XI Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2019

Актуальность. Кровепаразитозы относятся к группе трансмиссивных инвазий, т.е. болезней, передаваемых через кровососущих членистоногих. Этот фактор определяет ряд биологических и эпизоотологических особенностей этой группы болезней. Одной из важнейших биологических особенностей этих болезней является длительное, иногда пожизненное, сохранение паразитов в организме переболевших животных. Такие животные являются основным резервуаром инвазии в природе и постоянно заражают членистоногих – переносчиков, в организме которых паразиты выживают относительно недолго. А те, в свою очередь, создают природный неблагополучный очаг и распространяют болезни среди восприимчивых животных.

Кровепаразиты, в частности, пироплазмоз непродуктивных животных до настоящего времени остается проблемой для Алматы и его пригородов и вызывает интерес у исследователей, что приведено в работе А.А.Ибраимовой, Д.М.Хусаинова, Г.С.Шабдарбаевой (2016) [1].

Роль и важность своевременной и надежной диагностики кровепаразитозов в комплексе мер борьбы с ними не вызывают сомнений, особенно с учетом того, что на сегодняшний день разработаны достаточно эффективные методы и средства стерилизации организма животных от кровепаразитозов.

Многие исследователи при диагностике кровепаразитозов использовали эпизоотологические, клинические, микроскопические, серологические методы диагностики, спленэктомию, которая провоцирует острое течение болезни, ксенодиагностику, метод исследования клещей-переносчиков на инвазированность кровепаразитами и патолого-анатомический метод. Так в Казахстане имеются работы Н.А.Ефремова (1987); М.К.Жантуриева, Б.М.Жантуриева, (1998), в которых впервые упоминается о пироплазмозе собак на территории республики [2,3]. Позже ряд исследователейизучали распространение кровепаразитов животных на юго-востоке Казахстана; иксодофауну и особенности эпизоотологии пироплазмоза собак; исследовали иксодид на зараженность кровепаразитами; разработали пути совершенствования диагностики пироплазмоза, его лечение и профилактику: Г.С.Шабдарбаева Г.С., А.И.Балгимбаева (2005; 2006; 2008; 2009); Г.С.Шабдарбаева Г.С., А.И.Балгимбаева, А.С.Ибажанова (2009; 2010); Е.Крылова, Г.С.Шабдарбаева (2018) [4,5,6,7,8,9,10].

Эффективность диагностических исследований при кровепаразитозах непродуктивных животных до сих остается актуальной.

Цель исследований. Изучить различные методы окраски и обогащения мазков крови от непродуктивных животных для усовершенствования диагностики кровепаразитозов.

Материалы и методы исследований. Для оценки диагностической ценности различных методов обогащения мазков крови с целью наиболее эффективной диагностики кровепаразитозов у непродуктивных животных исследовали одних и тех же животных на базе ветеринарной клиники «У Лукоморья» и лаборатории «Противопаразитарной биотехнологии» кафедры «Биологическая безопасность» Казахского национального аграрного университета.

При изучении клинических параметров отмечали общее состояние животного, температурную реакцию, состояние видимых слизистых оболочек, наличие или отсутствие гемоглобинурии.

Исследовали подозрительных в заболевании кровепаразитозами собак несколькими лабораторными методами: методом приготовления тонких мазков крови из периферических сосудов при окрашивании традиционным методом Романовского-Гимза; метод ускоренной окраски мазков крови по Романовскому; методом Лейшмана; методом Нохта [11].

Подробно все методы описаны в разделе «Результаты и обсуждение».

Всего исследованы мазки крови от 31 собаки. Микроскопирование приготовленных разными методами мазков крови и дифференциацию кровепаразитов проводили с помощью тринокулярного микроскопа с компьютером KARL ZEISS с фотографированием наиболее характерных мазков и форм паразитов, пользуясь описанием морфологии кровепаразитов, их рисунками и фото.

Результаты и обсуждение.

