XI Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2019

Актуальность такого вида деятельности заключается в том, что цепная реакция полимеразы (ПЦР) считается уникальным методом диагностики и ее преимуществом при определении гриппа. Целью исследования является рассмотрение различных форматов ПЦР для обнаружения РНК вируса.

Для идентификации инфекции были применены следующие форматы:

Формат EPh - для обнаружения РНК вируса гриппа А (Influenza virus A) и обнаружения подтипов Н5 Н7 в биологическом образце ПЦР с использованием электрофореза в агарозном геле. Применяемая для распределения гидрогелевая смесь должна иметь определенные физико-химические характеристики: незначительная токсичная активность на клеточном уровне, проявлять высокие диффузные свойства, значительной проницаемостью, иметь достаточно высокие показатели присутствия сульфатных групп.

Формат FEP – кроме самого вируса идентифицирует подтипы H5, H7 и H9 в пробе полимерной цепной реакцией с флуоресцентной гибридизацией обнаружение по "конечной точке". Основным компонентом формата является действие гибридизации олигонуклеотидных зондов, отмеченных молекулами флуорофора и "темневого" гасителя. Необходимо заметить, что флуоресцентное обнаружение проводится с помощью флуоресцентного детектора после окончания реакции, что не позволяет отнести формат к количественному определению.

Формат FRT для выявления РНК вируса гриппа А (Influenza virus A) и подтипов Н5, Н7,Н9, а так же свиного гриппа А / Н1 в пробе проводится методом ПЦР с обнаружением в «реальном времени» с гибридизационно-флуоресцентной детекцией.Такой формат используется для облегчения одновременного усиления и измерения количества желаемых молекул ДНК. Преимущество этого подхода заключается в способности обнаружения ДНК и так же количественное определение определенных нуклеотидов после каждого цикла усиления.

В результате проведенного полного ПЦР исследования, с использованием трех форматов обнаружения вируса гриппа А и идентифицировать подтипы, было выявлено, что формат FRT является наиболее инновационным, поскольку позволяет провести качественную и количественную оценку определенной последовательности ДНК в пробе в режиме реального времени после каждого цикла усиления.