XI Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2019

Актуальность темы. Проблема бруцеллеза до настоящего времени остается актуальной для здравоохранения и ветеринарии.

Как известно, любая инфекционная болезнь возникает, и существуют до тех пор, пока происходит взаимодействие звеньев эпизоотической цепи: источник возбудителя - механизм и факторы передачи - восприимчивые животные. Начальным этапом противоэпизоотических мероприятий является выявление источника инфекции с помощью различных диагностических методов.

Одним из наиболее надежных способов предупреждения энзоотий и ликвидации очагов бруцеллеза является эффективная диагностика инфекции, основанная на лабораторных методах исследования [1].

Целью исследования работы является сравнительное изучение некоторых серологических методов диагностики бруцеллеза.

В соответствии с поставленной целью была определена следующая задача:

1. Провести сравнительный анализ традиционных серологических методов (РА, РСК) и тест-системы на ИФА.

Работа выполнена в течение 2014-2017гг ФБГОУ ВО «Тувинский государственный университет» на кафедре «Ветеринарии» сельскохозяйственного факультета,  в условиях РГУ «Тувинская ветеринарная лаборатория».

Эпизоотическая ситуация по бруцеллезу сельскохозяйственных животных в республике, остается напряженной. Появление ее было связано с завозом племенных животных из западных областей страны. За эти годы эпизоотическая ситуация в республике по бруцеллезу крупного и мелкого рогатого скота, который имеет не только эпизоотологическое, но и эпидемиологическое значение, значительно осложнилась, прежде всего, в связи с резко изменившимися социально - экономическими условиями, повлекшими за собой реструктуризацию практически всех отраслей животноводства.

Все это поставило перед ветеринарной службой республики новые задачи для разрешения.

В условиях республиканской ветеринарной лаборатории также районных лабораториях для диагностики бруцеллеза используются серологический метод диагностики.

В  республиканской ветеринарной лаборатории исследовали пробы крови крупного рогатого скота (65 голов) и овец (43 головы). Их исследовали в РА,РСК и ИФА со стандартным и полученными нами антигенами.

При исследовании сыворотки крови животных этот антиген выявил 9 положительно реагирующих животных.

При исследовании сыворотки крови крупного рогатого скота в РСК со стандартным антигеном было получено 12 положительных и 1 сомнительный результат, а с антигеном из дезинтеграта 25 положительных и 7 сомнительных. Следовательно, в РСК антиген из дезинтеграта проявляет большую активность, чем антиген из цельных клеток.

При исследовании сыворотки крови крупного рогатого скота с помощью ИФА было выявлено вдвое большее количество положительно реагирующих животных в сравнении с РСК со стандартным антигеном, в то время как РСК с антигеном из дезинтеграта дала весьма схожие с ИФА результаты.

ИФА со стандартным антигеном дал два сомнительных результата. Антиген из дезинтеграта позволил разрешить эту проблему. В этом тесте один сомнительный случай дал положительный результат, а другой - отрицательный. В остальных случаях оба антигена в ИФА дали идентичные результаты. Однако показатели оптической плотности в положительных случаях были выше в анализе с антигеном из дезинтеграта, что свидетельствует о его большей активности.

При исследовании сывороток крови овец в ИФА опытным антигеном было выявлено 9 положительно реагирующих овец, в то время как стандартный антиген выявил лишь 4.

Анализ данных за 2014-2017гг показал, что ситуация по бруцеллезу остается напряженной и результаты исследований на бруцеллез крупного рогатого скота  представлены в таблице 1.

Таблица 1

Исследовано на бруцеллез серологическим методом крупного рогатого скота

в течение 2014-2017 гг.

