IX Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2017

Актуальность. Одним из самых распространенных исследований вещественных доказательств биологического происхождения является экспертиза крови. Исследование крови производится в случаях установления личности, половых преступлений. Замены детей и так далее. Во всех этих случаях установление фенотипов гаптоглобина сыворотки крови имеет весьма важное значение. Количество гаптоглобина в крови значительно увеличивается или понижается при многих патологических состояниях, травмах, а определение его количества широко применяется в практике медицинской диагностики. Поэтому обнаружение фенотипов гаптоглобина в следах крови повысит возможность индивидуализации, то есть установление принадлежености крови тому или другому лицу. Однако, часто, из-за гемолиза, гниения, трудности отцентрифугировать сыворотку и в силу других причин определение фенотипов гаптоглобина трупа становится либо затруднительным.

Исходя из вышеизложенного перед нами была поставлена цель:определить возможность использования костномозгового содержимого для установления половой принадлежности по наличию Y-хроматина, определения фенотипов гаптоглобина и выделения ДНК;

Материалы и методы. Материалом исследования послужило содержимое костномозгового канала проксимальной и/или средней трети диафиза бедренных костей биоманекенов лиц обоего пола в возрасте от 23–82 лет для установления фенотипов гаптоглобина и определения половой принадлежности по определению Y-хроматина цитологическим методом. А также выборочное применение молекулярное генетического метода исследования в образцах костномозгового содержимого бедренных костей.

Для получения материала нами разработана методика изъятия: с внутренней поверхности фрагментов бедренных костей скальпелем получали соскобы эндоста, а также изымали часть собственно костного мозга.

Объекты помещали в центрифужные пробирки для последующего исследования по системе гаптоглобина и приготовления цитологических мазков. Оставшуюся часть материала высушивали на отрезке марлевого бинта для повторных исследований. Следует отметить, что при изучении содержимого костномозгового канала средней трети диафиза цитологическим методом с окрашиванием мазков акрихином только в 21% случаев удавалось выявить пригодные для исследования Y-хроматина клетки. В связи с этим, исследовали проксимальную треть костномозгового канала бедренных костей. В работе Н.В. Одинцова (1979) исследования костного мозга тела грудины показали наличие Y-хроматина в 80,1% ядрах клеток. Поэтому, в качестве контроля наличия Y-содержащих клеток использовали среднюю треть тела грудины. Под действием высокой температуры мягкие ткани коагулируются и становятся малопригодными в биологическом исследовании, для сравнительного анализа с костномозговым содержимым обугленных трупов выявляли фенотипы гаптоглобина в мышечной ткани. Мышечную ткань отделяли из глубоких слоев, прилегающих к бедренной кости передней поверхности бедра.

Результаты и обсуждения. Результаты исследования практически не отличалась от данных, полученных в биоматериале без признаков гниения. На 14 и 21-е сутки обнаруженная в ядрах клеток хроматиновая субстанция не удовлетворяла критериям пригодности для их исследования. Сеть нуклеоплазмы становилась нечеткой, гомогенной, происходило ослабление окраски ядер. Свечение Y-хроматина не визуализировалось. При исследовании фрагментов бедренных костей трупов мужского пола в стадии обугливания в 46% случаев удалось установить мужской генетический пол по наличию Y-хроматина. В объектах женской группы Y-хроматиноподобные образования отсутствовали

Дифференцирование фенотипов гаптоглобина в нативных препаратах не вызывало затруднений в 93% случаев. В процессе исследования экспериментального материала при гниении были получены положительные

результаты выделения фракций гаптоглобина в сроки до 1,5 мес. Свыше двух месяцев в условиях воздействия факторов внешней среды, в частично скелетированных трупах, фракции гаптоглобина не определялись. При исследовании фрагментов бедренных костей трупов, подвергшихся воздействию высоких температур, в 78% случаев отмечалось четкое разделение фракций.

Выводы: В ходе проведенных исследований было установлено, что в костномозговом канале верхней и средней третей бедренной кости имеется достаточное количество сосудистых сетей, содержащих кровь, для дифференцирования фенотипов по системе гаптоглобина. Также наиболее часто ядросодержащие клетки, пригодные для выявления Y-хроматина, выявлялись в проксимальной части костномозгового канала бедренных костей, это привело к тому, что в гнилостно измененном содержимом бедренных костей при наличии ядросодержащих клеток удается выявить Y-хроматин на 7-е сутки при хранении биоматериала при температуре +15 °С. Дифференцирование фенотипов гаптоглобина в объектах подвергшихся воздействию высоких температур, в 78% не вызывает затруднений, которые могут возникнуть при исследовании мышечной ткани, и выделение ДНК-содержимого костномозгового канала является достаточно эффективным при отрицательных результатах установления половой принадлежности цитологическим методом и определения фенотипов гаптоглобина.

Литература

1. Барсегянц, Л.О. Судебно-медицинское исследование вещественных доказательств / Л.О. Барсегянц. – М.: Медицина, 2005. – 448 с.

2. Волков, В.Н. Судебная медицина : учеб.пособие для вузов / В.Н. Волков. – М.: Юнити-Дана, 2000. – 639 с.

3. Воробьев, А.И. Руководство по гематологии / А.И. Воробьев. – М.: Ньюдиа-мед, 2002. – 281 с.

4. Болдырев, Л.А. Выявление антигенов системы АВО в фрагментах костей, ногтей и зубов / Л.А. Болдырев. – М.: Суд.мед. экспертиза. – 1996. – 23-24 с.

5. Капустин, А.В. Судебно-медицинская диагностика пола по половым различиям в клетках / А.В. Капустин. – М.: Медицина, 1969. –160 с.

6. Кованов, В.В. Оперативная хирургия и топографическая анатомия / В.В Кованов. – М.: Медицина, 2003. – 408 с.

7. Одинцов, Н.В. Материалы к определению половой принадлежности некоторых объектов судебно-медицинской экспертизы по Y-хроматину / Н.В. Одинцов. - Барнаул, 1979. – 20 с.

Код для цитирования: Скопировать