XI Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2019

Болезнь Ауески (псевдобешенство, инфекционный бульбарный паралич, инфекционный менингоэнцефалит) – острая инфекционная болезнь, поражающая все виды сельскохозяйственных, а также домашних и диких животных. Заболевание характеризуется признаками поражения головного и спинного мозга, сильным зудом и расчесами (у всех животных, кроме свиней).

Возбудителем болезни является вирус Suid herpesvirus 1, относящийся к семейству Herpesviridae. Вирионы состоят из двуспиральной ДНК и суперкапсидной оболочки, имеют шарообразную форму. Размер вирионов колеблется в пределах 180…190 нм. Репродукция вируса происходит в ядре клетки [1].

Болезнь Ауески наносит значительный экономический ущерб хозяйствам, особенно свиноводческим фермам, в связи с быстрой распространяемостью заболевания среди свиней и большой смертности молодняка. Помимо этого, предприятиям приходится затрачивать средства на дезинфекцию, вынужденный убой, выбраковку туш, а также на лечение и профилактическую вакцинацию.

По данным информационно-аналитического центра Россельхознадзора последняя вспышка заболевания в России произошла в 2013 году в Москве, где заболело и пало 16 голов свиней. В середине 2018 года в МЭБ сообщено об очаге болезни Ауески на территории Папуа – Новой Гвинеи в 2017 году [2].

Для лабораторной диагностики болезни Ауески был разработан ГОСТ 25753-83 (СТ СЭВ 3454-81) «Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики болезни Ауески» от 22 апреля 1983 г. Государственный стандарт распространяется на крупный рогатый скот, овец, свиней и других животных (пушных зверей, собак и кошек), невакцинированных живыми вакцинами, и устанавливает методы лабораторной диагностики болезни Ауески.

В первом разделе государственного стандарта описывается метод отбора проб патологического материала. Отбор проводится в период максимального проявления клинических признаков болезни от павших или вынужденно убитых животных. В лабораторию отправляются трупы небольших животных или кусочки тканей головного и спинного мозга, легких, печени, селезенки, лимфатических узлов и миндалин, от абортировавших животных – плоды и плаценту. Для серологического исследования количество взятой крови должно быть не менее 5 см³. К патологическому материалу добавляется сопроводительный документ, в котором указываются сведения о хозяйстве, животном, эпизоотологических данных, а так же клиническая и патологоанатомическая картина заболевания.

Второй раздел посвящен методу биологической пробы. Цель данного метода заключается в воспроизведении заболевания у здоровых кроликов. Из отобранных кусочков тканей и органов готовят 10%-ную суспензию на физиологическом или солевом буферном растворе. После чего суспензию центрифугируют, и полученную насадочную жидкость разливают по стерильным пробиркам с добавлением антибиотиков. Кроликов заражают внутримышечным введением насадочной жидкости в дозе 1-2 см³.

Если животные погибают спустя 2 – 10 дней после заражения с яркими клиническими признаками (расчесы, зуд, поражение ЦНС), биопробу считают положительной. В случае смерти животных без указанных признаков, биопробу повторяют, используя патологический материал из первого пассажа.

Третий раздел включает в себя метод выделения вируса в культуре клеток. Для выявления цитопатического действия вируса в пробирки с культурой клеток вносят по 0,2 см³ каждого испытуемого материала. При этом, на каждую пробу используют по 4 – 6 пробирок. Пробирки выдерживают в термостате, далее удаляют насадочную жидкость и добавляют питательную среду, содержащую антибиотики. Для контроля используют 4 – 6 пробирок с незараженной культурой клеток. Все пробирки инкубируют при температуре 37 °С, ежедневно проверяя на цитопатические изменения. При обнаружении изменений, культуральную жидкость из всех пробирок объединяют для дальнейшей идентификации выделенного вируса.

Четвертый раздел содержит сведения о методе идентификации вируса. Для проведения исследования используют положительную и отрицательную сыворотки, разбавленные питательной средой для культуры клеток. В них вносится десятикратные разведения вируса от . Приготовленный материал вносят по 1 см³ в 4 пробирки с культурой клеток и выдерживают в термостате при 37 °С.

Через 2 - 5 суток анализируют цитопатическое действие вируса. Для этого вычисляют титр вируса по методу Рида и Мерча. Видовую принадлежность вируса определяют, в случае если разница в титрах вируса между отрицательной и положительной сыворотками не менее чем на 2 логарифма.

Последний пятый раздел описывает серологический метод исследования. Для проведения реакции необходимо подготовить двукратные разведения испытуемых сывороток от 1:2 до 1:16 на питательной среде для культуры клеток с антибиотиками. Затем к ним добавляют необходимый объем вируса с последовательным разведением сывороток. Смесь выдерживают, после чего вносят в 4 пробирки с культурой клеток. Пробирки оставляют на 30 минут при температуре 37 °С, а затем добавляют поддерживающую среду. Одновременно с реакцией ставят 4 контроля:

контроль незараженных культур клеток;

контроль дозы вируса;

контроль токсичности сыворотки;

контроль специфичности вируса.

Ежедневно проводят проверку на появление цитопатического действия в культурах клеток. Результат исследования считают положительным, если все условия контролей соблюдаются, а цитопатическое действие вируса отсутствует в разведениях сыворотки 1:2 и выше. Присутствие антител в исследуемой сыворотке крови свидетельствует о наличии заболевания у данного животного или его возможной вакцинации. Результат серологического исследования в дальнейшем подтверждается постановкой биологической пробы [3].

Таким образом, был проведен анализ содержания государственного стандарта «Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики болезни Ауески». Документ состоит из пяти разделов, каждый из которых определяет порядок лабораторных исследований. Так, для проверки наличия вируса Ауески в организме животного используются 4 метода: метод биологической пробы, метод выделения вируса в культурах клеток, метод идентификации вируса, а также серологический метод исследования сывороток крови. Данный государственный стандарт используется во всех лабораториях и ветеринарных научно-исследовательских учреждений, что обеспечивает безопасность и контроль над заболеванием.

Библиографический список

Госманов Р.Г. Ветеринарная вирусология [Текст] : учебник / Р.Г. Госманов, Н.М. Колычев ; под общ. ред. Т.С. Молочаевой. – М.: КолосС, 2006 – 304 с.

Россельхознадзор. Официальный сайт [Электронный ресурс] : http://www.fsvps.ru/

Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики болезни Ауески [Текст] : ГОСТ 25753 – 83. – Введ. 1983 – 22 – 04. М. : Госстандарт России, 2004. – 10 с.