IX Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2017

Бордетеллёз домашних животных в нашей стране является малоизученным заболеванием и диагностируется как патология невыясненной этиологии [1-25]. Методы выделения Bordetella bronchiseptica не разработаны, что создает определённые сложности в своевременном и точном выявлении заболевания у домашних животных [2, 5, 7, 9].

В связи с этим целью нашего исследования исследование собак на наличие бордетеллоносительства.

Материалы и методы. Исследования проводили в лаборатории НИИЦМиБ кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ и на базе приюта для животных «Лапа помощи» Ульяновской ГСХА.

Для типирования, выделенных от животных микроорганизмов использовали определитель бактерий Берджи [11].

Собак фиксировали при взятии проб из носовой полости в стоячем или сидячем положениях, удерживая голову одной рукой за кожную складку на шее, а другой – за челюсти. При взятии проб из глотки в стоячем или сидячем положениях, разводя челюсти руками или с помощью инструментов.

Для типизации Bordetella bronchiseptica использовали среды: бордетелагар, Эндо, МПА, триптико-соевый бульон, МПБ, набор сахаров Гисса, тесты на подвижность, оксидазу, индол, микроскопию с окраской по Граму.

Схема опыта №1 включала взятие проб – мазков из назальной впадины собак. Для этого использовали стерильные ватные палочки и ТСБ. Палочки помещали в носовые ходя собак на глубину 2-4 см и совершали несколько вращательных движение, касаясь внутренней стенки носовой полости. После взятия материала пробы подращивали в термостате при t 37°С в течение суток. Затем осуществляли оценку роста на ТСБ и проводили посев на плотную питательную среду - бордетелагар с суточной инкубацией при t 37°С в термостате. На 2-3 сутки оценивали рост колоний, выделяли чистые культуры методом посева штрихом и изучали морфологические, биохимические и культуральные свойства выделенных микроорганизмов.

Схема опыта №2 включала взятие проб из глотки собак. Для этого использовали стерильные ватные палочки и селективную среду – бордетелагар. Мазок брали с задней стенки глотки собак, совершая несколько вращательных движений. После взятия материала пробы подращивали в термостате при t 37°С в течение 1-2 суток. Затем выделяли чистые культуры и комплексно изучали их свойства.

При проведении первого опыта были получены следующие результаты. Результаты посева суточных бульонных культур на бордетелагар с суточной инкубацией при t 37°С в термостате не дали положительных результатов выделения Bordetella bronchiseptica. Выросшие колонии отнесли к родам: Candida, Mucor.

При проведении опыта №2 были получены следующие результаты.

Оценка роста выделенных культур в жидкой питательной среде представлена в таблице 1. 6 из 9 исследуемых культур, вызывали равномерное помутнение ТСБ с последующим образованием осадка и пристеночного поверхностного кольца, что характерно для рода бордетелл.

Таблица 1. Оценка роста микроорганизмов на триптико-соевом бульоне

Проба	Равномерное помутнение	Придонный рост	Пристеночный рост	Поверхностный рост (кольцо)
Б№1	+	+	-	+
Б№2	+	+	-	+
Б№3	+	+	-	-
1С№1	+	-	-	-
1С№2	+	+	-	+
2С№1	-	+	-	-
Ф№1	+	+	-	+
Ф№2	+	+	-	+
Ф№3	+	+	-	+

Результаты культивирования отдельных колоний на плотной селективной среде - бордетелагаре представлены в таблице 2.

Таблица 2. Оценка колоний на бордетелагаре

Проба	величина	форма	Контур края	рельеф	поверхность	цвет	структура	консистенция
Б№1	до 3мм	округлая	ровный	выпуклый	гладкая	белый	прозрачная	слизистая
Б№2	до 3мм	округлая	ровный	выпуклый	гладкая	белый	прозрачная	слизистая
Б№3	до 3мм	округлая	ровный	выпуклый	гладкая	белый	прозрачная	слизистая
1С№1	до 4мм	округлая	ровный	выпуклый	гладкая	белый	прозрачная	слизистая
1С№2	до 3мм	округлая	ровный	выпуклый	гладкая	бежево-серый	прозрачная	слизистая
2С№1	от 3 до 5мм	округлая	ровный	выпуклый	гладкая	бежево- серый	прозрачная	слизистая
Ф№1	до 1мм	округлая	ровный	выпуклый	гладкая	бежево- серый	прозрачная	слизистая
Ф№2	до 3мм	округлая	ровный	выпуклый	гладкая	бежево-серый	прозрачная	слизистая
Ф№3	до 3мм	округлая	ровный	выпуклый	гладкая	бежево-серый	прозрачная	слизистая

На селективной среде характерный рост для рода Bordetella (маленькие, блестящие, полупрозрачные, серовато-белые колонии диаметром 0,2-2,5 мм) показали 7 культур.

