XII Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2020

Гнилец – инфекционное заболевание пчелиного расплода, распространенное во всех странах с развитым пчеловодством. Оказывает негативное воздействие на продуктивность пасеки – зараженные семьи дают на 20-80% меньше товарного меда. Без оказания своевременной помощи пчелиные гнезда сильно слабеют и полностью погибают.

Как отмечает Киреевский И.Р: «Пчелиная семья представляет собой единую биологическую единицу, и в случае заболевания одного из её членов (матки, трутня, рабочей пчелы или расплода) нарушается нормальная жизнедеятельность всего населения улья. Болезни пчёл – это разнообразные расстройства насекомых, вызванные несоблюдением правил ухода, кормления и разведения или развитием в тканях пчёл личинок и куколок болезнетворных микробов и паразитов».

По происхождению (в зависимости от причины) болезни пчёл разделяют на заразные (инфекционные и инвазионные) и незаразные. Причиной инфекционных болезней являются бактерии, плесневые грибки и вирусы; инвазионные болезни возникают в результате проникновения и размножения в теле пчелы различных паразитов[3].

Европейский гнилец – это инфекционное заболение открытого пчелиного расплода, которая сопровождается гибелью расплода в возрасте 4 дней, а иногда и старше.

Возбудители болезни – Melissococcus (Streptococcus pluton), Bac. alvei, Enterococcus faecalis (Str. apis), Bac. laterosporus (Bac. orpheus). Болезнь может быть вызвана одним или несколькими возбудителями. Некоторые учёные считают, что под названием европейского гнильца подразумевается несколько различных заболеваний[2].

Предварительное заключение о результатах исследования на европейский гнилец может быть дано в день поступления патматериала на основании осмотра сота и микроскопии мазков, окончательный — после проведения полного бактериологического исследования, т. е. через 5—7 дней при условии выделения возбудителя болезни.

Для лабораторного исследования из ячеек сотов извлекают стерильным пинцетом не менее 10 свежих трупов личинок, а при их отсутствии — высохшие корочки трупов. Мазки и посевы производят из содержимого кишечника личинки. Корочки трупов предварительно помещают на 15—20 мин в стерильный физраствор. Мазки окрашивают одновременно и по Граму, для окраски спор возбудителя используют 2 %-ный спиртовой раствор карболового фуксина в течение 1,5—2 мин. При бактериологическом исследовании недавно погибших личинок чаще обнаруживают Streptococcus pluton, в мазках, приготовленных из загнившей массы личинок и их корочек, как правило, находят споры Вас. alvei, иногда Вас. orpheus, а в мазках из тела личинок с кислым запахом — Strept. apis. Streptococcus pluton имеют форму вытянутых (ланцетовидных) кокков размером 0,5—1,5 мкм (рис. 14). В мазках они располагаются одиночно, чаще попарно, цепочками и в виде характерных скоплений «розетками»; в культуре и тканях образуют капсулу, окружающую несколько кокков, хорошо красящуюся по методу Кленбергера, Томчика и Новелли. Микроб неподвижен, спор не образует. Стрептококки красятся всеми анилиновыми красками и по Граму (неравномерно), иногда с грамположительными встречаются и грамотрицательные кокки. Из патматериала стрептококк плютон выделяют культивированием посевов при 35 °С на средах Бейли или Черепова в анаэробных условиях, для чего используют анаэростат или обычный эксикатор, который после постановок чашек или пробирок с посевами наполняют углекислотой (5—10 % СО2). Последующее культивирование выделенных штаммов этого возбудителя можно производить и в аэробных условиях.

Для культивирования Strept. pluton используют: Среду Бейли, Среду В. Т. Черепова, полужидкий 0,15 %-ный картофельный агар.

На плотных средах Strept. pluton образует мелкие, круглые, выпуклые, зернистые жемчужно-белого цвета непрозрачные колонии диаметром 1 — 1,6 мм. В печеночном бульоне и полужидком агаре стрептококк растет с образованием помутнения и нежного пристеночного кольца, на дне пробирки через двое суток выпадает белый осадок. Strept. pluton расщепляет глюкозу
и фруктозу без образования газа, не расщепляет сахарозу, галактозу, лактозу, малтозу, рафинозу, рамнозу, маннит, сорбит, инозит, а-ксилозу, глицерин и крахмал.

Strept. apis располагается в мазках короткими цепочками, размер отдельных кокков 0,7—0,9 мкм, грамположительная, спор не образует, капсулы не имеет; факультативный аэроб, хорошо растет при температуре 37°С на обычных средах, а также на средах Бейли, Черепова, кровяном агаре Цейслера. Через 24 ч на агаре образуются мелкие, прозрачные, бесцветные колонии или наложения, они легко снимаются петлей и суспензируются в физрастворе. Микроб вызывает помутнение бульона, разжижает МПЖ, молоко свертывает и пептонизирует, индол и сероводород не образует, выделяет следы аммиака, углеводы разлагает с образованием кислоты, крахмал не гидролизует, нитриты не восстанавливает, на кровяном агаре не вызывает гемолиза.

