X Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2018

Исследования эмбриотоксичности представляют собой практический и теоретический интересы, потому что на сегодняшний день очень сложно обойтись без приема лекарственных средств во время беременности. Эмбриотоксичность это свойство какого-либо вещества оказывать влияние на развитие плода в эмбриогенезе [1].

В настоящее время существует огромный ассортимент лекарственных препаратов. Некоторые из них не являются токсичными для развивающегося плода, но существует огромное количество лекарственных средств, приводящих к всевозможным нарушениям эмбриогенеза или, даже к гибели плода [2].

Есть лекарственные средства, которые считаются относительно безопасными для развития плода. К ним относятся соединения железа, витамины, гормоны, некоторые антибиотики, антигистаминные препараты, успокоительные и обезболивающие, а также препараты нормофлоры. Но даже относительно безопасные лекарственные препараты при повышенных концентрациях или длительном времени приема, способны негативно воздействовать на эмбрион.

По данным международной комиссии ВОЗ контролирующей применение лекарственных средств во время беременности, около 90% беременных женщин принимают лекарственные препараты.

Некоторые лекарственные средства способны влиять на гормональный фон женщины и на свойства слизистой оболочки матки что может привести к затруднениям имплантации оплодотворенной яйцеклетки [ 3].

В первые 9-12 недель беременности воздействие лекарственных средств на эмбрион считается наиболее опасным. Именно в этот период происходят процессы имплантации и плацентации, и в случае их нарушения беременность может самопроизвольно прерваться. К концу 3-го месяца беременности заканчивает формироваться плацента, и, хотя она и формирует своеобразный защитный барьер между кровообращениями матери и ребенка, через нее способны проникать все га­зообразные анестетики, снотворные, наркотики, транквилизаторы, миорелаксанты, противоопухолевые препа­раты, антибиотики, сульфаниламиды. Проникающие таким образом вещества, попадают в клетки плода и приводят к нарушениям био­химических, физиологических и мор­фологических процессов, влияют на активность ферментов,ДНК, РНК, рибосомы. Также они могут привести к аномалиям анатомического развития и к нарушению функций органов. В качестве примера негативного действия на плод вследствие проникновения препарата через плаценту, можно привести некоторые антибиотики:

Тетрациклин – способен вызывать у плода задержку роста. Также может приводить к развитию различных аномалий, таких как сращение пальцев ног и рук, расщепление верхнего неба, разрушение зачатков молочных зубов.

Стрептоцид – может вызывать необратимую дистрофию слухового нерва плода что приводит к возникновению глухоты.

Левомицитин – способен привести к изменениям в печени плода и вызвать гипопластическую анемию.

Негативные влияния лекарственных вещества зависят от дозы, продолжительности приема и срока беременности. В связи с этими факторами у плода может произойти ускорение, замедление, полная остановка развития плода или формирование у плода врожденных уродств или пороков развития [4,7].

После так называемой талидомидной трагедии, проблемы, связанные с токсическим действием лекарственных препаратов на развитие эмбриона, оказались в центре внимания исследователей во всем мире. Это привело к развитию тератологии – науки изучающей причины и механизмы проявления врожденных пороков развития.

Талидомид – седативное успокоительное средство, выпущенное в массовое пользование в ФРГ в 1957 году. Было заявлено что препарат обладает низкой токсичностью и оказывает успокаивающее действие при некоторых формах расстройства нервной системы. Через некоторое время были выявлены тревожные симптомы у людей, принимавших данное лекарство в течении приблизительно трех месяцев. В качестве симптомов отличались изменения чувствительности в руках и ногах.

Опубликованные в 1961 году результаты исследований, выявивших причастие применения талидомида женщинами на ранних сроках беременности к увеличению числа детей, рождающихся с пороками развития, породили волну беспокойства во всем мире. Поступали сведения о детях, рождающихся с уродствами, в странах где талидомид применялся в медицинской практике.

