IX Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2017

Наружный отит – это воспаление наружного слухового прохода, который находится между отверстием данного прохода и барабанной перепонкой, одна из самых распространенных патологий у собак [1,8]. Нередко заболевание переходит в хроническую форму, а его длительность достигает трех и более лет [2].

В патогенезе отитов у собак, как правило, значимую роль играют возбудители бактериальных и грибковых инфекций, которые заселяют наружный слуховой проход [1,4].

Важным моментом при лечение отитов является выделение и идентификация возбудителей болезни с целью изучения их биологических свойств, в том числе чувствительность к антибактериальным препаратам.

Применение антибиотиков «в слепую», без изучения их активности в отношении возбудителей воспалительного процесса зачастую не дает желаемого эффекта в борьбе с патогенными микроорганизмами и проблема их устойчивости приобретает все большую значимость [5,7]. (В связи с вышеизложенным, особую значимость приобретают сведения о биологических свойствах возбудителей наружных отитов у собак.

Целью настоящего исследования является изучение биологических свойств наиболее часто встречающихся микроорганизмов, выделяемых при наружных отитах у собак – стафилококков.

Для реализации поставленной цели нам необходимо было выделить стафилококки из наружного слухового прохода от больной отитом у собаки и определить их видовую принадлежность.

Материалы и методы

Работа выполнена на базе ветеринарной поликлиники Межкафедрального научного центра ветеринарной медицины и кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ ФГБОУ ВО Ульяновская ГСХА.

В работе были изучен штамм бактерий, выделенный от собаки больной наружным отитом, и находящихся на лечении в ветеринарной поликлинике.

Животное включали в исследование при условии отсутствия применения местных и системных противомикробных препаратов в течение как минимум 2 недель до начала исследования.

Исследуемый материал получали методом смывов с помощью тампона из наружного слухового прохода собак [6].

Для выделения и идентификации микроорганизмов проводили микроскопию и посев материала бактериологическим методом на специальных питательных средах.

Выделение чистой культуры возбудителя осуществляли с учетом его культуральных особенностей галофильности (хорошее развитие в присутствии избыточного содержания поваренной соли при одновременном угнетении прочей микрофлоры), высокой потребности в белках и углеводах. Это достигали путем применения элективных питательных сред, выполняющих одновременно и функции дифференциально-диагностических [3] .

Использовали следующие питательную среды: кровяной МПА, желточно-солевой агар, молочно-солевой агар Петрович, Среду для накопления стафилококкового энтеротоксина.

Идентификациювыделенных чистых культур проводили, используя набор СТАФИтест 16 предназначенный для идентификации широкого ряда стафилококков и родственных грамположительных кокков (Мicrососus, Stomatococcus и др.), согласно инструкции по его применению. Учет результатов идентификации проводили, сопоставляя полученные данные с данными идентифкационной таблицы.

Определение основных показателей вирулентности

Основными показателями вирулентности стафилококков являются гемолитическая активность, выработка фермента плазмокоагулазы и некротоксичность.

При оценке степени патогенности культур широко использовали тесты Гросса. В группу патогенных стафилококков включали бактерии, обладающие (резкой гемолизирующей активностью, свертывающие цитратную плазму в течение 1-2 часов и располагающие выраженными некротизирующими свойствами.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Из исследуемого материала готовили мазки, окрашивали по Граму и микроскопировали. При микроскопии обнаруживали клетки сферические стафилококков, размером 0,5-1,0 мкм, грамположительные, располагаются единично, парами, в виде скоплений неправильной формы, некоторое количество клеток в мазках из тканей было фагоцитировано (рис.1).

Рис. 1. Мазок из смыва с очага воспаления при отите у собаки

Исследуемый материал высевали на следующие питательные среды: кровяной (овечий) агар, молочно-солевой агар, среду Ваird-Рагkег, плотные среды с добавлением на литр среды 15 мг налидиксовой кислоты и 10 мг колистина сульфата, желточно-солевой агар Чистовича.

Посевы, инкубировали в аэробных условиях при 37°С в течение 24-48 часов.

S. hyicus на агаровых средах росли в виде круглых выпуклых, блестящих, непрозрачных колоний, достигали на селективных средах диаметра 4-7 мм, пигмента и гемолиза эритроцитов не образовывали (рис. 2).

Рис. 2 Рост S. hyicus на кровяном агаре

Колонии грамположительных стафилококков после изучения морфологических и тинкториальных свойств отвивали на скошенный МПА и выращивали при температуре 37°С.

Чистые культуры грамположительных кокков изучали на каталазную активность. Для чего использовали культуры 18-20 часового роста.

На колонию микроорганизмов, взятую с поверхности питательной среды и помещенную на предметное стекло, после 30 мин выдержки на воздухе пипеткой наносят каплю 3%-ного раствора перекиси водорода.

При положительном результате через 30-60 с на стекле появлялись пузырьки газа, которые образовались в результате разложения перекиси водорода каталазой, образуемой микроорганизмами.

При выделении пузырьков газа культуры считали каталазоположительными.

Идентификацию стафилококков проводили используя СТАФИтест 16, сравнивая полученные результаты с показателями таблицы 1.

Таблица 1 - Биохимические признаки и другие свойства стафилококков, выделяемых от животных

Набор СТАФИтест 16 предназначен для идентификации широкого ряда стафилококков и родственных грамположительных кокков (Мicrососus, Stomatococcus и др.).

