XI Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2019

Листериоз (Listeriosis) – антропозооноз, характеризующийся поражением центральной нервной системы, лихорадкой, абортами, развитием врожденных пороков плода, сепсисом и пневмонией у новорожденных [3]

Диагностика листериоза основывается на основании комплекса эпизоотологических данных и результатов лабораторного исследования. При этом наиболее важное значение имеет бактериологическое исследование - выделению культуры листерий. Серологические методы (в основном РА) применяются для определения эпизоотической ситуации в хозяйствах, где в результате комплексного исследования с выделением культуры возбудителя, был обнаружен листериоз [1]

В лабораторию направляются целые трупы мелких животных. От крупных животных направляется голова, часть печени, почки, селезенка и пораженные участки легких. При наличии абортированных плодов – отправляют их вместе с околоплодными оболочками.

Прижизненно направляются истечения из влагалища абортировавших самок, при наличии воспалений молочной железы – молоко из пораженных долей. Так же направляется сыворотка крови.

Материал в консервированном (в 30 %-ном водном растворе глицерина) виде упаковывают в полиэтиленовые пакеты, помещают в контейнер, опечатывают и вместе с сопроводительным документом и нарочным направляют в лабораторию. В сопроводительном документе отмечаются наименование и адрес отправителя, опись проб, эпизоотологические (эпидемиологические) данные [2].

Бактериологическая диагностика при листериозе представляет собой комплекс, состоящий из микроскопического исследования, посевов на питательные среды, идентификацию полученных культур, а также постановку биопробы на лабораторных животных [1].

Микроскопическое исследование. Микроскопическому исследованию подвергают мазки-отпечатки из головного мозга, внутренних органов и тканей. Мазки окрашивают по Граму. Возбудитель листериоза - Listeria monocytogenes – обнаруживается в мазках как грамположительная подвижная неспорообразующая полиморфная, чаще палочковидная бактерия длиной 0,5 - 2,0 мкм.

Так же рекомендуется воспользоваться методами окраски флюоресцирующих антител (прямой метод и непрямой). При визуализации возбудителя с характерной морфологией и свечением с интенсивностью не ниже чем на три креста, ставят положительный результат [2, 3].

Посевы на питательные среды. Из патологического материала готовят суспензию на физиологическом растворе (1:5) и производят посевы. Используют обычные среды с добавлением 1 % глюкозы и 23 % глицерина, печеночный агар и бульон (pH среды 7,2 - 7,4). Посевы инкубируют в термостате при 37° с контролем в первые 3 - 4 дня. При отсутствии роста наблюдение за посевами проводят в течение двух недель.

Весьма характерным для колоний листериоза является легкое помутнение бульона и появление небольших росинчатых колоний на агаре, наличие бета-гемолиза на кровяном агаре. Колонии листерий в проходящем свете имеют мелкозернистую структуру и голубую окраску с зеленоватым оттенком.

Из выделенной культуры делают мазки, окрашивая их по Граму, а также для люминесцентной микроскопии с применением прямого и непрямого метода флюоресцирующих антител. Подвижность определяется методом раздавленной капли. Листерии крайне подвижны.

Ферментативные свойства определяются пересеванием чистой культуры на пестрый ряд - при 37 °C в течение 10 дней. Листерии разлагают глюкозу, мальтозу, трегалозу, салицин с образованием кислоты, без газа. Но не разлагают дульцит, инулин, раффинозу, манит [2].

Биопроба. Биопробу производят на 2 - 3 белых мышах (масса 14 - 16 г). Заражение проводят внутрибрюшинно, подкожно суспензией или культурой в дозе 0,3 - 0,5 мл. При положительной биопробе животные погибают через 2 - 6 суток после заражения. При вскрытии отмечают множественные некротические очажки в печени, селезенке, почках. При наблюдении более 10 дней рекомендуется дополнительно делать посев из головного мозга. Очень чувствительны к подкожному заражению 5 - 6-дневные мыши-сосуны, которые гибнут через 18 - 36 часов [2].

Из внутренних органов (печень, селезенка, почки, сердце) павших животных делают мазки-отпечатки и высевы на питательные среды [3].

Серологическая диагностика. Поливалентная листериозная агглютинирующая сыворотка представляет собой смесь кроличьих листериозных агглютинирующих сывороток и содержит факторы Н-АВ и 0 - II, V, VI, VII, IX. Поливалентная сыворотка в капельной реакции агглютинации на стекле агглютинирует все известные серовары листерий.

Реакцию агглютинации ставят на чистых обезжиренных предметных стеклах. На предметное стекло наносят две капли: каплю поливалентной сыворотки и каплю физиологического раствора. К обеим каплям на стекле добавляют по одной капле смыва культуры, смесь тщательно и быстро перемешивают бактериологической петлей или запаянным концом пастеровской пипетки, после чего стекла плавно покачивают круговыми движениями. Одновременно для контроля один раз в день исследуют на стекле каплю сыворотки с добавлением капли физиологического раствора.

Учет результатов РА проводят в течение 3-х минут. Реакция считается положительной при появлении четкой агглютинации (образование хлопьев) в капле с сывороткой при ее отсутствии в контроле. Запоздалые реакции не учитывают [1, 2].

В результате проведения комплексной лабораторной диагностики диагноз на листериоз считается установленным при обнаружении листерий в патматериале иммунофлюоресцентным методом, а также при выделении грамположительной полиморфной подвижной палочки, образующей каталазу и разлагающей с образованием кислоты глюкозу, мальтозу, трегалозу и салицин; дающей положительную РА с листериозной сывороткой; обладающей патогенностью для лабораторных животных (вирулентные штаммы) [3].

Список использованных источников

Ибрагимова. М.Л. Современные аспекты листериозной инфекции (обзор литературы) [Электронный ресурс] - Электрон. дан. - Вестник АГИУВ. - 2016. - № 1. - С. 75-80. - Режим доступа: http://e.lanbook.com/journal/issue/298709

Методические рекомендации по лабораторной диагностике листериоза животных и людей от 13 февраля 1987 г. // утв. Министерством здравоохранения СССР и Госагропромом СССР – 1987. – 15с.

Никитин, И.Н. Организация государственного ветеринарного надзора [Электронный ресурс] : учебник / И.Н. Никитин, А.И. Никитин. - Электрон. дан. - Санкт-Петербург : Лань, 2019. - 460 с. - Режим доступа: https://e.lanbook.com/book/113922.

Код для цитирования: Скопировать