IX Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2017

Агропромышленныйкомплекс - важнаясоставнаячастьэкономикиУльяновскойобласти. Основное направление сельского хозяйства - зерновое земледелие и молочно-мясное животноводство. В хозяйствах области наиболее широко представлены породы скота молочного и молочно-мясного направления. Из молочных пород в области разводят красную степную, черно-пеструю породу, из молочно-мясных - швицкую, симментальскую, а из мясных - абердин-ангусскую, шаролезскую, шортгорнскую.

В связи с высокой продуктивностью стада, маститы занимают значительное место по распространенности из всех заболеваний, встречающихся в животноводческих хозяйствах. Своевременное выявление заболевания и разработка эффективных мер борьбы, способны тем самым снизить экономические потери от снижения качества (жирность молока, снижается до 0,39,%, снижается кислотность, количество казеина, сухих веществ, лактозы, кальция, pH, количество альбумина, глобулина, хлоридов повышается) и объема надоев молока [1].

Среди основных причин возникновения случаев мастита являются: несоответствие требованиям условий содержания и доения коров, различные дефекты и травмы вымени. Бактериальная контаминация молочной железы коров изучена недостаточно. Это связано с тем, что в связи с широким и не всегда рациональным применением различных препаратов антимикробного действия нарушаются свойства микроорганизмов в эволюционно сложившихся экологических системах микробных ассоциаций, что способствует появлению устойчивых к антибиотикам штаммов микроорганизмов, изменяющих микробный пейзаж молочной железы коров и состав микрофлоры.

Основными возбудителями маститов являются: Streptococcus uberis, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Staphylococcus aureus (до 95 % случаев), Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli (2-3%), Enterobacter aerogenes, Serratia sp., Proteus sp [6]. Стоит отметить, что Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Staphylococcus aureus - возбудители, передающиеся от коровы к корове, во время доения через аппарат, руки доярки, тряпку (при мытье вымени); Streptococcus uberis, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Enterobacter aerogenes - в результате нарушения гигиены содержания животного, падения иммунитета после отела; Serratia sp., Proteus sp.- через воду (при мытье вымени) [2].

Цель нашего исследования заключалась в выявление бактериальных агентов в маститном молоке, при проведении мониторинга частоты встречаемости маститов у лактирующих коров в хозяйствах (различной формы собственности) области.

Материалы и методы

Объекты исследования- пробы молока, взятые от лактирующих коров, в четырех животноводческих хозяйствах Ульяновской области различной формы собственности (частное подворье, фермы) (табл.1).

Возбудителей мастита в пробах молока идентифицировали в условиях лаборатории кафедры МВЭиВСЭ ФГБОУ ВО УГСХА. Перед забором проб, коровы подвергались осмотру и пальпации, а молоко подверглось органолептической оценке. Пробы были отобраны в стерильных условиях, в стерильные пробирки. Предварительно была произведена очистка и дезинфекция каждого соска вымени (спиртовым тампоном), пробирку для взятия пробы открывали в перчатках при непосредственном взятии пробы (для снижения риска внешней бактериальной контаминации), пробирку наполняли 1-2 нажимом (сосок не касался пробирки). Все отобранные пробы в специальных транспортных контейнерах были доставлены в лабораторию в течении 2-4 часов.

Таблица 1

Отбор проб в хозяйствах Ульяновской области

Хозяйство	Поголовье скота	Кол-во коров с подозрением на мастит	Количество отобранных проб
1	20	3	3
2	17	1	1
3	31	2	2
4	100	8	8

Каждую из проб делили на две части. Первую часть разливали в центрифужные пробирки и центрифугировали при 3000 об/мин в течении 15 минут. Надосадочную жидкость убирали, а полученный преципитат (твердый осадок) микроскопировали (по Граму) [3].

Вторую часть пробы условно маститного молока высевали на 5%-ый кровяной агар (с дефибринированной кровью барана), мясопептонный бульон, мясопептонный агар и среду Эндо [4].

Мясопептонный агар, мясопептонный бульон и среду Эндо готовили по прописи. Кровяной агар готовили следующим образом: к мясопептонному агару (по прописи) добавляли необходимое количество хлорида натрия (5 г/л), автоклавировали (121˚С), охлаждали до 45+1˚С и в асептических условиях вносили 5%-ый свежей дефибринированной крови барана. После этого готовую среду аккуратно (без образования пузырьков воздуха) разливали по чашкам Петри.

Все посевы культивировали в условиях термостата при 37+1°C, в течении 24 часов. Выросшие колонии микроскопировали.

Результаты и обуждение

В ходе микроскопирования первой части каждой из проб: в 10 пробах молока нами были отмечено присутствие неправильных скоплений (в виде виноградной лозы) грамположительных кокков. На мясопептонном агаре эти культуры образовывали мелкие (1-2 мм), слегка мутные колонии правильной формы, лимоно-желтого цвета. На кровяном агаре- колонии были окружены зоной ß-гемолиза. На мясопептонном бульоне- помутнение среды по всему объему и образование хлопьевидного осадка на дне пробирки.

В 3-х пробах при посеве на среде Эндо нами был отмечен рост лактозоположительной микрофлоры. Образованные колонии- ярко-малинового цвета с металлическим блеском, правильной круглой формы с ровными краями, диаметром 2-3 мм. На мясопептонном агаре- колонии бежевого цвета, правильной круглой формы, диаметром 2-3 мм. На кровяном агаре- выпуклые колонии правильной формы, гемолиз отсутствует. Миксроскопирование- грамотрицательные палочки с закругленными концами. На мясопептонном ьбульоне- равномерное помутнение по всему объему среды.

