МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ МАСТИТНОГО МОЛОКА КРС

Ялалтдинова А.В. 1

1ФГБОУ ВО Ульяновский ГАУ

Текст работы размещён без изображений и формул.
Полная версия работы доступна во вкладке "Файлы работы" в формате PDF

Среди всех патологических процессов молочной железы особое место занимают маститы. Они наблюдаются у всех сельскохозяйственных животных и в любое время года [1-3, 23-25].

Маститы коров являются серьезной проблемой для молочного производства во всем мире. Данное заболевание принимает различные формы, каждая из которых имеет свои особенности на любой отдельно взятой молочной ферме. Причиной столь разнообразного проявления мастита является то, что он вызывается более 140 видами бактерий, степень патогенности и скорость распространения которых зависит от целого ряда факторов внешней среды, а также действующих в самом организме коровы [4-7].

Без ясного представления о сущности патологического процесса невозможно поставить точный диагноз, осуществить эффективную терапию и профилактику маститов у коров и других видов животных. Поэтому в каждом отдельном случае необходимо установить характер и степень проявления патологического процесса в молочной железе, для чего необходима четкая классификация [8, 14-16].

Цель работы – изучение некоторых биологических свойств бактерий выделенных из проб маститного молока КРС.

Материал и методика исследований. 16 проб молока от коров, являющихся носителями мастита. Питательный бульон ТУ 10-02-02-789-176-94 (ООО «БиоКомпас-С», РФ), питательный агар для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ-агар) ТУ 9398-020-78095326-2006 (ФБУН ГНЦ ПМБ, РФ); Микро-ГРАМ-НИЦФ набор реагентов для окраски микроорганизмов по методу Грама ТУ 9398-002-39484474-2002 (ЗАО НИЦФ, РФ); среда Гисса с маннитом (ФБУН ГНЦ ПМБ, РФ); среда Гисса с глюкозой (ФБУН ГНЦ ПМБ, РФ); среда Гисса с арабинозой (ФБУН ГНЦ ПМБ, РФ), среда Гисса с мальтозой (ФБУН ГНЦ ПМБ, РФ); среда Гисса с сахарозой (ФБУН ГНЦ ПМБ, РФ); среда Эндо, среда Плоскирева, висмут-сульфит агар, среда Кларка (ООО «БиоКомпас-С», РФ), 0,6 % спиртовой раствор α-нафтола, 40 % КОН, Phenylalanine Agar («HiMedia», Индия); 10%-ный раствор хлорида железа.

Результаты исследований. Из 16 проб молока от коров, являющихся носителями мастита были произведены посевы штрихом на среды: Эндо, Плоскирева, Висмут-сульфит агар, кровяной мясопептонный агар и желточно-солевой агар. Посевы культивировали в условиях термостата в течение 24-48 часов при 37⁰С [9,11]. Результаты исследований представлены в таблице 1.

Из однотипных колоний делали посев на косой агар для дальнейшего их изучения и выделения чистых культур, готовили мазки, окрашивали по Граму и микроскопировали [10, 12]. Результаты исследований представлены на рисунках 1, 2 и в таблице 1.

Рисунок 1 – В пробе № 3 обнаружены грамотрицательные палочки

Рисунок 2 – Обнаружены грамположительные кокки, располагающиеся скоплениями в виде «виноградных гроздьев», выделенные из пробы № 2