Вас. alvei — спорообразующая палочка длиной 3—4,5, шириной 0,7—0,9 мкм; по Граму красится положительно, подвижна, перитрих. Споры располагаются центрально, 2,5—4 мкм в длину и 0,8—1,5 мкм в ширину, иногда образуют ряды в виде частокола. Возбудитель — факультативный аэроб, растет при температуре 37 °С на обычном МПА и МПБ, кровяном агаре Цейслера, через сутки образуя на агаре крупные колонии неправильной формы в виде «оленьих рогов» грязно-желтого цвета. На агаре Цейслера он образует гемолиз типа р, иногда а. Бульон мутнеет равномерно, на 3—5 день на его поверхности образуется бесцветная или сероватая гладкая, нежная не стабильная пленка со слабым пристеночным кольцом. При встряхивании она опадает хлопьями на дно пробирки. Вас. alvei медленно разжижают МПЖ, молоко свертывают и пептонизируют, образуют индол; обнаруживаются следы аммиака и сероводорода; крахмал не гидролизируют, нитриты не восстанавливают, расщепляют глюкозу, мальтозу, глицерин, лактозу, сахарозу с образованием кислоты, но без газа. Биохимические свойства не постоянны. Старые культуры имеют неприятный запах, особенно сильный при культивировании микроба на кровяном агаре.

Вас. orpheus — спорообразующая подвижная с закругленными концами палочка длиной 2,5—5 мкм и шириной 1 —1,2 мкм. Микроб окрашивается всеми анилиновыми красками и грамположительно. Споры хорошо окрашиваются 2 %-ным спиртовым раствором фуксина в течение 2 мин. В мазках вегетативные и споровые формы микроба располагаются поодиночке. Споры овальной формы длиной 1,2—2 мкм и шириной 0,7—1,2 мкм, располагаются сбоку в средней раздутой части бациллы, характерно также наличие с одной стороны споры арфо- или лодкообразного параспорального тела. Бацилла орфеус-аэроб, растет на обычных питательных средах (МПА и МПБ) и особенно хорошо на печеночном агаре с нейтральной или слабощелочной реакцией при температуре 35—36 °С. На плотной среде колонии появляются через 24 ч после посева, они 2—3 мм в диаметре, с ровными краями, беловато-серого цвета с голубоватым оттенком и металлическим блеском, к 48 часам образуется пышное серовато-белое наложение. МПБ в начале мутнеет, затем на дне образуется осадок и бульон просветляется. Желатину разжижает медленно, молоко коагулирует с образованием плотного сгустка. Микроб ферментирует глюкозу, мальтозу, маннозу, декстрозу, ксилозу, салицин и маннит с образованием кислоты, но без газа и не ферментирует сахарозу, рамнозу, лактозу, галактозу, арабинозу, дульцит, сорбит, инозит и адонит. Индола и сероводорода не образует, реакция с метилрот отрицательная, реакция Фогес — Проскауэр положительная, нитраты восстанавливает, на кровяном агаре образует гемолиз типа а. При проведении серологической диагностики ставят реакцию
преципитации (РП). Антигены для этой реакции готовят из 5—10 трупов пораженных личинок, которые отбирают из присланных образцов сотов. Личинок растирают в фарфоровых ступках с 5 мл физраствора, затем переносят в пробирки и нагревают на кипящей водяной бане в течение 15 мин. Экстракт фильтруют через асбестовую вату (в воронках диаметром 4 см). Прозрачный фильтрат разливают по 0,1—0,2 мл в чистые уленгутовские пробирки и подслаивают такое же количество сыворотки: в первую пробирку — преципитирующую плютоновую, во вторую — преципитирующую альвейную и т. д., в последнюю — нормальную сыворотку лошади (для контроля). Сыворотки так же, как и экстракты, должны быть прозрачными. Мутные сыворотки предварительно фильтруют через асбестовую вату. РП проходит при комнатной температуре. При положительной реакции на границе сыворотки и антигена в течение 10—20 мин появляется преципитационное кольцо в виде тонкого серо-белого диска. Положительная РП с плютоновой, альвейной или другими специфическими сыворотками свидетельствует о европейском гнильце. В контрольной пробирке с нормальной сывороткой реакция должна быть отрицательной.

Лабораторные животные не восприимчивы к европейскому
гнильцу. Патогенные свойства возбудителей этого вида гнильца могут быть установлены путем заражения 3—4-дневных личинок, как и при американском гнильце[1].

Библиографический список

1. Гробов, О.Ф. Болезни и вредители медоносных пчёл: Справочник / О.Ф.Гробов, А.М.Смирнов, Е.Т.Попов. – М.: Агропромиздат, 1987. – С.68-73

2. Гробов, О.Ф. Болезни и вредители пчёл / О.Ф.Гробов, А.К.Лихотин. – М.: Агропромиздат, 1989. – С.78

3. Киреевский, И.Р. Болезни пчёл / И.Р.Киреевский. – М.: АСТ; Донецк: Сталкер, 2006. – С.3-4.