IX Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2017

Многие виды микроорганизмов с выраженной протеолитической активностью обладают способностью расщеплять белок и пептоны до продуктов глубокого распада в виде индола. Бактерии рода Klebsiella -грамотрицательные факультативно-анаэробные микроорганизмы, с выраженной сахаролитической и протеолитической активностью. Представители рода встречаются в фекалиях человека, на коже и слизистых дыхательных путей, в почве, воде, фруктах и овощах. Благодаря капсуле устойчивы в окружающей среде [1].

На май 2015 года род включает 8 видов: Klebsiella granulomatis, Klebsiellamichiganensis, Klebsiellamobilis, Klebsiella oxytoca, Klebsiella pneumoniae, Klebsiellaquasipneumoniae, Klebsiellasingaporensis, Klebsiellavariicola. Часть видов (K. ornithinolytica, K. planticola и K. terrigena) в 2001 году было предложено выделить в самостоятельный род Raoultella. Индолоположительные штаммы, отрицательные по аргининдигидролазе и орнитиндекарбоксилазе и обладающие подвижностью при 10 ˚С были отделены от вида Klebsiella pneumoniae в самостоятельный вид- Klebsiella oxytoca [2, 3, 4]. Данный вид внутри рода является единственным видом все штаммы которого положительны по индолу.

Определение продукции индола колиформными бактериями – их важный дифференциальный признак. Индол образуется при расщеплении сложной гетероциклической кислоты – триптофана [5]. Его можно обнаруживать двумя способами, в которых используется контроль – стерильная среда. В первом случае, сразу же после посева в пробирку вносят полоску индикаторной (фильтровальной) бумаги, пропитанной насыщенным раствором щавелевой кислоты так, чтобы индикаторная бумага не касалась питательной среды, для чего верхнюю треть полоски прижимают пробкой к стенке пробирки. Посевы инкубируют 1-2 суток при температуре 37˚С. Образование индола определяют по окрашиванию нижнего конца индикаторной бумаги в бледно-розовый цвет, хорошо заметный в проходящем свете. Во втором случае, исследуемую культуру через 5-7 суток культивирования проверяют на присутствие индола реактивом Эрлиха или Ковача [6, 7]. Появление красной окраски свидетельствует об образовании индола.

Цель проведенных исследований заключалась в оценке способности образовывать индол штаммами бактерий родаKlebsiella как дифференциального внутриродового признака.

Материалы и методы исследований. В работе использовали музейные штаммы кафедры МВЭиВСЭ Ульяновской ГСХА: K. pneumoniae 56, K. pneumoniae 244, K. oxytoca 2, K. oxytoca 24. Посев осуществляли на среду №15 для определения индола (ФГУП ГНЦПМ г. Оболенск). Приготовленную по прописи среду, разливали в пробирки по 5 мл и автоклавировали в течение 15 минут при 121 С˚. Культивирование осуществляли в условиях термостата, в течение 24-х часов при 37˚С [3]. В качестве контроля использовали пробирку с незасеянной средой. В качестве тест-реактива нами был выбран реактив Ковача.

Результаты исследований. В ходе исследований:

штамм K. pneumoniae 56- индолотрицателен (после добавления реактива Ковача на поверхности среды образовывалось кольцо желтого цвета, в пробирке с контролем среды- кольцо желтого цвета ).

штаммK. pneumoniae 244- индолотрицателен (после добавления реактива Ковача на поверхности среды образовывалось кольцо желтого цвета, в пробирке с контролем среды- кольцо желтого цвета ).

штаммK. oxytoca 2- индолположителен (после добавления реактива Ковача на поверхности среды образовывалось кольцо ярко-малинового цвета, в пробирке с контролем среды- кольцо желтого цвета ).

штаммK. oxytoca 24- индолположителен (после добавления реактива Ковача на поверхности среды образовывалось кольцо ярко-малинового цвета, в пробирке с контролем среды- кольцо желтого цвета ).

Выводы. Результаты проведенных исследований, позволяют заключить, что тест на образование индола можно использовать при внутриродовой дифференциации бактерий рода Klebsiella.

Библиографический список:

1. Бульканова Е.А. Выделение, диагностика и идентификация бактерий рода Klebsiella// Материалы Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых.- Ульяновск: Ульяновская ГСХА им.П.А.Столыпина, 2004.-С.257-262.

2. Садртдинова Г.Р. Агрегация бактерий Klebsiellaoxytoca и Klebsiellapneumoniae под влиянием химического фактора// Инфекция и иммунитет.2015-№.4-С.377-381.

3. Садртдинова Г.Р .Повышение селективных и дифференциально- диагностических свойств плотной агаровой среды, предназначенной для выделения бактерий рода Klebsiella// Материалы IV Международной научно-практической конференции молодых ученых «Молодежь и наука XXI века». – Ульяновск: Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина, 2014,т.1 – С. 122-127.

4. Садртдинова Г.Р. Создание селективной среды для выделения, дифференцирования и идентификации бактерий рода Klebsiella/ С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев, Г.Р. Садртдинова// Материалы VII Международной научно-практической конферен­ции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения» / - Ульяновск: УГСХА, 2016. Т. III. – С.266-269.

5. Садртдинова Г.Р. Биохимическая активность бактерий вида Klebsiellaoxytoca/ Г.Р. Садртдинова, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев// Материалы VII Международной научно-практической конферен­ции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения» / - Ульяновск: УГСХА, 2016. Т. III. – С.261-265.

6. Садртдинова Г.Р. Изучение культуральных свойств бактерий вида Klebsiella oxytoca/Г.Р.Садртдинова, Е.А.Ляшенко, Д.А.Васильев// Материалы Международной научно-практической конференции «Биотехнология: реальность и перспективы».- Саратов: Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И.Вавилова, 2014.-С.193-196.

7. Садртдинова Г.Р. Биохимические тесты для ускоренной внутриродовой детекции бактерий Klebsiella/ Г.Р.Садртдинова, Д.А.Васильев//Sci-article.2015.№17.c.11-15.

Код для цитирования: Скопировать