Таблица 1 – Результаты изучения тинкториальных и культуральных свойств

№ пробы	Название сред							Окраска по Граму
№ пробы	Мясопептонный агар	Эндо	Плоскирева	Висмут-сульфит агар	Кровяной мясопептонный агар	Желточ-но-солевой агар
1	ползучий рост в виде нежной вуали голубовато-дымчатого цвета	бесцветные коло-нии с характерным для протея ползущим ростом	полупрозрачные колонии с пер-ламутровым от-тенком	темно-коричневые колонии	сероватые колонии с характерным для протея ползущим ростом	-	грамотрицательные палочки с закругленными концами
2	круглые, выпуклые, лимонно-желтые колонии с ровными краями	-	-	-	колонии бело-серого цвета с зонами полного просветления вокруг	непрозрачные кру-глые, слегка выпуклые колонии золотистого цвета	грамположительные кокки, располагающиеся скоплениями в виде «виноградных гроздьев»
3	колонии средней величины, выпуклые, круглы, блестящие	колонии средней величи-ны, выпук-лые, круглые, влажные, темно-красные	-	-	колонии средней величи-ны, вы-пуклые, круглые, влажные, серова-тые. Ге-молиз от-сутствует	-	палочки розово-красного цвета
4	колонии средней величины, выпуклые, круглые, влажные, блестящие	темно-красные колонии средней величи-ны, вы-пуклые, круглые	-	-	колонии средней величи-ны, вы-пуклые, круглые, влажные, бледноватые. Ге-молиз от-сутствует	-	палочки розово-красного цвета
5	ползучий рост в виде нежной вуали голубовато-дымчатого цвета	сероватые колонии с розовым оттенком, с харак-терным для про-тея пол-зущим ростом	полупрозрачные колонии с пер-ламутровым от-тенком	темно-коричневые колонии	сероватые колонии с характерным для протея ползущим ростом	-	грамотрицательные палочки с закругленными концами располагающиеся одиночно и попарно
6	плоские, с неровной поверхностью и фестончатыми краями	-	-	-	мелкие (точеч-ные) бле-стящие сероватые колонии, окруженные зоной гемолиза	-	грамположительные кокки, образующие короткие цепочки
7	круглые, выпуклые, белые колонии с ровными краями	-	-	-	колонии бело-серого цвета с зонами полного просветления вокруг	круглые, слегка выпуклые колонии желтого цвета	грамположительные кокки, располагающиеся скоплениями в виде «виноградных гроздьев»
8	круглые, выпуклые, пигментированные золотистые колонии с ровными краями	-	-	-	колонии бело-серого цвета с зонами полного просветления вокруг	слегка выпуклые колонии золотистого цвета	грамположительные кокки, располагающиеся скоплениями в виде «виноградных гроздьев»
9	плоские, с неровной поверхностью и фестончатыми краями	-	-	-	мелкие (точеч-ные) блестя-щие серо-ватые колонии, окруженные зоной гемолиза	-	грамположительные кокки, образующие короткие цепочки
10	колонии средней величины, круглы, блестящие, прозрачные в проходящем свете	колонии средней величи-ны, красные с металлическим блеском	-	-	колонии средней величи-ны, выпу-клые, круглые, серова-тые. Ге-молиз от-сутствует	-	палочки розово-красного цвета
11	ползучий рост в виде нежной вуали голубовато-дымчатого цвета	сероватые колонии с розовым оттенком, с характерным для протея ползущим ростом	полупрозрачные колонии с перламутровым оттенком	-	сероватые колонии с характерным для протея ползущим ростом	-	грамотрицательные палочки с закругленными концами
12	колонии средней величины, выпуклые, круглые, прозрачные в проходящем свете	колонии средней величи-ны, красные с металлическим блеском	-	-	колонии средней величин, круглые, влажные, бледноватые. Ге-молиз от-сутствует	-	палочки розово-красного цвета
13	ползучий рост в виде нежной вуали голубовато-дымчатого цвета	бесцветные колонии с розовым оттенком	полупрозрачные колонии с перламутровым оттенком	темно-коричневые колонии	сероватые колонии с характерным для протея ползущим ростом, небольшой гемолиз	-	грамотрицательные палочки с закругленными концами
14	круглые, выпуклые золотистые колонии	-	-	-	колонии бело-серого цвета с зонами просветления вокруг	непрозрачные круг-лые, колонии золотистого цвета	грамположительные кокки, располагающиеся скоплениями в виде «виноградных гроздьев»
15	плоские, с неровной поверхностью и фестончатыми краями	-	-	-	мелкие (точеч-ные) блестя-щие серо-ватые колонии, окруженные зоной гемолиза	-	грамположительные кокки, образующие короткие цепочки
16	круглые, белые колонии с ровными краями	-	-	-	колонии бело-серого цвета с зонами просветления вокруг	круглые, слегка выпуклые колонии желтого цвета. Ср-еда во-круг колоний мутнеет	грамположительные кокки, располагающиеся скоплениями в виде «виноградных гроздьев»

В ходе изучения тинкториальных и микробиологических исследований, мы предполагаем, что среди выделенных культур имеются бактерии рода Staphylococcus, Streptococcus, Proteus, Escherichia.

Далее родовую принадлежность выделенных микроорганизмов мы устанавливали на основе определения биохимических свойств [9, 17]. Анализ специальной литературы позволил нам составить алгоритм первичной дифференциации бактерий рода Staphylococcus, Streptococcus, Proteus, Escherichia [18, 21, 22].

Подвижность микроорганизмов изучали при посеве культуры в полужидкий агар (0,45-0,75% агара) уколом. Определяли способность разжижать 12%-ый желатин. Для изучения продукции каталазы чашечную культуру заливали 10% H₂O₂.

Отличительной особенностью протеев от других представителей семейства Enterobacteriaceae – способность к окислительному дезаминированию аминокислоты фенилаланина в кетокислоты. Поэтому дифференциальным признаком, позволившим отнести выделенные нами штаммы бактерий к роду Proteus, была способность культур дезаминировать фенилаланин на специализированной коммерческой среде (применяли Phenylalanine Agar) [16, 18, 21].

