XII Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2020

Выделяют культуры стрептококка на питательных средах с последующей идентификацией с применением стрептококковых групповых диагностических сывороток в серологических реакциях преципитации, коагглютинации, латекс-агглютинации и др [1].

Постановка реакции преципитации по Ленсфильду: суточную культуру, выросшую на бульоне Мартена, разливают в несколько центрифужных пробирок, центрифугируют в течение 10-15 мин (3000 об/мин).

Надосадочную жидкость сливают в банку с дезинфицирующим раствором, а осадок заливают стерильным изотоническим раствором натрия хлорида и вновь центрифугируют. К осадку, собранному из всех центрифужных пробирок, прибавляют 0,4 мл 0,2% хлороводородной кислоты. Затем пробирку помещают в водяную баню и кипятят 15 мин, периодически встряхивая. После кипячения полученную взвесь вновь центрифугируют. Антиген при этом экстрагируется в надосадочную жидкость, которую сливают в чистую пробирку и нейтрализуют 0,2% раствором гидроксида натрия до рН 7,0-7,2. В качестве индикатора прибавляют бромтимоловый голубой (0,01 мл 0,04% раствора). При указанной реакции цвет меняется от соломенно-желтого до голубого [5].

Затем в 5 преципитационных пробирок разливают по 0,5 мл антистрептококковых групповых сывороток, которые готовят иммунизацией кроликов. В 1-ю пробирку вносят сыворотку А, во 2-ю - сыворотку В, в 3-ю - сыворотку С, в 4-ю - сыворотку D, в 5-ю - изотонический раствор натрия хлорида (контроль). После этого пастеровской пипеткой во все пробирки по стенке осторожно наслаивают полученный экстракт (антиген).

При положительной реакции в пробирке с гомологичной сывороткой на границе экстракта с сывороткой образуется тонкое молочно-белое кольцо [2].

Реакция агглютинации латекса (РАЛ), или реакция латекс-агглютинации, разработана давно, однако она не нашла достаточно широкого применения в медицине и в ветеринарии.

Тем не менее усиливающаяся тенденция использовать в качестве носителей антигенов и антител инертные синтетические материалы привела к оживлению интереса к РАЛ и широкому изучению возможностей ее применения [3].

Независимо от вида диагностикума и количества антител (антигена) в исследуемом материале результаты РАЛ могут быть учтены уже через несколько минут после смешивания реагентов. При наличии в исследуемом образце искомого микроорганизма склеивающиеся частицы латекса образуют агглютинат, хорошо видимый невооруженным глазом. Можно использовать лупы с небольшим увеличением. При отрицательных результатах реакции суспензия латекса остается гомогенно-мутной, без глыбок агглютината и участков просветления. При малой или низкой активности диагностикума, а также невысокой концентрации антигена пластинки лучше инкубировать при 37 °С, что несколько ускоряет образование агглютината [4].

Результат реакции оценивают по трехбалльной системе:

«++++» — четкая агглютинация, крупные хлопья в прозрачной жидкости;

«++» — четкая видимая агглютинация диагностикума, однако фон полностью не просветляется;

«-» — жидкость остается гомогенно-мутной (отрицательная реакция).

Применять промежуточные оценки интенсивности реакции («+++», «+») нецелесообразно, так как они достаточно субъективны.

Библиографический список

1. Госманов, Р. Г. Ветеринарная микробиология и иммунология [Текст]: учебное пособие / Р. Г. Госманов, Колычев Н. М. – М.: КолосС, 2006.- 112 с.

2. 5. Колычев, Н.М. Ветеринарная микробиология и микология [Текст] : учебник / Н.М. Колычев, Р.Г. Госманов. - Санкт-Петербург : Лань, 2014. - 315 с.

3. Стрептококки [Электронный ресурс]: Биология – Режим доступа: http://biologylib.ru/books/item/f00/s00/z0000015/st019.shtml. – 06.11.2019

4. СТРЕПТОКОККОЗ (STREPTOCOCCOSIS) [Электронный ресурс]: Neznaniya.Net – Режим доступа: http://neznaniya.net/zooinzhenerija/bolezni-domashnih-ptic/8184-streptokokkoz-streptococcosis.html. – 06.11.2019

5. Федоренко, И.С. Микробиология и иммунология [Текст]: учебное пособие / И.С. Федоренко, С.П. Перерядкина, Е.А. Харламова. — Волгоград: Волгоградский ГАУ, 2017. – 33 с.