IX Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2017

В настоящее время роль мужского фактора в развитии бесплодия существенно занижена. В России зафиксировано от 10% до 17% бесплодных супружеских пар (4-4,5 млн.) [1, 3]. Из рекомендаций ВОЗ к качеству эякулята следует, что за последние 30-40 лет требования к некоторым показателям спермограммы снизились на 25-35% [5]. Это заставляет задуматься о поиске причин и механизмов повреждения сперматозоидов. Одним из таких механизмов, вероятно, может являться воздействие активных форм кислорода или реактивных соединений азота на биополимерные составляющие сперматозоидов, такие как нуклеиновые кислоты, белки, углеводы и на липиды. Считается, что наиболее массивному повреждению подвергаются белковые молекулы, которые под воздействием свободных радикалов фрагментируются, с образованием карбонильных производных или же формируются внутримолекулярные сшивки, что влечёт за собой нарушения конформационной модели и сказывается на функции белков.

Цель исследования–оценить уровень окислительной модификации белков (ОМБ) спермоплазмы субфертильных мужчин.

Объекты и методы исследования. Проведено лабораторное исследование образцов эякулята 92 мужчин, состоящих в бесплодном браке, средний возраст которых составил 37,7±0,7 года. Исследована сыворотка периферической крови 10 практически здоровых доноров. Для оценки ОМБ использовали методику Reznick A.Z. et al. [4] в нашей модификации. Реакцию проводили с 0,1M раствором 2,4-динитрофенилгидразина (ДНФГ). В контрольной пробе использовали растворитель ДНФГ. Из данных литературы [2] известно, что для алифатических альдегид-динитрофенилгидразонов (аДНФн) нейтрального характера спектр поглощения зарегистрирован при 260 нм, основного характера – 530 нм (аДНФо). Для алифатических кетон-ДНФ нейтрального характера спектр поглощения составляет 365 нм (кДНФн), основного характера – 430 нм (кДНФо). Содержание карбонилов вычисляли из пика поглощения при соответствующих длинах волн. Концентрацию окисленных белков выражали в нмоль/мг общего белка. Общий белок в спермальной жидкости определяли с помощью биуретовой реакции (Вектор-Бест, Новосибирск). Статистический анализ проводили с помощью непарного t-критерия Стьюдента.

Результаты исследований. В ходе исследований установлено, что уровень кДНФн сыворотки крови здоровых доноров составил 1,24±0,15 нмоль/мг белка (контрольная проба 0,56±0,12 нмоль/мг белка), что соответствует результатам, полученным как в классическом варианте реакции (p>0,05) [4], так и литературным данным [6]. Уровень кДНФо составляет 0,74±0,11 нмоль/мг белка (контрольная проба 0,36±0,07 нмоль/мг белка), а аДНФо – 0,37±0,07 нмоль/мг белка (контрольная проба 0,25±0,05 нмоль/мг белка). Установлено, что концентрация карбонилов в спермоплазме составила 2,01±0,10 для аДНФо, 0,80±0,04 – кДНФн, 0,43±0,02 – кДНФо и 0,23±0,01 нмоль/мг белка для аДНФн.

Заключение.Наибольший вклад в спектр карбонильных производных ДНФ вносят аДНФо (2,01±0,10 нмоль/мг белка). Одной из возможных причин изменения характеристик половых клеток может быть окислительная модификация белка, которая развивается как при прямом воздействии микроорганизмов, так и опосредованно, например, через активацию синтеза АФК лейкоцитами.

Список литературы

1. Годовалов А.П., Карпунина Т.И. Микробиота эякулята мужчин с бесплодием в условиях крупного промышленного города // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. Социальные, гуманитарные, медико-биологические науки. – 2015. – Т. 17, № 5-2. – С. 338-343.

2. Копытова Т.В., Пантелеева Г.А., Дмитриева О.Н., Коткова Е.В. Оценка окислительной модификации белков у больных хроническими распространёнными дерматозами // Клиническая лабораторная диагностика. – 2014. – №2. – С. 41-44.

3. Godovalov A.P., Karpunina T.I. Мicrobiological and morpho-functional features of ejaculate from infertile men with asymptomatic bacteriospermia // Международный научно-исследовательский журнал. – 2016. – № 9-3 (51). – С. 34-38.

4. Reznick A.Z., Packer L. Oxidative Damage to Proteins: Spectrophotometric Method for Carbonyl Assay // Methods in enzymology. – Vol. 233. – 1994. – Р. 357-363.

5. Esteves S.C. Clinical relevance of routine semen analysis and controversies surrounding the 2010 World Health Organization criteria for semen examination // Clinical relevance of routine semen analysis and controversies – 2014. - Vol. 40 (4) – P. 443-453

6. Sheth J.J. Genoprotective Effect of Indian Gentian in Type 2 Diabetes Mellitus (T2DM): Comet Assay, Sister Chromatid Exchange and Protein Oxidation Studies // Int. J. Hum. Genet. – 2011. – Vol. 11(2) – Р. 83-88.

Код для цитирования: Скопировать