С помощью реакции Фогес-Проскауэра устанавливали в среде ацетон, промежуточный продукт, образующийся при распаде глюкозы. Образование сероводорода, аммиака и индола определяли с помощью индикаторных бумажек, помещенных под пробку пробирок с МПБ [9].

Дополнительными тестами для дифференциации выделенных бактерий были биохимические тесты [11]. Результаты изучения биохимических свойств представлены в таблице 2.

Таблица 2 – Биохимические свойства выделенных бактерий

Биохимический признак

Номер культур

Подвижность

Разжижение желатина

Продукция каталазы

Дезаминирование фенилаланина

Реакция Фогес-Проскауэра

Образование сероводорода

Образование аммиака

Образование индола

Ферментация

лактозы

глюкозы

сахарозы

маннита

мальтозы

арабинозы

Совокупность изученных тинкториальных, культурально-морфологических и биохимических позволила дифференцировать выделенные культуры, как бактерии рода Staphylococcus – 5 штаммов (пробы № 2, 7, 8, 14, 16), Streptococcus – 3 штамма (пробы № 6, 9, 15), Proteus– 4 штамма (пробы № 1, 5, 11, 13), Escherichia – 4 штамма (пробы № 3, 4, 10, 12).

Заключение. Микробиологическое исследование проб молока от коров, являющихся носителями мастита позволило выделить 16 изолятов, из которых 5 штаммов отнесли к бактериям рода Staphylococcus, 3 штамма –Streptococcus, 4 штамма – Proteus, 4 штамма – Escherichia. Исходя из полученных данных, можно сделать вывод, что среди возбудителей мастита чаще всего имеют значение стафилококки и протеи. Частота заболевания коров маститом связана как с состоянием общей резистентности животных, так и сопротивляемостью вымени и патогенностью возбудителя. Чаще мастит возникает при неудовлетворительных условиях гигиены содержания животных.

Список литературы:

Белова, К.В. Характеристика биологических свойств бактерий Bacillus coagulans / К.В. Белова, Н.А. Феоктистова // В сборнике: Материалы VIII-й Международной студенческой научной конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии». – Ульяновск: УГСХА, 2015. – Т.2.– С.197-202.

Васильев, Д.А. Выделение и изучение биологических свойств протейных бактериофагов, разработка метода фагоиндикации / Д.А. Васильев, Н.А. Феоктистова, С.Н. Золотухин // Проблемы профилактики и борьбы с особо опасными, экзотическими и малоизученными инфекционными болезнями животных: материалы международной научно-практической конференции. – Покров, 2008. - С. 253-256.

Васильев, Д.А. Биосенсорная детекция бактерий рода Вacillus в молоке и молочных продуктах для предупреждения их порчи / Д.А.Васильев, С.Н. Золотухин, Н.А. Феоктистова, А.В. Алешкин / Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - № 4 (24). - С. 36-43.

Васильев, Д.А. Экспресс-метод определения качества молока и молочных продуктов с помощью бактериофагов рода Вacillus / Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Феоктистова Н.А. / Зоотехния. - 2014. - № 10. - С. 20-21.

Васильев, Д.А. Выделение и изучение биологических свойств бактерий рода Рroteus / Д.А. Васильев, Н.А. Феоктистова, С.Н. Золотухин / Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2017. - № 2. - С. 70-75.

Золотухин, С.Н. Бактериофаги малоизученных энтеробактерий и перспективы их применения в ветеринарии / С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев, А.С. Мелехин, Е.А. Бульканова, Н.А. Феоктистова, Е.Н. Пожарникова / Ветеринарная патология. - 2006. - № 3. - С. 79-84.

Золотухин, С.Н. Новый метод определения качества молока и молочных продуктов, контаминированных бактериями рода Bacillus / С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев, Н.А. Феоктистова / В сборнике: Фундаментальные и прикладные проблемы повышения продуктивности животных и конкурентоспособности продукции животноводства в современных экономических условиях АПК РФ Материалы Международной научно-практической конференции. 2015. - С. 288-290.

Золотухин, С.Н. Бактериофаги рода Proteus и их практическое применение в лабораторной практике / С.Н. Золотухин, Н.А. Феоктистова, М.А. Лыдина, Д.А. Васильев, И.Г. Швиденко, А.В. Алешкин / В книге: Материалы VII Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням с международным участием 2015. - С. 132.

Калдыркаев, А.И. Биохимические свойства бактерий Вacillus cereus / А.И. Калдыркаев, А.В. Алешкин, Н.А. Феоктистова, Д.А. Васильев / В сборнике: Биотехнология: реальность и перспективы в сельском хозяйстве Материалы Международной научно-практической конференции. 2013. - С. 186-188.

