У хвостатых амфибий процессы репаративной регенерации хорошо выражены даже на поздних стадиях развития (посттравматическое восстановление глаз, конечностей у тритонов). У бесхвостых - восстановление выражено на стадии личинки. Нами описано восстановление пигментной системы. Пигментная система позвоночных - совокупность клеток нейрального происхождения. Пигментные клетки в онтогенезе образуются из материала нервного гребня. Зрелые меланоциты - у амфибий меланофоры - высокодифференцированные клетки, тем не менее способные к митозу. Меланофоры способны перемещать гранулы пигмента по клетке, причем пути перемещения сохраняются и в дочерних клетках - клеточная память. Меланофоры заметны невооруженным глазом, благодаря пигменту меланину, не иннервированы и обладают гормональной чувствительностью. Под действием мелатонина происходит агрегация, движение пигментных гранул в перикариальную область , а под действием МСГ и некоторых других гипофизарных гормонов – распределение по всей клетке, то есть дисперсия.
Мы проводили работу на личинках шпорцевой лягушки. Животные подвергались операции по разрушению дермальных меланофоров в области за глазом с правой стороны. Меланофоры разрушали надавливая стеклянным капилляром на кожу личинки. Головастиков содержали при постоянных условиях в термостате ТСО-1/80 СПУ при температуре 23 С на постоянном освещении 40 люкс. Все личинки были распределены на три группы по фонам (белый, нейтральный и темный). В качестве нейтрального фона использовался серый. Каждая группа включала контрольных и опытных животных. Эксперимент длился 12 дней. На 2,5,7,9 и 12 день проводили видеофиксацию камерой ToupCam. Анализ числа клеток вели с помощью программы ImageJ и Excel. При первом подсчете подбирался определенный участок, на котором обнаруживалось 30 клеток. В опытную и контрольную группы были включены головастики 46-48, 52-54 и 55-58 стадий.
По истечении срока восстановления клеток было выявлено, что пигментных клеток больше у животных из опытной группы, в контроле количество клеток изменяется незначительно. На ранних стадиях (46-48) число клеток у контрольных головастиков превышало, число клеток после регенерации у животных опытной группы. Для животных, содержащихся на темном фоне опытной группы этот показатель составил – 59%, на сером фоне - 34%, на белом фоне – 17%. В то же время в контрольной группе мы наблюдали увеличение числа клеток на 74%, 71%, 44% соответственно. Для 52-53 стадии показано, что увеличение числа клеток в контрольной группе происходило на 14-21% с минимумом на белом фоне, а в опытной группе на 40-52% соответственно. На поздних стадиях развития (после 54) увеличение числа клеток наблюдалось только на сером и черном фоне (56% и 54% соответственно), на белом фоне число клеток на исследуемом участке кожи после операции было меньше, чем до нее.
Вероятно, потеря контактного ингибирования стимулирует клетки к митозу, а воспалительная реакция к дифференцировке меланобластов. Причем на интенсивность этих процессов оказывают влияние гормоны МСГ и мелатонин, концентрация которых в организме напрямую зависит от светового режима. Отмечено, что на черном фоне личинки шпорцевой лягушки наиболее интенсивно растут на стадиях от 48 до 54. Белый фон тормозит развитие личинок на ранних стадиях, безразличен на стадиях 52-54, и ускоряет развитие на поздних стадиях. Данный эксперимент подтверждает влияние фона на пролиферативную активность недифференцированных клеток и при регенерационном морфогенезе , а значит и на общее состояние личинок.
Список литературы:
Беспятых А.Ю., Бурлакова О.В., Голиченков В.А., Мелатонин как антиоксидант: основные функции и свойства 2010, т130 №5 сс 487-496
Виноградская И.С. Молчанов А.Ю. Структурно-функциональная перестройка кожи шпорцевой лягушки в период метаморфоза, XVI Ломоносовские чтения, стр. 7
Захарова Л.А. Влияние световых условий на развитие меланиновой пигментации в онтогенезе амфибий: автореф. дис. ... канд. биол. наук. М., 1983. 22 с. 3.
Молчанов А.Ю., Точило У.А., Виноградская И.С., Супруненко Е.А., Бурлакова О.В., Голиченков В.А. Репаративные процессы в пигментной системе в период личиночного развития бесхвостых амфибий, Сложные системы, № 3 (12), с. 47-62
Nieuwkoop P.D., Faber J. Normal table of Xenopus laevis (Daudin)// Amsterdam. 1956. P. 1-243
Okita K., Ichisaka T., Yamanaka S. Generation of germline-competent induced pluripotent stem cells, 2007 Nature 448, 313-317