Нами в сравнительном аспекте были использованы следующие методы исследования мазков крови:

1. Метод окрашивания мазков по Романовскому-Гимза - мазки крови готовили от температурящих животных на обезжиренных предметных стеклах с помощью шлифованного стекла, высушивали при комнатной температуре, фиксировали 96º этиловом спирте и красили методом Романовского-Гимза, экспозиция – 40 минут. Смывали краску дистиллированной водой, высушивали мазки и просматривали их под иммерсионной системой микроскопа по линии Меандра на наличие кровепаразитов. Всего просматривали по 50 полей зрения (п.з.) микроскопа.

2. Метод ускоренной окраски мазков крови по Романовскому – на нефиксированный мазок, помещенный в чашку Петри, наносили 15-20 капель смеси из равных частей неразведенной краски Романовского-Гимза и ацетона. Через одну минуту добавляли 8-10 капель слабощелочной дистиллированной воды, смешивали с ранее нанесенной на мазок смесью краски с ацетоном путем легкого покачивания чашки Петри. Через 10 мин. мазок споласкивали водой и сушили. Просматривали их под иммерсионной системой по линии Меандра на наличие кровепаразитов 50 п.з. микроскопа.

3. Метод Лейшмана – нефиксированный мазок крови покрывали фильтровальной бумагой и на нее наносили пипеткой 10-15 капель готовой краски Лейшмана, приготовленной на основе метиленового спирта, обладающего фиксирующими свойствами. Через 3 минуты нанесенную краску разбавляли 10-15 каплями дистиллированной воды, смешивая ее на мазке пипеткой. Еще через 3 минуты краску сливали, мазок обмывали дистиллированной водой, просушивали фильтровальной бумагой и просматривали под иммерсионной системой по линии Меандра на наличие кровепаразитов в 50 п.з. микроскопа.

4. Метод Нохта – готовили раствор эозина и раствор азура ІІ по отдельности на дистиллированной воде в концентрации 1:1000, хранили их в сухом темном месте. Далее для окраски мазков готовили рабочие растворы на дистиллированной воде нейтральной реакции из расчета 2 мл основного раствора красок на 4 мл воды. Затем краски смешивали и полученной смесью окрашивали мазки методом подслаивания. Через 40 минут мазки обмывали водой, высушивали и исследовали под иммерсионной системой микроскопа по линии Меандра на наличие кровепаразитов в 50 п.з. микроскопа.

Результаты исследования мазков крови плотоядных животных различными вариантами приведены в таблице 1.

Таблица 1 – Оценка различных методов исследования мазков крови непродуктивных животных на наличие кровепаразитов

Из таблицы 1 видно, что самая высокая выявляемость кровепаразитов в наших исследованиях отмечена при исследовании мазков крови традиционным методом Романовского-Гимза. Этот метод достаточно информативен, его выявляемость равна 87,1%, при исследовании обнаружен кровепаразит видаPiroplasma canis.

Метод ускоренной окраски мазков крови по Романовскому выявлял до 83,1% паразитов, обнаружена смешанная инвазия двумя видами кровепаразитов Piroplasma canis +Babesiacanis.

Методы Лейшмана и Нохта показали выявляемость 74,2% и 80,6%, соответственно. В обоих случаях выявлен кровепаразит вида Piroplasma canis.

Таким образом, на основании проведенных лабораторных исследований установлены наиболее эффективные по выявляемости кровепаразитов лабораторные методы окрашивания и исследования мазков крови.

Самая высокая выявляемость кровепаразитов, равная 87,1% отмечена при исследовании мазков крови, окрашенных традиционным методом Романовского-Гимза, что и рекомендовано для ветеринарной практики в ветеринарных лечебницах, питомниках, заводчикам для уточнения диагноза на кровепаразитозы у непродуктивных животных.

