XII Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2020

Актуальность данной темы обусловлена тяжестью течения заболевания, потенциальностью летальных исходов, длительным расстройством функции органов и систем. Ботулизм – тяжелая кормовая интоксикация (редко токсикоинфекция) характеризующаяся поражением центральной нервной системы и проявляющаяся параличами глотки, языка, нижней челюсти и резким ослаблением тонуса скелетной мускулатуры. К токсину ботулизма восприимчив и человек. Наиболее восприимчивы к нейротоксину лошади, крупный и мелкий рогатый скот, птица, норки. Относительную устойчивость проявляют собаки, дикие животные, серые крысы.

В Российской Федерации с 2007 года ежегодно регистрируется около 200 случаев заболеваемости ботулизмом с числом пострадавших около 300 в год. Основной причиной вспышек является – домашние консервы.

Возбудители ботулизма имеют форму палочек длиной 3-9 мкм, шириной 0,6- 1 мкм с закругленными концами (рисунок 1). Палочки образуют субтерминально расположенные споры и имеют вид теннисной ракетки. Капсулы не образуют. Подвижны в результате перитрихиально расположенных жгутиков. Грамположительные в молодых культурах, на препаратах из тканей и грамотрицательные-встарых культурах; по методу Ожешко споры окрашиваются в красный цвет, а вегетативные формы - в синий. Clostridium botulinum, окраска генцианом фиолетовым.

Рисунок 1 - возбудитель ботулизма

(https://herpesvir.ru/wp-content/uploads/2019/09/clostidii-768x557.jpg)

Возбудитель болезни – спорообразующий анаэроб, продуцирующий самый сильный токсин из всех известных бактериальных ядов, образующийся в растительных и мясных продуктах в условиях анаэробиоза (при отсутствии кислорода) и повышенной влажности при нейтральной или слабощелочной реакции среды. Оптимальная температура токсинообразования составляет 25–38 °C. В жидких средах токсин разрушается при кипячении через 15–20 мин. Мясо и рыбу для разрушения токсина нужно варить не менее 2 ч.

Микробы попадают в корма с частицами земли, фекалиями и трупами грызунов. Животные заболевают после поедания испорченных кормов (силос, отруби, овес, ячмень), в которых микробы размножаются, выделяя токсин.

Инкубационный период болезни составляет от нескольких часов до 10–12 сут. Длительность болезни – 1–8 сут, иногда несколько часов. У животного отмечаются слюнотечение, вялость жевания, паралич глотки, атония (отсутствие сокращений) желудка и кишечника. По мере развития болезни наступает паралич языка (рис. 21) и нижней челюсти. У больных постепенно расслабляется скелетная мускулатура. Они с трудом передвигаются, к концу болезни лежат. Температура тела нормальная, сознание сохранено до смерти. Летальность лошадей при ботулизме достигает 70-100 %.

Диагноз устанавливают на основании эпизоотологических и клинических данных, результатов лабораторного исследования проб кормов, содержимого желудка и крови больных особей.

Лечение ботулизма состоит в промывании желудка (например, раствором натрия гидрокарбоната или двууглекислой соды) и даче сильных слабительных средств, теплых клизмах, внутривенном введении глюкозы и физиологического раствора. В начале болезни применяют противоботулиновую сыворотку 600 000–900 000 МЕ внутривенно.

Профилактические мероприятия при ботулизме заключаются в правильных заготовке и хранении кормов, недопущении попадания в них земли, трупов мелких животных, птичьего помета. Увлажненные корма (отруби, сечка, полова) нужно скармливать сразу после их приготовления.

Материалом для исследования служат пробы кормов, послуживших причиной заболевания, содержимое желудка, кишечника, кровь, паренхиматозные органы свежих трупов погибших животных. Основным методом лабораторного диагноза ботулизма является обнаружение в исследуемых субстратах токсина; параллельно проводят выделение культуры, но это удается не всегда. Микроскопия первичного материала в данном случае диагностического значения не имеет. Бактериологическое исследование. Для выделения культур исследуемый материал тщательно растирают в ступе со стерильным песком и заливают двойным количеством физиологического раствора.

Посевы лучше всего делать на регенерированных жидких питательных средах с 0,5% глюкозы 18 (Китта-Тароцци, бульон Хоттингера, мясо-казеиновый гидролизат и др.); pH должно быть в пределах 7,2-7,4. Среду заливают слоем вазелинового масла толщиной 0,5 см. Посевы проводят в два флакона, один из них прогревают 20 мин при 80С на водяной бане для освобождения от неспоровых форм бактерий. Культуры выращивают при 35-37С; если имеется подозрение на типы Е и F, то при 28- 30С. Типичный рост появляется на 2-3-и сутки. Культуру микроскопируют и дополнительно высевают на глюкозо-кровяной агар Цейсслера. Перед посевом культуру обязательно прогревают при 80С в течение 20 мин.