Результаты изучения морфологических и культуральных свойств колоний представлены в таблице 4. По морфологическим и культуральным свойствам роду Bordetella соответствовали 4 культур. Они представляли собой овоидные, коккобациллярные грамотрицательные палочки, окрашивающиеся биполярно, располагающиеся одиночно, парами, редко короткими цепочками. Все исследуемые образцы были подвижны и хорошо росли на простых и селективных питательных средах.

Таблица 4. Морфологические и культуральные свойства полевых штаммов

Проба	Окраска по Граму	Форма бактерий	Подвижность	Рост на средах
				Эндо	ТСА	МПБ	ТСБ
Б№1	«-»	Кокки	+	+	+	+	+
Б№2	«-»	Кокки	+	+	+	+	+
Б№3	«-»	Кокки	+	+	+	+	+
1С№1	«-»	Кокки	+	+	+	+	+
1С№2	«-»	коккобацилла	+	+	+	+	+
2С№1	«-»	Бацилла	+	+	+	+	+
Ф№1	«-»	Коккобацилла	+	+	+	+	+
Ф№2	«-»	Коккобацилла	+	+	+	+	+
Ф№3	«-»	Коккобацилла	+	+	+	+	+

Результаты изучения биохимических свойств, выделенных колоний представлены в таблице 3.

Таблица 3. Биохимические параметры полевых штаммов

№ п/п	Малый «пёстрый» ряд сахаров Гисса					индол	оксидаза
	глюкоза	лактоза	маннит	мальтоза	сахароза
Б№1	+	-	-	+	-	-	+
Б№2	+	-	-	+	-	-	+
Б№3	+	-	-	+	-	-	+
1С№1	+	-	-	+	-	-	+
1С№2	-	-	-	-	-	-	+
2С№1	-	-	-	-	-	-	+
Ф№1	-	-	-	-	-	-	+
Ф№2	-	-	-	-	-	-	+
Ф№3	-	-	-	-	-	-	+

По биохимическим тестам роду Bordetella соответствовало 5 культур, которые не ферментировали сахара, не образовывали индол и продуцировали оксидазу.

Выводы и предложения. В результате комплексного изучения морфологических, культуральных и биохимических свойств у 4-х исследуемых собак было установлено бордетеллоносительство.

Библиографический список:

1. Васильев Д.А. Бордетеллёз животных: характеристика заболевания и возбудителя, разработка методов диагностики / Д.А. Васильев, Ю.Б. Васильева, А.В. Мастиленко, Д.Г. Сверкалова, Е.Н. Семанина, О.Ю. Борисова, С.Н. Золотухин, И.Г. Швиденко И.Г. - Ульяновск, 2014.

2. Васильев Д.А. Индикация Bordetella bronchiseptica из объектов внешней среды и клинических образцов / Д.А. Васильев, Ю.Б. Васильева, Е.Н. Семанина, Е.Г. Семанин / Материалы V Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения». Ульяновская ГСХА - 2013. - С. 18-22.

3. Васильева Ю.Б. Алгоритм использования тecт-cистемы индикации и идентификации бактерий B. bronchiseptica / Ю.Б. Васильева, А.В. Мастиленко, Д.А. Васильев, Р.Р. Бадаев, С.В. Мерчина, И.Г. Швиденко, Е.И. Суркова / Современные проблемы науки и образования. - 2014. - № 5. - С. 606.

4. Васильева Ю.Б. Биотехнологический подход в разработке метода идентификации Bordetella bronchiseptica / Ю.Б. Васильева, Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, Е.Г. Семанин / Материалы V Международной научно-практической конференции. Ульяновская ГСХА «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения». - 2013. - С. 15-18.

5. Васильева Ю.Б. Детекция бактерий Bordetella bronchiseptica в мультиплексной полимеразно-цепной реакции / Васильева Ю.Б., Мастиленко А.В., Семанин А.Г., Скорик Д.С., Суркова Е.И. / Сборник статей «Аграрная наука - сельскому хозяйству». - 2014. - С. 253-257.

6. Васильева Ю.Б. Наборы для детекции бактерий вида В. Bronchiseptica / Ю.Б. Васильева, А.В. Мастиленко, Д.А. Васильев, А.Г. Семанин, Е.И. Суркова, А.С.Скорик, А.Н. Пирюшова, Н.Р. Уралов / Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 55-летию ВНИИВВиМ «Актуальные в опросы контроля инфекционных болезней животных». - 2014. - С. 48-53.

7. Васильева Ю.Б. Разработка методов выделения и селекции бактериофагов Bordetella bronchiseptica / Ю.Б. Васильева, Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина / Материалы Международной научно-практической конференции «Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности». - 2013. С. 28-32.

8. Васильева Ю.Б. Технология конструирования диагностического биопрепарата на основе бактериофагов Bordetella bronchiseptica и перспертивы его применения / Ю.Б. Васильева, Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина / Материалы Международной научно-практической конференции «Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности». - 2013. - С. 99-103.

9. Васильева Ю.Б. Эффективность иммунохимических методов для анализа антигенного состава Bordetella bronchiseptica / Ю.Б. Васильева // Фундаментальные исследования. - 2013. - № 10-1. - С.100-104.