Но 100%-ной выявляемости кровепаразитов нами не было установлено. Следовательно, использованными методами могут быть не выявлены животные-кровепаразитоносители с малой степенью инвазированности, которые будут очаго кровепаразитоза в регионе. Отсюда следует, что поиски по усовершенствованию диагностики кровепаразитозов животных, в том числе и непродуктивных животных, долны быть продолжены.

Список литературы.

Ибраимова А.А., Хусаинов Д.М., Шабдарбаева Г.С. – Пироплазмоз (бабезиоз) собак в г.Алматы//St. Grigol Peradze Tbilisi Teaching University. Scientific Works IV. Materiales of InternationalScientificand Practical Conference «Georgia and Modern World-Challenges, Achievements, Progress». Tbilisi, November 25-26, 2016. P. 310-317.

Ефремов Н.А. Пероральное заражение собак//Современные проблемы протозоологии: Тезисы докл. и сообщений 4-го съезда Всесоюзного общества протозоологов. Л., 1987.

Жантуриев М.К., Жантуриев Б.М. Новые пироплазмиды фауны Казахстана // Вестник с/х науки Казахстана. –1998- № 6.

Шабдарбаева Г.С., Балгимбаева А.И. Получение паразитарной массы из крови, инвазированной Piroplasmacanis для приготовления пироплазменного антигена//Матер. междунар. научно-практич. конф. «Современное состояние и актуальные проблемы развития ветеринарной науки и практики», посвященной 100-летию КазНИВИ. Т.2., Алматы, 2005.

Шабдарбаева Г.С., Балгимбаева А.И. К распространению кровепаразитов животных на юго-востоке Казахстана//ж. «Вестник КазНУ им. Аль-Фараби». Серия биологическая, 2006, № 2. С. 49 - 53.

Шабдарбаева Г.С., Балгимбаева А.И. Иксодофауна и особенности эпизоотологии пироплазмоза собак на юго-востоке Казахстана//Материалы научно-практической конференции «Инновации в аграрном секторе Казахстана», посвященной 75-летию профессора К.С.Сабденова. Алматы, 2008. С. 575-581.

Шабдарбаева Г.С., Балгимбаева А.И. Иксодофауна и исследования по зараженности иксодид кровепаразитами//Материалы международной научно-практической конференции «Высшая школа и аграрная наука – сельскому хозяйству», посвященной 100-летию со дня рождения Садыкова Б.Х., 90-летию Федосеева В.С., 75-летию Абдильманова У.А., г.Семей, 2009. С. 203-208.

Шабдарбаева Г.С., Балгимбаева А.И., Ибажанова А.С. Диагностика пироплазмоза собак, пути совершенствования//Сборник статей (часть 4) ІV Международной научной конференции «Инновационное развитие и востребованность науки в современном Казахстане», естественно-технические наук. Фонд Президента Республики Казахстан, Совет молодых ученых. ИД «Жибек жолы», Алматы, 2010. С. 228-232.

Шабдарбаева Г.С., Балгимбаева А.И., Ибажанова А.С. Пироплазмоз собак, его лечение и профилактика//Сборник статей (часть 4) ІV Международной научной конференции «Инновационное развитие и востребованность науки в современном Казахстане», естественно-технические наук. Фонд Президента Республики Казахстан, Совет молодых ученых. ИД «Жибек жолы», Алматы, 2010. С. 233-237.

10.Крылова Е., Шабдарбаева Г.С. - Диагностика кровепаразитозов у непродуктивных животных//Материалы X Международной студенческой электронной научной конференции «СТУДЕНЧЕСКИЙ НАУЧНЫЙ ФОРУМ 2018», Москва, 2018. САЙТ: http://scienceforum.ru/2018/3/7954.

11. Орлов Н.В., Агринский Н.И., Никольский С.Н. Практикум по ветеринарной паразитологии//Изд-во сельскохозяйственной литературы, журналов и плакатов. М., 1962. С. 60-61; 185-187; 195-200; 213.