XI Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2019

С каждым годом клеточные культуры находят новое применение в различных областях сельского хозяйства, медицины и биологии. Так же их используют для решения общебиологических проблем, таких как выяснения механизма дифференцировки и пролиферации, адаптации, взаимодействия клеток со средой, биологической активности, старения, злокачественной трансформации и многих других. При производстве вакцин и БАВ(биологически активных веществ) культурам клеток отводится очень важная роль. Культуры клеток применяют для диагностики и лечения наследственных заболеваний, а также для сохранения генофонда исчезающих видов животных и растений. При испытании новых фармакологических веществ, клеточные культуры используют в качестве тест-систем.

Культивирование клеток представляет собой процесс, в котором в условиях invitroвыращивают отдельные клетки (или единственную клетку) эукариот или прокариот в контролируемых условиях. Термин «культура клеток» относится в основном к выращиванию клеток, которые относят к одной ткани, полученной от многоклеточного эукариота, чаще всего это животных. Развитие технологии и методик выращивания клеточных культур исторически неразрывно связано с выращиванием культур тканей и целых органов.

Согласно правилам биоэтики культивирование клеток человека немного противоречит им. Так как клетки, которые выращивают изолированно, могут пережить родительский организм, а потом использоваться для различных экспериментов или для разработки новых методов лечения, с последующим получением прибыли от этого. Первое судебное разбирательство по этому поводу проходило в Верховном суде штата Калифорния («Джон Мур против представителей Калифорнийского университета»). Согласно решению судьи пациенты лишаются прав собственности на те линии клеток, которые получены из органов, удаленных с их согласия.

Клеточная культура MOLT-4 является культурой периферической крови Т-лимфобластной лейкемии человека. Впервые выделена из периферической крови 19-летнего пациента получившего комбинированную химиотерапию во время рецидива острого лимфобластного лейкоза.

По морфологии эта культура является лимфобластоподобной. Клетки имеющие неизвестное происхождение и с неизвестными потенциями, которые наблюдаются в суспензионных культурах и сходны по внешнему виду с лимфобластами.

Способ культивирования клеточной культуры суспензионный. Суспензионная культура состоит из отдельных клеток и их агрегатов. Выращивание происходит в жидкой питательной среде во взвешенном состоянии. Для того чтобы поддерживать клетки во взвешенном состоянии при глубинном культивировании их подвергают перемешиванию с помощью различных аппаратов. Обеспечение аэрации достигают путем непрерывного вращения или качания среды, либо продуванием стерильным воздухом.

При культивировании клеточной культуры MOLT-4 соблюдаются особые условия: используется среда RPMI 1640, 10% эмбриональная бычья сыворотка.

Среда RPMI (англ. Roswell Park Memorial Institute medium) – используется для выращивания культур клеток и тканей, традиционно для выращивания лимфоидных клеток человека. Содержит оптимальное количество фосфата, предназначена для использования в атмосфере с 5% содержанием углекислого газа. Коммерчески доступна среда RPMI 1640, созданная на основе RPMI. И именно она используется для культивирования клеточной культуры MOLT-4.

Эмбриональные бычьи сыворотки представляют собой жизненно важный компонент базальных культуральных сред, так как являются естественным источником биологически активных молекул, таких как факторы роста и адгезии клеток, липиды, гормоны, минералы, которые нужны для роста клеточной культуры. Так же сыворотки влияют на проницаемость мембраны клеток и выступают в качестве среды-носителя для липидов и ферментов.

Процедура пересева происходит при оптимальной плотности 2.0-5.0х10⁵ клеток/мл. Криоконсервация так же подразумевает собой соблюдение определенных условий: 40% среда RPMI 1640, 50% эмбриональная бычья сыворотка, 10% DMSO (Диметилсульфоксид), оптимальная плотность 5.0-10.0х10⁶ клеток/мл в ампуле. Жизнеспособность после криоконсервации составляет 94%. Оценка жизнеспособности клеточных линий производится, по результатам теста прижизненной окраски трипановым синим на нулевом пассаже (0,4%).

Области применения клеточной культуры MOLT-4: биохимия, изучение цитотоксичности, вирусология, иммунология, канцерогенез.

Коллекции: ATCC CRL 1582; ECACC 85011413; НИИ вирусологии РАМН; ИНЦ РАН.