В 1-ой из проб на среде Эндо наблюдалось образование лактозоположительных колоний без металлического блеска, диаметром 2-3 мм. На мяопептонномагаре-- выпуклые колонии правильной формы, бежевого цвета, диаметром 2 мм. На кровяном агаре- выпуклые колонии правильной формы, гемолиз отсутствует. Миксроскопирование- короткие грамотрицательные палочки с закругленными концами. На мясопептонном бульоне- помутнение среды по всему объему, с образованием пристеночного кольца и пленки.

Поскольку высев на питательные среды и микроскопирование не дает четких результатов, нами были проведены исследования по изучению биохимических особенностей и свойств выделенных культур. По результатам биохимических тестов нами было сделано заключение о видовой природе возбудителях[5,6].

Биохимические тесты:

1. образование сероводорода (среда Клиглера)

2. утилизация цитратов (среда Симмонаса)

3. лактоза (среды Гисса с сахарами)

4. сахароза (среды Гисса с сахарами)

5. маннит (среды Гисса с сахарами)

6. глюкоза (среды Гисса с сахарами)

7. образование индола (IndoleNitrateMedium)

8. гидролиз желатины

Результаты исследований, связанные с идентификацией бактерий в пробах молока представлены в таблице 2.

Анализ результатов позволяет провести видовую дифференциацию выделенных культур из проб молока: St.aureus, E.coli, K.pneumoniae(табл.3).

Из происледованных проб, 10 проб были положительны на присутствие St.aureus, 3 пробы- E.coli, 1 проба-K.pneumoniae[7].

Выводы

Проведенные исследования показали, что основными возбудителями маститов являлись: St.aureus, E.coli, K.pneumoniae.

В качестве мер профилактики рекомендуем: организацию правильного содержания и кормления животных; четкое соблюдение правил доения и ухода за животными; содержание в порядке коровника и своевременную уборку прилегающих территорий; регулярный осмотр коров ветеринаром; своевременное выявление болезней органов пищеварения и репродуктивной системы животных, а также их своевременное лечение, направленной на повышение устойчивости коров к маститам разной этиологии; соблюдение обслуживающим персоналом правил личной гигиены.

Таблица 2

Исследование проб молока на присутствие бактериальных агентов

Проба

Биохимические тесты

Подвижность

Вид мик-ры

1

2

3

4

5

6

7

8

№1

-

-

+

+

+

+

+

-

-

E.coli

№2

+

+

+

+

+

+

-

+

+

St.aureus

№3

+

+

+

+

+

+

-

+

+

St.aureus

№4

-

+

+

+

+

-

-

-

-

K.pn.

№5

-

-

+

+

+

+

+

-

-

E.coli

№6

+

+

+

+

+

+

-

+

+

St.aureus

№7

+

+

+

+

+

+

-

+

+

St.aureus

№8

+

+

+

+

+

+

-

+

+

St.aureus

№9

+

+

+

+

+

+

-

+

+

St.aureus

№10

+

+

+

+

+

+

-

+

+

St.aureus

№11

+

+

+

+

+

+

-

+

+

St.aureus

№12

-

-

+

+

+

+

+

-

-

E.coli

№13

+

+

+

+

+

+

-

+

+

St.aureus

№14

+

+

+

+

+

+

-

+

+

St.aureus

«+» положительная реакция «-« отрицательная реакция

Таблица 3

Исследование проб на присутствие бактериальных агентов

Вид выделенной микрофлоры	Количество проб	% от общего числа проб
St.aureus	10	71,4
E.coli	3	21,4
K.pneumoniae	1	7,1
Общее количество проб	14	100

Библиографическийсписок:

1.Баймишева, Д. Ш. Факторы обусловливающие возникновение маститов. /Д. Ш. Баймишева, Л. А. Коростелева, С. В. Котенков. //Ж. Зоотехния. – 2007. - №8. – С.22 – 24.

2. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пище­вых продуктов. Санитарно-эпидемиологические правила и нормы. СанПиН 2.3.2.1078-01. М.: ФГУП «ИнтерСЭН», 2002, 168 с.

3. Горбатова К.К. Химия и физика молока и молочных продуктов / К.К.Горбатова, П.И.Гунькова // ГИОРД. – 2012. – С.336.

4.Мухин Е.Б. Определение бактерий группы кишечной палочки в молоке / Е.Б. Мухин, Ю.Б. Васильева, Н.Г. Барт, Н.Ю. Терентьева и др. // Студенческий научный форум – 2016: VIII Международная студенческая электронная научная конференция, электронное издание. – 2016.

5. Смирнов А.В. Ветеринарно-санитарная экспертиза с основами технологии молока и молочной продукции/ А.В.Смирнов //Учебное пособие. – 2013. – С.136.

6.Ширманова К.О. Определение общего количества бактерий в молоке / К.О. Ширманова, Ю.Б. Васильева, Н.Г. Барт, Н.Ю. Терентьева и др. // Студенческий научный форум – 2016: VIII Международная студенческая электронная научная конференция, электронное издание. – 2016.

7.Ширманова К.О. Схема детекциимаститогенной микрофлоры. / К.О. Ширманова, Ю.Б. Васильева, Н.Г. Барт, Н.А. Феоктистова и др. // Знания молодых для развития ветеринарной медицины и АПК страны: Материалы международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых. –2016.– С. 234-235.

Код для цитирования: Скопировать