В стоматологии препараты бактериофагов применяют, преимущественно, в лечении пародонтита наряду с традиционными лечебными средствами: пастами, гелями, ополаскивателями и т.д. В состав средств гигиены полости рта входят различные компоненты (антисептики, растительные экстракты, концентраты минеральных вод и т.д.), обладающие антимикробной активностью. Однако остается недостаточно изученным вопрос, как эти средства сочетаются с бактериофагами.
Цель настоящей работы - изучение влияния различных средств гигиены полости рта на антимикробную активность бактериофага в условиях эксперимента.
Материалы и методы. В опытах использовали комплексный препарат «Секстафаг» производства Пермского филиала ФГУП НПО «Микроген» МЗ РФ «Пермское НПО «Биомед» различных серий.
Оценивали антифаговую активность 8 образцов зубных паст: «Lacalut-activ», «Blendamed-7-complite», «Blendamed-7-expert», «Elmex», «Parodontax», «Sensodine», «Асепта» и «Дракоша», а также 2-х образцов ополаскивателей: «Асепта» и «President».
В качестве бактериальных тест-штаммов применяли музейные культуры Staphylococcusaureus АТСС 25923 и EscherichiacoliАТСС 25922. Кроме того, в ряде экспериментов использовали культуры Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa и Proteus vulgaris клинического происхождения. Использовали традиционные методики количественного определения (титрования) бактериофага в жидкой питательной среде по Аппельману и на плотных питательных средах по Грациа. В экспериментах, проведенных по методу Аппельмана, применяли среду 199, что связано с отсутствием в ее составе высокомолекулярных компонентов, способных влиять на проявление антимикробной активности антисептиков, входящих в состав паст и ополаскивателей [2].
При оценке влияния зубных паст и ополаскивателей на активность (концентрацию) бактериофага мы пытались смоделировать условия их взаимодействия при уходе за полостью рта. Навески паст массой 1,0-1,5 г гомогенизировали в 3-кратном количестве среды 199, имитируя разведение пасты ротовой жидкостью при чистке зубов. Пробы ополаскивателей разводили средой 199 в соотношении 1:1. Затем к этим смесям добавляли равный объем препарата бактериофага и помещали образцы в термостат (to = 37oC) на 30 мин. Опыты сопровождали постановкой контроля, где инкубировали смесь бактериофага и среды. Далее в зависимости от методики либо готовили серийные разведения смесей в стерильных полистироловых планшетах с последующим добавлением микробных взвесей, либо производили высевы на плотную среду (по методу Грациа).
Поскольку, как уже указывалось, в состав исследуемых средств гигиены входят различные антимикробные компоненты, мы сочли необходимым произвести также оценку собственного антимикробного потенциала изучаемых зубных паст и ополаскивателей.
Результаты и обсуждение. Исследования выявили наличие антимикробной активности образцов зубных паст и ополаскивателей, причем активность последних была существенно выше (табл.1).
Таблица 1
Антибактериальная активность образцов паст и ополаскивателей, последнее 2-кратное разведение, обладающее бактериостатическим действием
№ п/п |
Название средства |
Микробные тест-культуры |
|
Staphylococcusaureus |
Escherichia coli |
||
1 |
Asepta-паста |
2 |
3 |
2 |
Дракоша |
2 |
0 |
3 |
Lacalut-activ |
2 |
1 |
4 |
Blendamed-7-complite |
3 |
3 |
5 |
Blendamed-7-expert |
3 |
2 |
6 |
Elmex |
3 |
2 |
7 |
Parodontax |
3 |
2 |
8 |
Sensodine |
3 |
2 |
9 |
Asepta-ополаскиватель |
4 |
5 |
10 |
President |
3 |
4 |
Впрочем, уровень антибактериальной активности бактериофага был существенно выше, что сводило на нет влияние паст и ополаскивателей на результаты основной части эксперимента (табл.2).
Таблица 2
Активность бактериофага после контакта с пастами и ополаскивателями, последнее разведение, обладающее бактериостатическим действием
№ п/п |
Название средства |
Микробные тест-культуры |
|
Staphylococcusaureus |
Escherichia coli |
||
1 |
Asepta-паста |
6 |
7 |
2 |
Дракоша |
7 |
7 |
3 |
Lacalut-activ |
3 |
2 |
4 |
Blendamed-7-complite |
7 |
7 |
5 |
Blendamed-7-expert |
7 |
6 |
6 |
Elmex |
7 |
7 |
7 |
Parodontax |
6 |
7 |
8 |
Sensodine |
7 |
6 |
9 |
Asepta-ополаскиватель |
7 |
6 |
10 |
President |
7 |
7 |
11 |
Контроль (активность б/фага) |
6 |
7 |
Эксперименты показали, что в большинстве случаев компоненты секстафага полностью сохраняли антибактериальную активность после контакта с суспензиями паст или ополаскивателями (табл.2) - опытные показатели не отличались от контрольных. Это говорит о возможности одновременного включения в схемы лечения патологии полости рта исследованных паст и ополаскивателей вместе с препаратами бактериофагов.
В то же время образец пасты № 3 («Lacalut-activ») практически наполовину снизил антимикробные свойства фага. Данный результат свидетельствует о нецелесообразности сочетанного использования бактериофагов и этой зубной пасты. С другой стороны, выявленное нами в эксперименте угнетающее влияние пасты «Lacalut-activ» на бактериофаг можно расценить как косвенное свидетельство возможности применения данной пасты при вирусной патологии полости рта.
В целом полученные результаты указывают на необходимость дальнейшего изучения возможных результатов сочетанного применения бактериофагов и традиционных гигиенических средств, применяемых в стоматологии, что позволит повысить эффективность их использования.
Литература.
1. Субботин А.В., Функнер Е.В., Урман М.Г., Горовиц Э.С., Маслов Ю.Н,, Одинцова О.В. Применение секстафага в комплексной антибактериальной терапии инфицированного панкреонекроза // Здоровье и образование Материалы международной научно-практической конференции. – Пермь: ГОУ ВПО ПГМА им. ак. Е.А.Вагнера, 2006. – С.191-197.
2. Субботин А.В., Пономарев А.Ю., Урман М.Г., Горовиц Э.С., Маслов Ю.Н., Одинцова О.В. Способ определения чувствительности микроорганизмов к жидкому комбинированному бактериофагу // Патент РФ № 23065663 от 20.09.2007 г.