10. Васильева Ю.Б. Эпизоотология и инфекционные болезни животных / Васильева Ю.Б., Богданов И.И. – Ульяновск. - 2015. – 25 с.

11. Ломакин А.А. Чувствительность к антимикробным средствам бактерий вида Bordetella bronchiseptica / А.А. Ломакин, А.В. Мастиленко, Ю.Б. Васильева / Материалы I международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования по приоритетным направлениям биоэкологии и биотехнологии». - 2014. - С. 144-147.

12. Мастиленко А.В. Подбор праймеров для выявления генов бактерий вида Bordetella bronchiseptica / А.В. Мастиленко, Ю.Б. Васильева, Н.А. Феоктистова / Материалы I международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования по приоритетным направлениям биоэкологии и биотехнологии». - 2014. - С.109-112.

13. Мастиленко А.В. Разработка методики серологической идентификации Bordetella bronchiseptica с помощью иммуноэлетрофореза / А.В. Мастиленко, Д.Г. Сверкалова, Е.Г. Семанин, Ю.Б. Васильева / Материалы III-й Международной научно-практической конференции молодых ученых «Молодежь и наука XXI века». - 2010. - С. 47-49.

14. Мастиленко А.В. Разработка протокола проведения ПЦР для детекции бактерий вида Bordetella bronchiseptica / А.В. Мастиленко, Ю.Б. Васильева, Н.А. Феоктистова / Материалы I Международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования по приоритетным направлениям биоэкологии и биотехнологии». - 2014. - С. 113-116.

15. Мастиленко А.В. Определение эффективности разработанных зондов в реакции ОТ-ПЦР для повышения специфичности выявления Bordetella bronchiseptica / А.В. Мастиленко, Д.А. Васильев, Ю.Б. Васильева, Д.Г. Сверкалова // - Инфекция и иммунитет. - 2013. - Т.3. - № 2. - С.152.

16. Никульшина Ю.Б. Выделение бактерий рода Bordetella brovchiseptica от домашних животных / Ю.Б. Никульшина, Д.Г. Сверкалова, Е.Н. Никулина, Д.Н. Хлынов / Материалы Международной научно-практической конференции «Роль молодых ученых в реализации национального проекта "Развитие АПК"». - 2007. - С. 281-284.

17. Никульшина Ю.Б. Культивирование Bordetella bronchiseptica на различных селективных средах / Ю.Б. Никульшина, Д.А. Сверкалова, А.В. Мастиленко, Д.Н. Хлынов, Д.А. Васильев / Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 65-летию Ульяновской ГСХА «Актуальные вопросы аграрной науки и образования». - 2008. - С. 57-59.

18. Никульшина Ю.Б. Разработка методов индикации и идентификации Bordetella bronchiseptica, выделенных у домашних животных / Ю.Б. Никульшина, Д.Г. Сверкалова, Е.Н. Никулина // Ветеринарная патология. - 2007. - № 4. - С. 103-106.

19. Определитель Бактерий Берджи. М, 1997.

20. Пирюшова А.Н. Особо опасные инфекции из-за рубежа / А.Н. Пирюшова, Ю.А. Журавкова, Ю.Б. Васильева / Студенческий научный форум. – 2015. - VII Международная студенческая электронная научная конференция, электронное издание. 2015.

21. Райчинец Ю.А Методика выделения Paenibacillus larvae / Ю.А. Райчинец, Н.А. Феоктистова, М.А. Лыдина, Р.Р. Бадаев, Д.А. Васильев, Ю.Б. Васильева, С.В. Мерчина, И.Г. Швиденко / Современные проблемы науки и образования. - 2014. - № 5. - С. 599.

22. Сверкалова Д.Г. Создание транспортной и накопительной сред для Bordetella bronchiseptica / Д.Г. Сверкалова, А.В. Мастиленко, Д.Н. Хлынов, Ю.Б. Никульшина, Д.А. Васильев / Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 65-летию Ульяновской ГСХА «Актуальные вопросы аграрной науки и образования». - 2008. - С. 134-136.

23. Семанин А.Г. Анализ распространения бордетеллеза домашних животных / А.Г. Семанин, А.С. Скорик, Е.И. Суркова, Ю.Б. Васильева, О.Н. Марьина / Студенческий научный форум – 2014. - VI Международная студенческая электронная научная конференция: Электронное издание. 2014.

24. Семанин А.Г. Комплексный биопрепарат на основе фагов / А.Г. Семанин, Е.И. Суркова, А.С. Скорик, Ю.Б. Васильева / Материалы I-й международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования по приоритетным направлениям биоэкологии и биотехнологии». - 2014. - С. 79-82.

25. Семанин А.Г. Разработка селективной добавки для выделения возбудителя респираторной инфекции / А.Г. Семанин, Ю.Б. Васильева, А.В. Загуменнов, Е.Б. Мухин / Знания молодых для развития ветеринарной медицины и АПК страны 2015. - С. 196-197.

Код для цитирования: Скопировать