XII Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2020

Введение

Трипсин - протеолитический фермент класса гидролаз, относится к группе сериновых протеиназ. Катализирует гидролитическое расщепление белков и пептидов.

Для применения в медицинской практике трипсин получают из поджелудочной железы крупного рогатого скота.

Фермент активен при рН 5,0-8,0 с оптимумом активности при рН 7,0. Трипсин способен расщеплять омертвевшие участки ткани, фиброзные образования, вязкие секреты и экссудаты. По отношению к здоровым тканям фермент не активен и безопасен в связи с наличием в них ингибиторов трипсина. Обладает выраженной способностью расщеплять пептидные связи в молекуле белка, а также высоко- и низкомолекулярные продукты распада белка, особенно связи, образованные остатками ароматических аминокислот (аргинин, лизин). Этим механизмом обусловлены его противовоспалительный и противоотечный эффекты, поскольку факторы воспаления представляют собой сложные белки или высокомолекулярные пептиды (серотонин, некротические продукты), которые трипсин разлагает до более простых и менее опасных соединений.

Трипсин сохраняет термоустойчивость и стабильность в кислой, слабощелочной среде и после кипячения в 0,01 М соляной кислоте, в сильнощелочной среде необратимо денатурируется.

Неблагоприятные внешние условия, как правило, изменяют активность и токсичность лекарственного препарата, влияя на его фармакокинетику.

В связи с этим необходимо изучать остаточную протеолитическую активность препаратов трипсина, способность расщеплять пептидные связи после воздействия денатурирующих факторов.

Цель исследования: изучить остаточную протеолитическую активность препаратов трипсина.

Задачи исследования:

Определить остаточную протеолитическую активность препаратов трипсина по желатине, используя фотопленку.

Провести сравнительную оценку остаточной протеолитической активности препаратов трипсина.

Дизайн исследования:

Фотопластинки засвечивают, проявляют, фиксируют и обрабатывают раствором дансилхлорида в смеси ацетона с бикарбонатным буфером. Промывают в ацетоне, спирте, воде и высушивают. Исследуемый препарат наносят на фиксированную и высушенную поверхность желатинового слоя фотопластинки, инкубируют. Пластинки промывают и просматривают в ультрафиолете, регистрируя зоны лизиса. В ряд проб с различным разведением трипсина добавляют известное количество ингибитора трипсина, инкубируют смесь и наносят на пластинки. Количество трипсина определяют по степени проявления зон лизированного желатина. Максимальная чувствительность пластинок к трипсину составляет 0,1 нг в 1 мкл.

Предполагаемые пути решения задач:

Будет определена остаточная протеолитическая активность препаратов трипсина по желатине.

Будет проведена сравнительная оценка остаточной протеолитической активности препаратов трипсина.

Список литературы

1. Грачева И.М. Технология ферментных препаратов / Грачева И.М., Кирова А.Ю. - М.: Элевар, 2000.- 512 с.

2. Щербаков, В.Г. Биохимия: учебник / В.Г. Щербаков, В.Г. Лобанов, Т.Н. Прудникова. – СПб.: ГИОРД, 2009 – 472 с.

3. Димитриев, А.Д. Биохимия: учебное пособие / А.Д. Димитриев, Е.Д. Амбросьева. – М.:Дашков, 2013 – 168 c.

4. Канаев П.А. Трипсин – итоги экспериментальных и клинических исследований фармакотерапевтической эффективности препарата / Канаев П.А, Шенгер А.А, Борисова Е.Ю., 2009. – 19с

5. В.И.Кулакова. Системная энзимотерапия. Опыт и перспективы /. В.И. Кулакова, В.А. Насоновой, В.С. Савельева. – СПб.: Интер-Медика. 2004. – 264 с.