Пороки развития таких детей проявлялись чаще всего в виде различных аномалий конечностей. Выраженность дефектов этих аномалий проявлялась в различной — от небольших анатомических нарушений рук и (или) ног до тяжелых форм, например, фокомелии, заболевания, при котором отмечается недоразвитие проксимальных отделов конечностей, кисти и стопы при этом могут прикрепляться непосредственно к туловищу напоминая ласты тюленя, и амелии, заболевания при котором конечности отсутствуют полностью.

Очень часто вместе с аномалиями конечностей встречались и различные поражения внутренних органов такие как недоразвитый желчный пузырь, отсутствие просвета в пищеводе или двенадцатиперстной кишке, аномалии развития сердца, легких, почек [5].

Несмотря на то что удалось довольно быстро выявить причину данных аномалий, последствия талидомидной трагедии были катастрофическими. Только лишь в Западной Германии родилось около шести тысяч "талидомидных" детей.

Спустя примерно десять лет МакБрайд и МакКреди выдвинули невропатологическую теорию, суть которой заключается в том, что возможно тератогенное действие талидомида заключается в нарушении иннервации конечностей что и является главной причиной возникновения аномалий.

Среди возможных механизмов действия талидомида также рассматриваются ингибирование синтеза специфических белков, конкуренция с какими-либо витаминами или аминокислотами, иммунодепрессирующее действие [6].

Важной задачей при исследовании лекарственного вещества является определение границ его токсичности, с определением дозы ЛД₅₀, и максимально переносимых токсических доз.ЛД50 – это доза, при применении которой в эксперименте происходит смерть 50% подопытных животных.

Наиболее часто используемая классификация лекарственных вещевств по их влиянию на плод и репродуктивное здоровье, была разработана Американской администрацией по контролю за лекарствами и пищевыми продуктами – FDA (Food and Drug Administration). Согласно этой классификации препараты делятся на 5 основных групп:

А – препараты, прошедшие серию строго контролируемых, адекватных исследований в результате которых не было выявлено риска неблагоприятного воздействия на плод в первом триместре беременности, однако данные о подобном риске в последующих триместрах отсутствуют.

В – препараты, прошедшие изучение репродукции на животных, в результате чего неблагоприятного действия на плод выявлено не было, а строго контролируемых исследований среди беременных женщин не было проведено.

С – Препараты которые при исследовании на животных проявили отрицательное действие на плод, но контролируемые исследования на людях проведены не были.

D – Препараты которые при проведении исследований доказали что имеется риск неблагоприятного действия на плод человека

Х – препараты которые в результате проведения испытаний на животных или клиническхе испытаний были отнесены к вызывающим нарушения развития плода.

Для того чтобы оценить риски и минимизировать последствия приема лекарственных средств во время беременности, необходимо проводить доклинические исследования препарата.

Доклинические исследования – это основной этап разработки и внедрения лекарственного вещества в клиническую практику, который позволяет актуально исследовать фармакологические, токсические и фармацевтические свойства препарата и оценить его эффективность и безопасность. Таким образом результаты доклинического исследования играют важную роль в решении вопроса о возможности проведения клинических исследований препарата и его дальнейшего применения в медицине.

Целью нашего исследования явилось: Выявление токсичности фармакологических веществ в антенатальном и постнатальном периоде развития.

Задачи исследования:

Сформировать группы контрольных и опытных животных обоего пола;

Провести интрагастральное введение тестируемого препарата.

Определить границы токсичности (ЛД₅₀) и максимально переносимые токсические дозы «Магне В6» при интрагастральном введении крысам;

По результатам некропсии погибших и выживших животных, которым вводили препарат в максимально переносимой дозе, определить характер и степень патологических изменений в паренхиматозных органах.

Изучить влияние препарата «Магне В6», применяемого в периоды органогезеза, имплантации и планцентации, и фетогенеза на развитие плодов крыс.

Изучить влияние препарата «Магне В6» на развитие потомства крыс в период постнатального развития.

Дизайн исследования:

Эксперименты будут проводиться в соответствии со стандартным протоколом методических рекомендаций по оценке острой токсичности и эмбриотоксичности Минздрава РФ «Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств» под общ. ред А.Н. Миронова.