Животные	Годы
	2014		2015		2016		2017
	n	+	n	+	n	+	n	+
Общественный сектор
Коровы	1523	-	2124	5	1400	-	2631	-
Телки	419	1	381	2	553	-	383	-
Быки-производители	254	-	202	-	355	-	254	-
Частный сектор
Коровы	40933	98	43567	111	39631	44	43523	96
Телки	15615	9	17253	14	15728	2	17269	5
Быки-производители	3734	2	5189	3	5293	-	5174	3
Всего	62478	110	68716	135	62960	46	69280	104

 

Из проведенных данных таблицы 1 мы видим, что в 2014 году было исследовано всего 62478 пробы, из них 110 пробы были положительными на бруцеллез. Причиной положительно выявленных является миграция животных, так как в частном секторе закупают скот без ветеринарных свидетельств и паспортов. Поэтому увеличилось поголовье положительных на бруцеллез животных и в 2015 году и составило 135 проб. В 2016 году положительно реагирующих было 46, так как исследовано всего 62960 проб. Из показателей 2017 года количество положительных реагирующих стало больше так, как исследовано, было намного больше 69280 проб.

Таблица 2

Исследовано на бруцеллез серологическим методом мелкого рогатого скота в течение 2014-2017 гг.

Животные	Годы
	2014		2015		2016		2017
	n	+	n	+	n	+	n	+
Общественный сектор
Бараны-производители	4983	-	5413	1	6076	-	7112	-
Овцематки	18	-	40	-	319	-	417	-
Ярки	8516	-	13219	-	11792	-	13152	-
Частный сектор
Бараны-производители	3026	9	3174	8	2855	4	3695	2
Овцематки	14878	147	8088	21	5260	-	7169	4
Ярки	3459	25	43815	24	49215	-	52215	16
Всего	30880	181	73749	54	75517	4	83760	22

 

Из проведенных данных таблицы 2 видно, что 2014 году было исследовано всего 30880 пробы, из них 181 пробы были положительными на бруцеллез , а в 2015 году сократилось поголовье положительных на бруцеллез животных, из показателей 2017 года количество положительных реагирующих стало больше так, как исследовано, было намного больше 83760 проб.

Пробы сыворотки крови от сомнительно реагирующих животных повторно исследовались  с помощью тест – системы методом  ИФА.

 

Таблица 3. Исследовано по бруцеллезу тест-системой на ИФА в течение 2014-2016 гг.

№п\п	Животные	Годы
		2014		2015		2016
		n	+	n	+	n	+
1	Крупный рогатый скот	1709	24	1149	22	2591	22
2	Мелкий рогатый скот	492	11	785	24	66	1
3	Всего	2201	35	1934	46	2657	23

 

Из проведенных данных таблицы 3 видно, что опытный антиген выявляет в ИФА больше положительно реагирующих на бруцеллез животных, чем существующий, а также позволяет разрешать сомнительные случаи. Следовательно, активность и специфичность опытного антигена превышают таковые существующего.

Результаты исследований показали, что РА и РСК со стандартным единым антигеном при исследовании сыворотки крови животных выявляют приблизительно одинаковое количество положительно реагирующих животных. Однако диагностическая ценность РСК может быть существенно улучшена, если в качестве антигена использовать клеточный дезинтеграт. Тот же вывод можно сделать относительно ИФА. В целом можно сказать, что ИФА значительно более ценный диагностический метод в сравнении с РА и РСК при исследовании сывороток крови животных на бруцеллез.

В результате проведенных исследований установили, что разработанная тест-система ИФА перспективна для применения в качестве скрининговой при массовых исследованиях животных на бруцеллез, обеспечивая возможность прибегать к классическим методам исследований РА и РСК лишь при переисследовании проб сывороток крови животных с положительными и сомнительными результатами ИФА. Ее использование позволяет значительно сэкономить время, затрачиваемое на проведение исследований, учет и интерпретацию полученных результатов, упростить и повысить объективность и воспроизводимость этих процессов за счет их инструментального обеспечения; а также обеспечить высокую безопасность (за счет исключения прямого контакта с антигеном, автоматического пипетирования проб и др.).

Литература

1. Антонов Б.И. Наставления по диагностике бруцеллеза животных, 2000. 157 с.

 

Код для цитирования: Скопировать