X Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2018

Эталонный тест-штамм– это чистая культура микроорганизма, данного вида, которая имеет характерные физиологические, морфологические и биохимические свойства.

Направления использования эталонных тест-культур микроорганизмов:

• для проверки ростовых свойств питательных сред;

• для валидации методов контроля качества;

• для проверки пригодности методов испытания [1].

Перечень определений, связанных с эталонным штаммом:

• Референтный штамм (референс-штамм, эталонный штамм) - микроорганизм, определенный, по меньшей мере, до рода и вида, включенный в государственный каталог и описанный в соответствии с его характеристиками.

• Референтный образец - партия емкостей, содержащих культуры, полученные путем одного посева из референтного штамма или множество емкостей из одной и той же партии референтного штамма от поставщика.

• Субкультуры референтного образца - субкультуры референтного образца, хранящиеся в коллекции лаборатории в лиофилизированном состоянии или в условиях глубокой заморозки (в жидком азоте или при температуре -700С) или на среде хранения.

• Контрольный штамм - микроорганизм, применяемый для оценки микробиологических исследований, микробиологических характеристик питательных сред и других видов работ, требующих стандартизации исследования. Контрольный штамм из референтного образца, полученного из национальной коллекции, либо из субкультуры референтного образца, хранящейся в рабочей коллекции с обязательным одним пассажем для восстановления типичных признаков [3].

Источники контрольных штаммов микроорганизмов.

Эталонные (референтные) штаммы можно получить из следующих международных коллекций:

• Национальный центр государственной коллекции возбудителей бактериальной инфекции III – IV групп патогенности (Государственный НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича);

• Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов ВКПМ;

• Всероссийская коллекция непатогенных микроорганизмов ИБФМБ;

• Американская коллекция типовых культур (АТСС), а также штаммы других национальных и международных коллекций [2].

Хранение контрольных штаммов микроорганизмов

Контрольные штаммы хранят в лиофилизированном состоянии, в замороженном виде, в среде с криопротектором или на среде хранения в условиях и на протяжении сроков, приведенных ниже.

Таблица 1. Хранение контрольных штаммов микроорганизмов

Восстановление контрольных штаммов микроорганизмов

Для получения рабочих культур делают высев из субкультуры референтного образца. Со среды хранения штамм рассевают на плотные неселективные питательные питательные потребности соответствующих микроорганизмов (1 пассаж). Посевы инкубируют в подходящих для роста условиях. При отсутствии роста на плотной среде культуру засевают на соответствующую жидкую питательную среду. После инкубирования делают высев на плотную питательную среду (1 пассаж). Так как микроорганизмы после 1 пассажа обладают пониженной жизнеспособностью, рекомендуется в качестве рабочих культур использовать культуры 2 или 3 пассажа [3].

Проверка культур контрольных штаммов

Выросшую на питательномагаре культуру контрольного штамма визуально проверяют на чистоту роста и отсутствие диссоциации или просматривая под стереоскопическим микроскопом (лупой) в «проходящем свете». При выявлении контаминации или диссоциации следует уничтожить использованную пробирку с субкультурой референтного образца [3].

Методы оценки качества питательных сред

Оценку качества испытуемой среды по микробиологическим критериям проводят с помощью одного из методов:

• качественного

• полуколичественного

• количественного

Выбор метода контроля определяется видами питательных сред и целямиконтроля (чувствительность, специфичность, селективность и т.д.).

Перечень необходимых контрольных штаммов указывается в сертификате на данную коммерческую среду либо указан в приложении к настоящей стандартизованной технологии на основные питательные среды.

• Качественный метод (посев морфологических характеристик роста микроорганизма на исследуемой питательной среде или дифференцирующих свойств питательной среды (для дифференциально-диагностических сред). Для контроля качества дифференциально-диагностических сред необходимо использовать как контрольные штаммы микроорганизмов, дающие положительный результат, так и штаммы, дающие отрицательный результат теста на данной среде.

• Полуколичественный или количественный метод - используют для оценки чувствительности или селективности питательных сред. На испытуемую среду наносят инокулят контрольного штамма (или нескольких контрольных штаммов) в определенном количестве [3]

Микробиологические критерии качества питательной среды

При использовании контрольных штаммов по их росту на испытуемой питательной среде можнотоценить следующие микробиологические критерии качества питательной среды:

• типичность морфологических, культуральных характеристик микроорганизма;

• скорость роста;

• чувствительность (продуктивность) среды;

• селективность (для селективных сред);

• специфичность, выраженность отличительных признаков различных микроорганизмов для дифференциально-диагностических сред;

• величина зон задержки роста вокруг дисков с антибиотиками для контроля сред и качества дисков с антибиотиками для диско-диффузионного метода определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Интерпретация результатов оценки качества питательной среды

При использовании качественного метода контроля питательных сред оценивается скорость роста, величина колоний, морфология колоний и наличие других признаков, свойственных для контрольного штамма, например, гемолиз, пигмент и т.д.

При оценке качества неселективных количественным методом чувствительность (продуктивность) питательной среды должна составлять не менее 70%. На селективных средах чувствительность среды для целевого микроорганизма должна быть не менее 50-70% (в зависимости от вида среды), а рост нецелевых микроорганизмов должен частично или полностью подавляться.

Поддержание культур контрольных штаммов микроорганизмов

Для контрольных штаммов микроорганизмов, регулярно используемых для контроля качества, при наличии низкотемпературной морозильной камеры (до -70C) из референтного образца готовят субкультуры референтного образца в необходимом для работы количестве (50-100 и более пробирок), которые затем хранят в коллекции лаборатории в условиях глубокой заморозки (при температуре -700С) и используют для приготовления рабочих культур контрольных штаммов. При отсутствии низкотемпературной морозильной камеры получаемого из государственных или национальных коллекций, готовят субкультуры референтного образца в необходимом для работы количестве. Приготовленные субкультуры хранят при температуре -20 C не более 12 месяцев в бульоне с криопротектором или при температуре 2 месяцев в полужидком агаре. Субкультуры референтного образца допустимо использовать многократно при отсутствии контаминации [3].

Библиографический список

Бакулов, И.А. Эпизоотология с микробиологией [Текст] / Бакулов И.А. – Москва: Агропромиздат, 1987. – 415 с.

Гулий, О.И Методы получения промышленных штаммов [Текст] /Гулий О.И. - Саратов: Саратовский ГАУ, 2016. – 70 с.

Меньшиков, В.В Стандартизированная технология. Внутрилабораторный контроль качества питательных сред для клинических микробиологических исследований [Текст] / Меньшиков В.В. – Москва: Федерация лабораторной медицины, 2014. – 80 с.

Код для цитирования: Скопировать