X Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2018

Оспаптиц – контагиозная болезнь кур и голубей, проявляющаяся в двух формах – оспенной и дифтеритической. Возбудитель – ДНК-содержащий вирус из рода Poxviridae. Вирусы оспы кур и голубей хорошо размножаются на хорион-аллантоисной оболочке куриного эмбрионов при температуре 37 градусов. Они различаются между собой по характеру поражения оболочки и степени генерализации в теле зародыша.

Лабораторная диагностика включает в себя:

1. Обнаружение в патологическом материале вирусных оспенных частиц;

2. Выделение вируса на куриных эмбрионах;

3. Биопробу;

4. Микроскопическое выявление в патологическом материале элементарных телец;

5. Заражение куриных эмбрионов, а в сомнительных случаях — проведение биопробы на чувствительных животных;

6. Индикацию вирионов оспы методом световой микроскопии;

7. Выделение вируса на куриных эмбрионах или на цыплятах;

8. Идентификацию выделенного вируса методом световой микроскопии, вирусоскопии, РИФ и РДП [1].

В ветеринарную лабораторию направляют 5…6 клинически больных или павших птиц (куры, индейки, голуби, канарейки и др.)

Из свежих оспин или с мест поражений слизистых оболочек птиц готовят на предметных стеклах тонкие мазки – отпечатки для микроскопического исследования. Одновременно отбирают патологический материал (эпителиомы, дифтерические наложения) для выделения вируса.

Отобранный патологический материал тщательно растирают в ступке со стерильным битым стеклом и готовят 10% - ную суспензию на стерильном физиологическом растворе с рН 7,2…7,4, которую затем обрабатывают в течение 12 ч при 4 градусах смесью в составе 500 ЕД/мл пенициллина, 250 мкг/мл стрептомицина и 50 ЕД/мл нистатина. После указанной обработки суспензию центрифунгируют 10 мин при 1500 об/мин и делают высевы на МПБ, МПА с целью исключения бактериальной контаминации.

Для обнаружения вирусных оспенных частиц приготовленные мазки – отпечатки подсушивают на воздухе, перед окраской выдерживают 10…15 мин в дистиллированной воде и окрашивают методом серебрения по Морозову или по методу Пашена. При микроскопическом исследовании мазков (окраска по Морозову) на светло – коричневом фоне препарата обнаруживают вирусные оспенные частицы в виде мелких круглых образований темно – коричневого или черного цвета, расположенных поодиночке, парно, короткими цепочками или скоплениями; при окрашивании препаратов по Пашену при наличии вирусных оспенных частиц в поле зрения микроскопа видны мелкие округлые образования темно – красного цвета.

Также вирус оспы птиц выделяют на 10…12 – суточных КЭ, полученных из хозяйства, благополучного по инфекционным болезням птиц. Из полученной и обработанной 10% - ной суспензии, свободной от контаминации микрофлорой, дополнительно готовят суспензию на физиологическом растворе 10-2 и 10-3 и затем каждым разведением в объеме по 0,2 мл заражают на хорионаллантоисную оболочку (ХАО) по 4 эмбриона. После заражения КЭ инкубируют в течение 6 сут в термостате при 36,5…36,7^оС и относительной влажности 60…70%. Эмбрионы ежедневно овоскопируют. КЭ, погибшие в первые 48 ч после заражения, не учитывают (неспецифическая гибель). Эмбрионы, погибшие на 3 – и сутки и позже и все оставшиеся живыми на 6 – е сутки после заражения, охлаждают в холодильнике при 4оС в течение 4…5ч, затем их вскрывают и просматривают состояние ХАО. В положительных случаях на ХАО обнаруживают отдельно расположенные или слившиеся оспины. При обнаружении на ХАО оспин надо учитывать, что вирус оспы кур вызывает образование на ХАО мелких плоских поражений, иногда обширных, беловатого цвета. Из оспенных поражений ХАО делают тонкие мазки или мазки – отпечатки на предметных стеклах и окрашивают методом серебрения по Морозову или по методу Пашена для выявления в них вирусных (оспенных) частиц.

В случае неясности результатов, полученных при выделении вируса в первом пассаже, проводят второй последовательный пассаж испытуемого вируса.

Биологическую пробу ставят в случаях получения сомнительных результатов исследований мазков – отпечатков и при выделении вируса на КЭ.

Биопробу проводят на неиммунных к вирусу оспы цыплятах 3…4 – месячного возраста, полученных из хозяйств, благополучных по инфекционным болезням птиц. Суспензию исследуемого материала, приготовленную, как указано в п. 2.3, втирают в слегка скарифицированную поверхность гребня и в фолликулы голени сразу после выщипывания перьев. При наличии в исследуемом материале вируса оспы птиц на 5…6 – й день после заражения на гребне появляются характерные эпителиомы, а на голени – типичный для оспы фолликулит. При микроскопическом исследовании мазков – отпечатков, приготовленных из эпителиом гребня или из пораженных фолликулов голени и окрашенных методом серебрения по Морозову или по методу Пашена, обнаруживают вирусные оспенные частицы.

Лабораторный диагноз на оспу считают установленным в случаях: обнаружения в мазках – отпечатках из патологического материала вирусных оспенных частиц; выделения возбудителя оспы на КЭ; получения положительных результатов биологической пробы.

Сроки исследований: микроскопических – 1 день; выделение вируса на КЭ – 6 сут; при проведении второго пассажа – 12 сут; биологичкой пробы – 8 сут. [2].

Библиографический список

Барышников, П. И. Ветеринарная вирусология [Текст] : учебное пособие для студ. вузов, обучающихся по спец. 111201 - "Ветеринария" : рек. УМО по образованию / П. И. Барышников. - М. : ФОРУМ, 2009. – С. 14 – 16.

Барышников, П.И. Лабораторная диагностика вирусных болезней животных [Электронный ресурс] : учеб. пособие / П.И. Барышников, В.В. Разумовская. — Санкт-Петербург : Лань, 2015. — С. 443 – 446.

Код для цитирования: Скопировать