XI Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2019

Исследования сывороток больных животных на наличие в них антител, а также определение титров антител в специфических сыворотках при их промышленном изготовлении осуществляются с помощью антигенов-диагностикумов. По происхождению такие антигены подразделяются на бактериальные, риккетсиальные, вирусные [5].

При изготовлении бактериальных антигенов используют или живые культуры или гомогенные стандартизированные взвеси убитых микробов. Антигены из живых культур применяются редко, так рак это связано с определенными технологическими трудностями, также возможностью заражения лабораторного персонала. Диагностикумы из убитых культур являются предпочтительными [2].

Приготовление диагностикумов связано прежде всего с тщательной подготовкой и селекцией штаммов микроорганизмов, из которых они готовятся. Производственные штаммы должны находиться в S-форме. Это обеспечивает им хорошую агглютинабильность, специфичность и образование устойчивой гомогенной взвеси. Чаще всего для получения диагностикумов определенные штаммы микроорганизмов выращивают на агаровых средах. Культуры микробов смывают с поверхностиа агара, а затем их инактивируют 0,5%-м раствором формалина (бруцеллезный, туляремийный антиген), 1%-ми растворами борной кислоты (листериозный, сальмонеллезные, коли-антигены), нагреванием (бруцеллезный антиген) и другими методами [4].

Бактериальная клетка содержит в себе комплекс различных антигенов, как полноценных, так и гаптенов (неполноценных).

У микробов различают видовые, типовые, групповые (видо-, типо-, группоспецифические) антигены, специфичность которых определяется химическими группами молекул клеток [3].

Различают капсульные, жгутиковые и соматические антигены. Каспсульные антигены содержатся в капсуле капсулообразующих микробов и отличаются от антигенов клетки.

Капсульные антигены являются полисахаридами, так капсула сибиреязвенного микроба содержит протеиноподобное вещество - полипептид. Жгутиковые антигены (Н-антигены) содержатся в жгутиках подвижных бактерий, термолабильны, легко разрушаются при температуре 60-80˚С; являются белками [3].

Соматические антигены (О-антигены) содержатся в протоплазме бактерий, термостабильны - выдерживают нагревание при температуре 100˚С 1-2 ч, представляют собой полисахаридно-полипептидный комплекс.

Каждый антиген вызывает образование особых антител. Например, Н-антигены не участвуют в формировании иммунитета, а О-антигены обладают хорошо выраженной иммуногенной способностью.

Приготовление диагностикумовсвязано прежде всего с тщательной подготовкой и селекцией штаммов микроорганизмов, из которых они готовятся. Производственные штаммы должны находиться в S-форме. Это обеспечивает им хорошую агглютинабильность, специфичность и образование устойчивой гомогенной взвеси [2,3].

Для получения диагностикумов определенные штаммы микроорганизмов выращивают на агаровых средах. Культуры микробов смывают с поверхности агара; а затем их инактивируют 0, 5%-м раствором формалина (бруцеллезный, туляремийный антиген), 1%-ми растворами борной кислоты (листериозный, сальмонеллезные, коли-антигены), нагреванием (бруцеллезный антиген) и другими методами. О-диагностикумы готовят обычно из неподвижных вариантов культур, полученных при выращивании на плотных питательных средах и обработанных спиртом или глицерином. Наиболее трудно приготовить Vi-антиген, так как он обладает малой устойчивостью к различным воздействиям, в том числе и к формалину. Готовится он из поверхностных компонентов микробных клеток, консервируется формалином, но перед формалнизацией его стабилизируют 25%-м раствором хлорида кальция [3,4].

Антигены бывают корпускулярными и растворимыми.

Корпускулярные антигены представляют собой взвесь убитых, реже живых микробов в физиологическом растворе с определенной концентрацией консерванта. Во всех случаях антигены подвергают высокой степени очистки. Такие антигены используются для постановки РА, РСК, РДСК.

Растворимые антигены готовят в виде экстрактов из агаровых культур соответствующих микробов. Они используются для постановки серологического диагноза с применением РСК при сапе, бруцеллезе, инфекционном эпидидимите баранов и других заболеваниях, а также при постановке реакции иммунодиффузии (РИД) на бруцеллез, лейкоз и многие другие инфекции [2,3,4].

При диагностике пуллороза — тифа птиц при постановке кровекапельной реакции агглютинации (ККРА) на стекле используют цветной антиген, представляющий собой гомогенную взвесь микробных клеток S. gallinarum, убитых формалином и окрашенных кристалл-виолетом.

Антиген готовится из пяти штаммов указанного микроба, вирулентных для птиц и находящихся в S-форме.

Из Mycoplasma gallisepticum готовится антиген для диагностики респираторного микоплазмоза птиц. Он представляет собой взвесь микробных клеток, обезвреженных фенолом и окрашенных 0,5%-м спиртовым раствором генцианвиолета.

При некоторых инфекционных заболеваниях (бруцеллез, пуллороз и другие) используются эритроцитарные диагностикумы.

Такие антигены представляют собой 5-10%-ю взвесь эритроцитов барана, сенсибилизированных полисахаридно-полипептидной фракцией соответствующих возбудителей болезни. Они предназначены для прижизненной диагностики указанных и некоторых вирусных инфекций с применением реакции непрямой гемагглютинации (РНГА).

Для получения полисахаридно-полипептидной фракции проводят гидролиз бактерийной массы сальмонелл уксусной кислотой и осаждение её этиловым спиртом [3,4].

Кровь для получения эритроцитов берут стерильно из яремной вены животного в сосуд со стерильным раствором Олсевера. Эритроциты несколько раз отмывают стерильным фосфатным буфером, центрифугируют, консервируют формалином и ресуспендируют в фосфатно-буферном растворе. Затем ихсенсибилизируютполисахаридно-полипептидной фракцией сальмонелл. Сенсибилизированные эритроциты разводят фосфатным буфером с формальдегидом до 10%-й концентрации, расфасовывают во флаконы и сдают на контроль. Эритроцитарный антиген контролируют на активность, специфичность, стерильность, концентрацию эритроцитов и pH[3,4].

Библиографический список

Тутов И. К Ситьков В. И. Основы биотехнологии ветеринарных препаратов. - Ставрополь, 1997.

Диагностикумы [Электронный ресурс]-12.12.2018. Источник: https://studfiles.net/preview/2481879/page:5/

Диагностикумы [Электронный ресурс]-12.12.2018. Источник:https://mydocx.ru/7-108065.html

Диагностикумы [Электронный ресурс]-12.12.2018. Источник: https://studbooks.net/1888198/meditsina/antigeny_diagnostikumy_kontrol_diagnosticheskih_standartnyh_antigenov

Диагностикумы [Электронный ресурс]-12.12.2018. Источник: https://infopedia.su/5x1525.html