МЕТОД СОЗДАНИЯ ДЕНДРИТНО-КЛЕТОЧНЫХ ВАКЦИН - Студенческий научный форум

IX Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2017

МЕТОД СОЗДАНИЯ ДЕНДРИТНО-КЛЕТОЧНЫХ ВАКЦИН

Пигасова А.А. 1
1Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера
 Комментарии
Текст работы размещён без изображений и формул.
Полная версия работы доступна во вкладке "Файлы работы" в формате PDF
Создание терапевтических вакцин на основе дендритных клеток (ДК) рассматривается как один из подходов в комплексной терапии злокачественных новообразований [2, 3, 4]. Приготовление вакцины на основе дендритных клеток проводится индивидуально для каждого пациента. Технология получения ДК-вакцин состоит из 5 этапов [5, 6].

Первый этап – получение предшественников ДК [1]. Миелоидные предшественники получают из лейкофорезного материала (при использовании, например, аппарата Cobe Spectra) и периферической крови. Принцип разделения периферической крови основан на различной плотности клеток и скорости их осаждения за счет различного размера. Разделение происходит при непрерывном центрифугировании.

Второй этап – дифференцировка ДК из миелоидных предшественников in vitro. Выделенные мононуклеарные клетки (МНК) инкубируют в среде в течение 1 часа, после чего их разделяют на 2 фракции: прикрепляющиеся моноциты и не прикрепляющиеся к подложке лимфоциты. Первые помещают в специальные питательные среды с добавлением ростовых факторов и факторов дифференцировки (например, GM-колониестимулирующий фактор), при определенной концентрации IL-4.Таким образом, получают незрелые ДК.

Третий этап – приготовление антигенсодержащего опухолевого лизата. Клеточные линии, экспресирующие раковые антигены, подвергают последовательным циклам моментального замораживания/оттаивания в фосфатно-солевом буфере, их центрифугируют и фильтруют надосадочную фракцию через фильтр 0,2 мкм. Полученный лизат помещают в криопробирки и хранят при –20оС до использования. Кроме этого, непосредственно РНК и ДНК опухолевой клетки также могут быть трансфицированы в ДК с целью синтеза антигенного опухолевого белка и/или представления на своей поверхности иммуногенных пептидов

Четвертый этап – нагрузка и активация незрелых ДК лизатом. Во время фазы созревания в культуру клеток добавляют опухолевый лизат. Незрелая ДК захватывает эти структуры, затем превращается взрелуюДК, которая на своей поверхности несет признак опухоли с особой сигнальной последовательностью. Именно эту последовательность и распознает иммунная клетка как чужеродную. Следует отметить, что от момента забора крови до окончательного изготовления вакцины должно пройти не более 7 дней.

Пятый этап – криоконсервация и хранение вакцинных ДК. Полученную вакцину разделяют на дозы и хранят в жидком азоте. Непосредственно перед введением замерзшую вакцину размораживают, разводят физиологическим раствором (дендритные клетки остаются живыми). Немаловажен также способ введения ДК. Было показано, что подкожно введенные ДК обладают большей иммуногенностью и способностью к миграции в отличие от ДК, введенных внутривенно.

Приготовленная таким образом вакцина переносится большинством пациентов хорошо. Методы вакцинотерапии на основе ДК при лечении онкологических больных могут быть самыми разнообразными. Разработке перспективных методов ДК-вакцинотерапии способствуют успехи, достигнутые в области молекулярной биологии, гибридомной технологии, наличие рекомбинантных форм различных биологически активных веществ и многие другие достижения.

Список литературы:

  1. Возможные источники получения дендритных клеток для создания противоопухолевых вакцин / Шубина И.Ж., Лебединская О.В., Ахматова Н.К., Киселевский М.В. // Медицинская иммунология. – 2005. – Т. 7. – № 2-3. – С. 15.

  1. Инновационная противоопухолевая терапия. URL: http://www.onkodoktor.ru/dendritnaya-vaktsina (дата обращения: 10.02.2017).

  1. Киселевский М.В. Адоптивная иммунотерапия злокачественных новообразований с использованием лимфокин-активированных киллеров и дендритных клеток / Киселевский М.В., Лебединская О.В. // Пермский медицинский журнал. 2004. — № 3. —С. 116–127.

  1. Опыт и перспективы вакцинотерапии злокачественных опухолей / Моисеенко В.М., Балдуева И.А., Данилова А.Б. и др. // Российский иммунологический журнал. — 2008. — Т.2 (11). — № 2—3. — С. 311.

  1. Нехаева Т. Л. Оптимизация аутологичныхдендритно-клеточных вакцин для лечения больных злокачественными новообразованиями// Сибирский онкологический журнал. – 2013. - №3(57). – С. 52 – 56.

  1. Нехаева Т. Л. Оптимизация технологий и стандартизация получения противоопухолевых вакцин на основе аутологичных дендритных клеток: автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук.Научно-исследовательский институт онкологии им. Н.Н. Петрова, Санкт-Петербург, 2014.

Просмотров работы: 475