Изучаемый изолят представлял собой грамположительные кокки, расположенные скоплениями, напоминающие виноградные грозди, обладал коагулазной и ДНК-азной активностью, положительно реагировал на щелочную фосфотазу, уреазу , не выделял гемолизин, не образовывал пигмент, не ферментировал манит, мальтозу и эксулин.

Таким образом, по совокупности тинкториально-морфологических, культуральных и ферментативных свойств идентифицированный штамм был отнесен нами к виду Staphylococcushyicus.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Акжигитов А.С. Характеристика микрофлоры наружного слухового прохода у собак при отитах // Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук, 16.02.02, Уфа, 2015, 25 с.

2. Ершов, П. П. Этиологическая значимость дрожжевых грибов рода Malassezia при кожных заболеваниях животных: дис. … канд. вет. наук: 16.00.03 / Ершов Петр Петрович. – М., 2008. – 165 с.

3. Васильев, Д.А. Золотухин, С.Н., Никишина, Н.М. Методы общей бактериологии // Учебно-методическое пособие / Ульяновск, 1998.

4. Зверев, А. Ф. Характеристика Staphylococcus aureus, выделенных от бактерионосителей и разработка способа их санации: автореф. дис. … канд. мед. наук: 03.02.03 / Зверев Александр Федорович. – Оренбург, 2013. – 24 с.

5. Золотухин, С.Н. и др. Изучение чувствительности Escherihia coli 0157 к колифагам / Золотухин, С.Н. Молофеева Н.И., Васильев Д.А., Каврук Л.С.// Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. 2001. № 1. С. 59-62.

6. Ивченко, О. В. Диагностика малассезиозов животных: дис. … канд. вет. наук: 06.02.02 / Ивченко Олеся Валерьевна. – М., 2010. – 152 с.

7. Cafarcia, C. Association between phospholipase production by Malassezia pachydermatis and skin lesions / C. Cafarcia, D. Otranto // Journal of Clinical Microbiology. – 2004. – Vol. 42. – № 10. – P. 4868–4869.

8. http://www.studfiles.ru/preview/1152667/page:4/

9. Васильева Ю.Б. Зооантропонозные инфекции УМК/ Ю.Б. Васильева, И.И. Богданов – Ульяновск: УГСХА, 2016. – 99 с.

10. Васильева Ю.Б. Интерактивные формы обучения студентов / Ю.Б. Васильева, И.И. Богданов, С.Н. Золотухин, О.Н. Марьина / Материалы научно-методической конференции профессорско-преподавательского состава академии «Инновационные технологии в высшем профессиональном образовании». - 2013. - С. 39-42.

11. Васильева Ю.Б. Эпизоотология и инфекционные болезни животных / Ю.Б. Васильева, И.И. Богданов / Учебное пособие для студентов по специальности "Ветеринарно-санитарная экспертиза" / Ульяновск, 2015.

12. Васильева Ю.Б. Эпизоотология и инфекционные болезни животных / Ю.Б. Васильева, И.И. Богданов / Учебное пособие для студентов по специальности "Ветеринария" / Ульяновск, 2015.

13. Мухин Е.Б. Разработка препарата на основе бактериофагов / Е.Б. Мухин, Ю.Б. Васильева, А.Г. Семанин, А.Г. Загуменнов, Е.И. Суркова / Знания молодых для развития ветеринарной медицины и АПК страны. - 2015. - С. 147-148.

14. Найденова В.А. Инфекции: неизбежность или безответственность? / В.А. Найденова, Ю.Б. Васильева / VII Международная студенческая электронная научная конференция: «Студенческий научный форум – 2015». - Электронное издание. - 2015. - http://www.scienceforum.ru/2015/1064/10921

15. Нафеев А.А. Вопросы эпидемиолого-эпизоотологического надзора за зоонозными инфекциями / А.А. Нафеев, Н.И. Пелевина, Ю.Б. Васильева / Дезинфекционное дело. - 2014. - № 1. - С. 39-43.

16. Нафеев А.А. Зоонозные инфекции, с природной очаговостью, с позиции эпидемиологического и эпизоотологического диагнозов / А.А. Нафеев, Д.А. Васильев,, С.Н. Золотухин, Ю.Б. Васильева / Материалы Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной науки.». - 2015. - С. 50-53.

17. Общая эпизоотология / Ю.Б. Никульшина, А.И. Козин, Д.А. Васильев, Э.А. Афонин. - Ульяновск: УГСХА, 2007. - 209 с.

18. Пирюшова А.Н. Анализ эпизоотической ситуации по карантинным инфекциям / А.Н. Пирюшова, Ю.Б. Васильева / VI Международная студенческая электронная научная конференция: «Студенческий научный форум -2014». Электронное издание. 2014. -http://www.scienceforum.ru/2014/645/5113

19. Пирюшова А.Н. Особо опасные инфекции из-за рубежа / А.Н. Пирюшова, Ю.А. Журавкова, Ю.Б. Васильева / VII Международная студенческая электронная научная конференция: «Студенческий научный форум – 2015». - Электронное издание. - 2015. - http://www.scienceforum.ru/2015/1064/10924

20. Пульчеровская Л.П. Организация самостоятельной работы студентов при изучении клинических дисциплин кафедры МВЭ и ВСЭ / Л.П. Пульчеровская, Н.И. Молофеева, Ю.Б. Васильева, Д.А. Васильев / Материалы научно-методической конференции профессорско-преподавательского состава академии «Инновационные технологии в высшем профессиональном образовании». - 2015. - С. 144-146.

 

8

 

Код для цитирования: Скопировать