IX Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2017

Вопросы кислородного метаболизма в организме человека являются объектами постоянного внимания медиков, химиков и биохимиков. При нарушении баланса между биохимическими механизмами оксигеназной утилизации кислорода, механизмами защиты от вредных воздействий его высокореакционных метаболитов возникает окислительный стресс. Фармакологическая коррекция окислительного стресса осуществляется с помощью биологически активных веществ (БАВ), в частности антиоксидантов. Они прерывают быстрорастущие процессы окисления, образуя малоактивные радикалы, легко выводящиеся из организма. Поэтому одним из важных показателей качества растительного сырья является их антиоксидантная активность.

В качестве объекта исследования использовали собранные в период полного созревания и высушенные плоды черёмухи обыкновенной – Padusavium Mill. семейства розоцветных – Rosaceae, собранные в лесной зоне на территории города Ташла.

В данном сырье определяли количественное содержание флавоноидов, антоцианов, а также общую антиоксидантную активность. Для сравнения также определяли содержание флавоноидов, антоцианов и общую антиоксидантную активность в официнальном лекарственном сырье, приобретенном в аптечной сети (производитель ООО «Азбука трав» г.Барнаул)

Материалы и методы

Определение флавоноидов проводили по методике Бекетова Е.В. В круглодонную колбу с притертой пробкой вместимостью 50 мл помещали 5 г измельченных плодов черемухи обыкновенной (частицы, проходящие сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм), прибавляли 30 мл 50%-го этилового спирта, присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 45 мин. Затем экстракт фильтровали через бумажный фильтр с красной полосой в мерную колбу вместимостью 50 мл. Операцию выделения флавоноидов повторяли с 20 мл 50%-го этилового спирта в течение 45 мин. Полученную выжимку фильтровали в ту же колбу и доводят ее объем до метки 50%-м этанолом. В мерную колбу (25 мл) помещали 5 мл профильтрованного водно-спиртового экстракта из плодов черемухи, добавляли 5 мл 2%-го раствора алюминия хлорида, 0,5 мл 33%-го раствора уксусной кислоты и доводили объем колбы 90%-м этанолом до метки. Через 30 мин измеряли оптическую плотность испытуемого раствора и раствора стандартного образца (РСО) рутина при длине волны 414 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения использовали раствор из 5 мл исследуемого экстракта, который помещали в мерную колбу (25 мл), добавляли 0,5 мл 33%-го раствора уксусной кислоты и доводили объем колбы 90%-м этанолом до метки. Одновременно измеряли оптическую плотность РСО рутина, приготовленного аналогично испытуемому раствору.

Содержание флавоноидов (%) в плодах черемухи выисляли по формуле:

где D_x, - оптическая плотность исследуемого раствора,

D_o- оптическая плотность РСО рутина,

т_х-масса сырья (г),

т₀ - масса рутина в РСО (г),

W -потеря в массе при высушивании (%).

Содержание антоцианов определяли согласно ФС.2.5.0049.15 «Черемухи обыкновенной плоды». Аналитическую пробу плодов черёмухи обыкновенной обрабатывали на шаровой мельнице для отделения околоплодника от семян. Полученный околоплодник измельчали до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3,0 мм. Около 1,0 г предварительно измельченного и просеянного сквозь сито с диаметром отверстий 3 мм околоплодника помещали в плоскодонную колбу вместимостью 150 мл, прибавляли 25 мл растворителя - хлороводородной кислоты раствора 1% в спирте 95%, присоединяли обратный холодильник и нагревали на водяной бане с программируемой температурой 80 °С в течение 30 минут. Затем колбу охлаждали до комнатной температуры и содержимое колбы сливали декантацией в мерную колбу вместимостью 100 мл. Экстракцию повторяли еще трижды указанным выше способом. Извлечения каждый раз декантировали в ту же мерную колбу. Объем фильтрата в мерной колбе доводили до метки хлороводородной кислоты раствором 1 % в спирте 95 % и встряхивали (раствор А).

Для проведения количественного определения антоцианов готовили два буфрных раствора с рН 1,0 (№1) и рН 4,5 (№2). В две колбы ёмкостью 25 мл помещали по 2,0 мл раствора А. Одну колбу заполняли до метки буферным раствором с рН 1,0, другую буферным раствором с рН 4,5 (растворы Б). Измеряли оптические плотности растворов из первой и второй колб при длинах волн 510 нм и 700 нм. В качестве растворов сравнения использовали соответствующие буферные растворы.

Содержание суммы антоцианов в пересчете на цианидин-3-глюкозид в процентах (Х) вычисляют по формуле:

Х =

 

13

где,

 

W₁– общий объем извлечения из сырья, мл;

W₂ – объём разведения, мл

m - масса сырья, г;

V- аликвота, взятая для разбавления, мл;

M_M– молярная масса цианидина-3-глюкозида, равная 449,17;

l – толщина кюветы, см;

ε – молярный коэффициент поглощения, равный 26900.

B – влажность, %.

Общую антиоксидантную активность мы определяли по методике Е.И. Рябининой. Об антиоксидантной активности исследуемого растительного сырья судили по их способности ингибировать аутоокисление адреналина in vitro и тем самым предотвращать образование активных форм кислорода. Для этого к 4 мл 0,2 М натрий-карбонатного буфера, рН = 10,65 (устанавливаемое добавлением к 0,2 М раствору Na2CO3 сухого реактива NaHCO3), добавляли 0,2 мл 0,1% (5,46 мМ) аптечного раствора адреналина гидрохлорида, тщательно и быстро перемешивали, помещали в спектрофотометр СФ-46 и определяли оптическую плотность через 30 сек в течение 10 мин при длине волны 347 нм в кювете толщиной 10 мм на спектрофотометре СФ-46 (D1). Далее к 4 мл буфера (рН=10,65) добавляли 0,06 мл исследуемого экстракта и 0,2 мл 0,1% адреналина гидрохлорида, перемешивали и измеряли оптическую плотность, как описано выше (D2). Для учета влияния собственной окраски экстрактов, которые поглощают определенную длину волны в видимой части спектра, в качестве контрольной пробы использовали буферированный раствор экстракта, без адреналина. Антиоксидантную активность (АА) исследуемых препаратов выражали в процентах ингибирования аутоокисления адреналина и вычисляли по формуле:

Величина АА более 10% свидетельствует о наличии антиоксидантной активности.

Анализ количественного содержания флавоноидов установил, что в плодах черемухи обыкновенной, заготовленной в лесной зоне города Ташла составляет 3,32±0,166, в то время как содержание в официнальном сырье - 2,03± 0,101.

Количественный анализ содержания антоцианов показал, что в плодах черемухи обыкновенной, собранной в лесной зоне города Ташла, содержание антоцианов составляет 15,3±0,765, в то время как в официнальном сырье - 7,03±0,351.

Установлено, что антиоксидантная активность растительного сырья черемухи обыкновенной, собранной в лесной зоне города Ташла, и официнального сырья высока, и составляет 61% и 57% соответственно.

Полученные данные свидетельствуют о целесообразности использования плодов черемухи обыкновенной в качестве сырьевого источника ценных биологически активных соединений, а именно флавоноидов и антоцианов, обладающих антиоксидантной активностью.

Код для цитирования: Скопировать