X Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2018

Введение

Флавоноиды – наиболее многочисленный класс природных фенольных соединений, для которых характерно структурное многообразие, высокая и разносторонняя активность и малая токсичность. Широта терапевтического действия, присущего флавоноидам, многообразие их физико-химических свойств обусловили создание большого числа препаратов на их основе, основным сырьём для производства которых служат растительные материалы. Среди высших растений выделяются наиболее богатые по содержанию флавоноидных соединений, к ним относятся растения семейства розоцветных [1], представители которого были выбраны для исследования, а именно - растения вида Sorbus aucuparia или Рябина обыкновенная.

По своим химическим свойствам флавоноиды представляют собой слабые органические кислоты, способные к реакциям комплексообразования с ионами металлов, что служит основой для их группового определения методом дифференциальной спектрофотометрии (СФ) [2,3]. Данный метод достаточно прост в исполнении, является высокочувствительным и относительно недорогим, что делает его предпочтительным для использования в контрольно-аналитических лабораториях [4].

Целью настоящей работы является определение флавоноидов в рябине обыкновенной методом СФ по реакции образования их комплексов с ионами алюминия.

Экспериментальная часть

Сбор растительного сырья и подготовка образцов для анализа

Плоды рябины обыкновенной были собраны с 15 деревьев, произрастающих на территории города Дубна среди различных условий, отличающихся наличием антропогенных факторов, после чего подлежали пробоподготовке. Сок ягод отбирали в виалку, центрифугировали для избавления от взвеси и экстрагировали гидрофобным растворителем - гексаном, для избавления от мешающего влияния каротиноидов и антоцианов. Жмых помещали в виалку для дальнейшей обработки в течение 50 минут в твердотельном термостате при 70 ºC, после остывания центрифугировали. Полученные экстракты из сока и жмыха были обозначены пробой 1 и пробой 2 соответственно.

Приготовление растворов

Раствор рутина готовили растворением его навески дистиллированной водой на водяной бане при 70 ºC в течении 30 минут. Раствор хлорида алюминия готовили растворением навески в 5 % растворе этилового спирта в воде. Все используемые реактивы имели квалификацию не ниже ч.д.а.

Количественное определения суммы флавоноидов в плодах рябины обыкновенной спектрофотометрическим методом

Для исследования плодов рябины на предмет содержания флавоноидов спектрофотометрическим методом была проработана методика, включающая следующие этапы:

Построение градуировочного графика

В колбу 25 мл поместили 1 мл раствора рутина и добавили 4 мл 5% раствора AlCl₃, дистиллированной водой довели до метки. Приготовили образец сравнения: в колбу 25 мл поместили 1 мл раствора рутина и дистиллированной водой довели до метки. Из полученных растворов разбавлением приготовили серию растворов с различными концентрациями рутина: 0,005; 0,01; 0,02; 0,03; 0,05; 0,07; 0,1 мг/л, и определили их оптические плотности в трёхкратной повторности. По полученным результатам построили градуировочную зависимость.

Все измерения проводились на однолучевом спектрофотометре "Unico" 2100. Оптическая плотность рутина измерялась при 550 нм, при которой интенсивность раствора сравнения крайне мала (рис.1). Толщина измеряемого слоя l см.

 

А

 

Рис. 1. Спектры поглощения: 1) синяя линия – проба 2 с добавлением AlCl₃; 2) зелёная линия – раствор сравнения

Рис. 2. Зависимость оптической плотности от концентрации рутина в растворе

Спектрофотометрический анализ

В мерную колбу вместимостью 25 мл с помощью пипет-дозатора с переменным объёмом поместили аликвоту анализируемого экстракта, равную 1 мл. Добавили 4 мл 5% водного раствора AlCl₃ и довели до метки дистиллированной водой. Для развития окраски раствор оставили на 30 минут.

Таблица 11. Содержание флавоноидов в образцах в пересчёте на рутин

№ образца	, мг/л			№ образца		, мг/л			№ образца		, мг/л
	В соке	В жмыхе	В соке			В жмыхе			В соке		В жмыхе
1	0	0,0075	6		0,0141		0,0426	11		0,0220		0,0220
2	0,0134	0,0293	7		0,0035		0,0048	12		0,0134		0,0419
3	0	0,0088	8		0,0015		0,0273	13		0,0136		0,0586
4	0,0062	0,0055	9		0		0,0293	14		0,0066		0,0426
5	0,0055	0,0439	10		0		0,0236	15		0,0096		0,0336

где – разность измеренных оптических плотностей раствора пробы с хлоридом алюминия и раствора сравнения относительно воды.

Содержание флавоноидов в исследуемых образцах различно, что обусловлено условиями произрастания плодовых деревьев, зависимость от которых предстоит выявить. Примечательно, что количество извлечённых из жмыха соединений, как правило, превышает их содержание в экстракте из сока, причиной чего, вероятно, служит недостаточная степень извлечения флавоноидов водным растворителем. В связи с чем, дальнейшие исследования планируется продолжать с использованием в качестве растворителей для экстракции мицеллярные среды, также позволяющие минимизировать кинетические ограничения при образовании аналитических форм [5].

Литература

1. Ладыгина Е.Я., Сафронич Н.И. и др. Химический анализ лекарственных растений: Учебное пособие для фармацевтических вузов / М.: Высшая Школа, 1983. - 176 с.

2. Тырков А.Г. Выделение и анализ биологически активных веществ: Учебное пособие / М.: КНОРУС, Астрахань, АГУ, ИД «Астраханский университет», 2016. – 69-83 с.

3. Тараховский Ю.С., Ким. Ю.А. и др. Флавоноиды: биохимия, биофизика, медицина / Пущино: Sуnchrobook, 2013 – 311 с.

4. Сорокина О.Н., Сумина Е.Г. и др. Спектрофотометрическое определение суммарного содержания флавоноидов в лекарственных препаратах растительного происхождения / Известия Саратовского университета. Серия Химия. Биология. Экология, том 13, вып. 3, 2013 – 9-11 с.

5. Штыков С.Н. Поверхностно-активные вещества в анализе. Основные достижения и тенденции развития / Ж. аналит. химии. 2000. Т. 55. N.7. 679-686 с.

Код для цитирования: Скопировать