5) выделены так: 3400-3200 см^-1 – валентные колебания гидроксильных (фенольных, спиртовых) групп, соединенных в основном водородными связями; 2950-2860 см^-1 – валентные колебания С-Н в СН₂-группах; полоса в области 1720-1700 см^-1 – одна из наиболее характерных, свидетельствующая о наличии карбоксильных групп в молекуле; полосы в области 1650-1640 и 1550-1540 см^-1 – амидная группа; 1625-1610 см ^-1 – ее связывают с наличием ароматической С=С связи, колебаниями С-Н в гетероциклических групп, наличием С=О карбонильных групп, соединенных водородными связями и хинонов, также сочлененных этой связью с группами –ОН.

Заключение

Таким образом, можно прийти к выводу, что содержание и состав гумусовых веществ в различных образцах почв существенно отличается. ИК-Фурье смектроскопия позволяет провести качественный и количественный анализ гумусовых веществ и сравнить со стандартными образцами почв.

Список литературы

Основы аналитической химии. Кн.2 Методы химического анализа: Учеб. для вузов / Под ред. Ю.А.Золотова. М. Высш. Шк., 2012. 390 -391 с

 Бамбалов, Н.Н. Баланс органического вещества торфяных почв и методы его изучения [Текст] / Н.Н. Бамбалов. - Минск: Наука и техника, 1984. - 175 с.

Воробьёва Л.А. Химический анализ почв. М.: Изд-во МГУ, 1998. 39-56 с

Моржухина С.В., Титова Т.В., Скубиро А.Е., Зуев Б.К. Новый метод определения содержания гумуса в торфяных и оторфованных горизонтах почв. // Журн. Вест. Моск. Гос. Обл. Университета.2009. №4. 1 с

Д.С. Орлов, И.Н. Лозановская, П.Д. Попов Органическое вещество почв и органические удобрения. М., Изд-во Моск. Ун-та, 1985, 13-48 с.

Орлов Д. С. Гумусовые кислоты почв и общая теория гумификации. М: МГУ, 1990. 231-239 с

Перминова И.В. Анализ, классификация и прогноз свойств гумусовых кислот. Дисс.

…док. хим. наук. Москва. МГУ. 2000. 15-182 с

Орлов Д. С., Гришина Л.А. Практикум по химии гумуса. М: МГУ, 1981. 119-252 с 9. Карасек Ф., Клемент Р. Введение в хромато-масс-спектрометрию: (Пер. с англ). М.: Мир, 1993. 237 с 10. Зуев Б. К., Моржухина С.В., Роговая И.В., Титова Т.В., Горяйнова З.И. «Безреагентный» экспрессный метод определения органического вещества в грунтах и донных отложениях // XVIII Менделеевский съезд по общей и прикладной химии. Тезисы докладов. Т. 4. 23 – 28 сентября 2007. Москва. 143 с

Колесник И.В., Саполетова Н.А. Методическая разработка. Инфракрасная спектроскопия. М: МГУ, 2011. 4-31 с

А. В. Васильев, Е. В. Гриненко, А. О. Щукин, Т. Г. Федулина. Инфракрасная спектроскопия органических и природных соединений: Учебное пособие. СПб.: СПбГЛТА, 2007, 54 с

Код для цитирования: Скопировать