Для выделения культуры сеять можно в высокий столбик агара с глюкозой. Биологическое исследование осуществляют для обнаружения ботулинических токсинов. Материал растирают и разводят, как и в предыдущем случае, затем для экстрагирования выдерживают при комнатной температуре 1-2 ч, пропускают через ватно-марлевый фильтр, можно центрифугировать при 3000 об/мин – 30 мин. Цитратную кровь и сыворотку не разводят, но исследуют сразу после взятия: токсин в них разрушается очень быстро.

Для обнаружения токсина берут четыре белые мыши по 16-18 г каждая. Двум из них исследуемый материал (0,5-0,8 мл) вводят внутрибрюшинно или внутривенно (в хвостовую вену), две другие остаются контрольными. Им инокулируют предварительно прогретый в течение 30 мин при100С экстракт. При наличии ботулинического токсина две первые мыши гибнут через 1-4 дня,контрольные остаются живы.

Для серологического диагноза используют реакцию нейтрализации токсинов гомологичными антитоксическими сыворотками. С этой целью берут 5 пробирок, в каждую из них вносят 2,4 мл исследуемого экстракта и добавляют по 0,6 мл антисыворотки типов А, В, С, Е (каждый тип в одну пробирку), пятая пробирка контрольная и содержит вместо сыворотки 0,6 мл 19 физиологического раствора. Смеси выдерживают 30 мин при 37С в термостате и содержимое каждой пробирки вводят внутрибрюшинно в дозе 1 мл двум мышам. Результаты учитывают через 4-6 ч, затем через 24 ч и далее в течение четырех дней. Мыши, получившие смесь токсина и гомологичной сыворотки, выживают, остальные и контрольные гибнут.

В качестве диагностических тестов на ботулизм предложены метод определения фагоцитарного показателя и реакция непрямой гемагглютинации. Эти методы непригодны для обнаружения ботулинических токсинов в кормах, пищевых продуктах и патологическом материале, их используют только как ориентировочные.

Заражение животных происходит при попадании ботулинического токсина в пищеварительный тракт. Массовое заболевание животных происходит обычно в теплое время года, которое протекает спорадически, реже в виде энзоотий. Летальность - 70-95%. Инкубационный период от нескольких часов до двух недель. Болезнь может протекать молниеносно, остро, подостро и реже - хронически.

У лошадей молниеносное течение характеризуется внезапной гибелью животного без каких-либо признаков болезни. Острое течение (длится от 1 до 4-х дней) 31 проявляется беспокойством, снижением рефлекторной чувствительности, нарушением координации движений, гиперемией или желтушностью видимых слизистых оболочек. Наблюдается слюнотечение, паралич нижней челюсти и языка, который выпадает изо рта. Летальность 90-95%. При подостром (до 7 дней) и хроническом (до 3-4 недели) течениях болезни клинические признаки выражены слабее.

Во время заготовки и при хранении кормов не допускают попадания в них земли, трупов мелких животных, помета птиц. Запрещается скармливать животным заплесневелые и испорченные корма. При возникновении ботулизма больных животных изолируют и лечат. Убой их на мясо запрещен. Трупы (туши) с внутренними органами и шкурой уничтожают.

Список использованной литературы

1. Асташкина, А.П. Приготовление питательных сред и культивирование микроорганизмов: методическое указание / А.П.Асташкина. – М.: Томский политехнический университет, 2015. – 12с.

2. Емельяненко П.А., Дунаев Г.В., Кудлай Д.Г. и др. Ветеринарная микробиология. - М.: «Колос», 1982.-304с

3. Зыкин, Л. Ф. Современные методы в ветеринарной микробиологии [Текст] / Л. Ф. Зыкин, 3. Ю.Хапцев , Т. В. Спирахина. - М.: Колос, 2008г. - 158с.

4. Зыкин, Л. Ф. Современные методы ветеринарной микробиологии [Текст] / Л. Ф. Зыкин, 3. Ю.Хапцев , Т. В. Спирахина. -- М.: Колос, 2012г. - 108с.

5. Колычев Н.М., Госманов Р.Г. Ветеринарная микробиология и иммунология. - 3-е изд., перераб. и доп. М.: «КолосС», 2003. - 432с.

6. Кузнецов А.Ф. КРС. Содержание, кормление, болезни их диагностика и лечение: учебное пособие / А.Ф.Кузнецов. – М.: Лань, 2007. – 80с