Климушкин, Е.И. Биоиндикация содержания бактерий Вacillus coagulans в пищевых продуктах / Е.И. Климушкин, Н.А. Феоктистова, Д.А. Васильев / В сборнике: Экология родного края: проблемы и пути их решения Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. 2014. С. 377-379.

Лабинская, А.С. Общая и санитарная микробиология с техникой микробиологического исследования / А.С. Лабинская, Л.П. Ещина. - М.: Медицина, 2004. - с. 34-37.

Петрукова, Н.А. Биоиндикация содержания бактерий Вacilus megaterium в молоке и молочных продуктах / Петрукова Н.А., Феоктистова Н.А., Васильев Д.А., Лыдина М.А. / В сборнике: Экология родного края: проблемы и пути их решения Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. 2014. С. 375-377.

Феоктистова, Н.А. Биологические особенности бактерий рода Proteus и их роль в патологии животных // Региональные проблемы народного хозяйства: Матер. Всерос. науч.- практ. конф. молодых ученых, 8-9 апреля 2004 г. – Ульяновск, 2004. – Ч. 1 – С.329-336.

Феоктистова, Н.А. Методы лабораторной диагностики заболеваний, вызываемых бактериями рода Рroteus, или протекающих с их участием / Н.А. Феоктистова, Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин / Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2004. - № 12. - С. 46-50.

Феоктистова, Н.А. Выделение фагов бактерий рода Рroteus из объектов внешней среды / Н.А. Феоктистова, А.С. Мелехин, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев / В сборнике: Современное развитие АПК: региональный опыт, проблемы, перспективы Материалы Всероссийской научно-практической конференции. 2005. - С. 173-175.

Феоктистова, Н.А. Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов рода Рroteus, конструирование на их основе биопрепарата и разработка параметров практического применения / Н.А. Феоктистова / автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук / Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова. Саратов, 2006. – С.4-5.

Феоктистова, Н.А. Выявление бацилл, вызывающих порчу продуктов питания (БВППП) бактериологическими методами / Н.А. Феоктистова, Д.А. Васильев, Т.Г. Юдина, С.Н. Золотухин / В сборнике: Актуальные вопросы ветеринарной науки Материалы Международной научно-практической конференции. 2015. - С. 103-110.

Феоктистова, Н.А. Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов рода Рroteus, конструирование на их основе биопрепарата и разработка параметров практического применения / Н.А. Феоктистова / диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук / Ульяновск, 2006. – С. 24-25.

Феоктистова, Н.А. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов бактерии рода Proteus / Феоктистова Н.А. / В книге: Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека. - Ульяновск, 2013. - С. 171-185.

Феоктистова, Н.А. Выделение бактерий Вacillus cereus из молочных продуктов / Н.А. Феоктистова, К.Г. Трифонова, Э.Т. Гафурова, А.Н. Антонова, Д.А. Васильев / В сборнике: Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения: материалы VIII Международной научно-практической конференции. 2017. - С. 271-276.

Феоктистова, Н.А. Биологические особенности бактерий рода Рroteus и их роль в патологии животных / Н.А. Феоктистова / В сборнике: Региональные проблемы народного хозяйства Материалы Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых. 2004. - С. 329-336.

Феоктистова, Н.А. Изучение биологических свойств бактериофагов рода Proteus / Феоктистова Н.А., Васильев Д.А., Золотухин С.Н. / Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2017. - № 3 (39). - С. 99.

Ширманова, К.О. Схема детекции маститогенной микрофлоры / К.О. Ширманова, Е.Б. Мухин, Ю.Б. Васильева, Н.Г. Барт, Н.А. Феоктистова / В сборнике: Знания молодых для развития ветеринарной медицины и АПК страны Материалы международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых. 2016. - С. 234-235.

Ширманова, К.О. Bетеринарно-санитарная экспертиза молока некоторых ульяновских производителей / К.О. Ширманова, В.В. Иванова, Н.А. Феоктистова / В сборнике: СТУДЕНЧЕСКИЙ НАУЧНЫЙ ФОРУМ - 2017 IX Международная студенческая электронная научная конференция. 2017.

Ялалтдинова, А.В. Изучение некоторых биологических свойств бактерий рода Рroteus, выделенных из маститного молока КРС / А.В. Ялалтдинова, К.В. Мартынова, Н.А. Феоктистова / В сборнике: Фундаментальные научные исследования: теоретические и практические аспекты Сборник материалов V Международной научно-практической конференции. 2017. - С. 127-129.

Просмотров работы: 105

Код для цитирования:

X Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2018

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ МАСТИТНОГО МОЛОКА КРС

Студенческий научный форум - 2018
X Международная студенческая научная конференция