Эксперименты будут проведены в два этапа:

На первом будет изучена острая токсичность препарата «Магне В6», определены ЛД50, широта терапевтического индекса и картина отравления.

На второмэтапе исследований будет изучено эмбриотоксическое действие препарата «Магне В6» вводимого крысам самкам в период имплантации и планцентации (1-6 день беременности), органогенеза (6-16 день беременности) и фетогенеза (с 16-19 день беременности).

Предполагаемые пути решения задач:

При проведении острой токсичности из животных будет сформировано 6 групп самок и самцов (1 контрольная группа и 5 опытных групп). Животным будут вводить однократно препарат Магне В6 (интрагастрально). За животными будет проведено непрерывное наблюдение в течение 8 часов (затем периодически в течение 14 дней). В период наблюдений будет произведена регистрация гибели животных и картина отравления. По результатам гибели будет рассчитана ЛД50, широта терапевтического индекса

Расчет величины ЛД₅₀ исследуемого тестируемого образца для каждого пола и каждой группы отдельно (с указанием доверительных интервалов) будет выполнен с использованием метода Литчфилда и Уилкоксона.

При изучении эмбриотоксического действия из крыс самок будет сформировано 3 опытных и 6 контрольных групп крыс самок. Самок крыс будут спаривать с интактными самцами в соотношении 2:1. Для определения первого дня беременности будет применяться метод одного часа и метод вагинального мазка. Беременным самкам с 1 по 3 группы «Магне В6» будут вводить с 1 по 6, с 6 по 16 и 16 по 19 дни в дозе 740 мг/кг (токсическая доза). Контрольным группам в эквивалентных дозах будет вводиться растворитель (дистиллированная вода).

Экспериментальным животным будут вводиться исследуемое вещество (внутрижелудочно, через металлический зонд). Моделирование интоксикаций будет проводиться согласно методическим рекомендациям по изучению репродуктивной токсичности лекарственных средств (Москва,2012). На 20 день беременности самки после эвтаназии будут подвергаться некропсии. По данным вскрытия будет рассчитан индекс беременности, определена до - и постимплантационная гибель, выявлено влияние на закладку внутренних органов и развитие костной системы плодов. В период постнатального развития у потомства крыс будет изучено влияние препарата «Магне В6» на физическое развитие и скорость созревания сенсорно-двигательных рефлексов.

Для всех данных будет применена описательная статистика с использованием подходящих критериев, которые будут представлены в итоговых таблицах. Статистический анализ будет проводиться с использованием программам Microsoft Excel и Statistica 6.0. Результаты будут представлены в виде среднего и ошибки среднего с указанием достоверности попарных различий между сравниваемыми группами.

Список использованной литературы:

1. Гуськова Т.А. Токсикология лекарственных средств. 2-е изд., доп. – М.: МДВ, 2008.

2. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. -2 изд., М. 2005

3. Э.И. Валькович, Е.А. Олейник Беременность и тератогенное действие лекарственных препаратов и ряда химических соединений / Спб.: 2012.

4. Отрицательное действие лекарственных средств. Комбинированное применение лекарственных средств. Взаимодействие лекарственных средств и пищи: учебно-методическое пособие / Сост.: В.А. Николаевский, А.В. Бузлама.- Воронеж: ЛОП ВГУ, 2006.- 99 с.

5. Greek R., Shanks N., Rice M. J. The history and implications of testing thalidomide on animals. The Journal of Philosophy, Scince & Law. 2011; 11. URL: http://www.miami.edu/ethics/jpsl

6. Загородникова К. А., Бурбелло А. Т., Покладова М. В. Безопасность лекарств и фармаконадзор у беременных — от «талидоми-довой трагедии» до наших дней. Ремедиум. 2012; 8 (186): 15-22.

7. Валькович Э. И. Тератогенез и тератогенность. Педиатр. 2010; 1: 13-15.

Код для цитирования: Скопировать