ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ БАКТЕРИЙ РОДА BORDETELLA К ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ - Студенческий научный форум

VII Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2015

ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ БАКТЕРИЙ РОДА BORDETELLA К ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ

Семанин А.Г. 1, Суркова Е.И. 1, Скорик А.С. 1, Пирюшова А.Н. 1, Ломакин А.А. 1, Паладьева Д.Е. 1, Лягина Е.А. 1, Васильева Ю.Б. 1, Мастиленко А.В. 1, Сверкалова Д.Г. 1
1ФГБОУ ВПО "Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина"
 Комментарии
Текст работы размещён без изображений и формул.
Полная версия работы доступна во вкладке "Файлы работы" в формате PDF
В настоящее время бордетеллёз животных зарегистрирован и описан в Германии, США, Великобритании, Польше, Канаде, Венгрии, Норвегии, Японии, Мексике, Франции, Италии, Индии, Румынии, России, Украине, Беларуси. В зарубежной научной литературе описаны многочисленные вспышки бордетеллеза среди свиней, собак и кошек в странах Западной Европы и Соединенных Штатов Америки. Бордетеллёз животных широко распространен и в странах СНГ. Так, в Украине заболевание составляет от 11 до 16% в общей инфекционной патологии собак, в республике Беларусь 5-32% свиней. В случаях смешанной инфекции возбудитель выделяют более, чем от 75% животных. Часто заболевание протекает бессимптомно [1-7].

Возможность межвидовой передачи возбудителя среди животных подтверждают анализы генома, показывающие идентичность длинного фрагмента B.bronchiseptica.Подтверждающие генетические доказательства зоонозной передачи возбудителя в настоящее время отсутствуют.

Главными условиями успешной ликвидации вспышек бордетеллёза животных являются раннее выделение возбудителя и определение его чувствительности к антибиотикам, своевременно начатое лечение, комплексность и систематичность в проведении оздоровительных мероприятий, включающих общие и специальные ветеринарно-санитарные меры. Комплексный метод лечения должен включать антимикробную, симптоматическую, неспецифическую, стимулирующую, физио- и диетотерапию.

Антибиотикотерапия в начальной (катаральной) стадии инфекции профилактирует развитие или снижает тяжесть симптомов болезни, а в последующем - секундарных инфекций. Кроме того, она предотвращает возникновение бактерионосительства. Наибольший терапевтический эффект даёт комплексное применение антибиотиков с сульфаниламидами.

Антимикробные препараты вводят аэрозольно или интратрахеально. Это обеспечивает более направленное использование лекарств, таких как аминогликозиды или полимексин, которые плохо поглощаются слизистой поверхностью и токсичны при парентеральном применении. Аэрозольные обработки канамицином, гентамицином, полимексином и колистином улучшают клинические признаки и уменьшают количество бордетелл в трахее эксперементально зараженных собак. Антибиотики достигают терапевтической концентрации в дыхательных органах, плохо всасываются из респираторного тракта, исключая риск лекарственного токсикоза. Антимикробные аэрозоли можно использовать дополнительно к гидратам, так как они стимулируют перемещение слизистого экссудата вдоль бронхиального дерева.

Целью нашей работы явилось изучение антибиотикочувствительности лабораторных штаммов бактерий вида B.bronchiseptica.

Экспериментальную часть работы выполняли в лицензированной для работы с микроорганизмами 3–4 групп патогенности лаборатории (лицензия № 77.99.18001.Л.000089.06.11 от 23.06.2011.) с соблюдением санитарно-эпидемических правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III–IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней», СП 1.2.036-95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I–IV групп патогенности», методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I–IV групп патогенности» и МУК 4.2.2317-08 «Отбор, проверка и хранение производственных штаммов коклюшных, паракоклюшных и бронхисептикозных бактерий» (2008).

Для бактериологических исследований использовали жидкие и плотные питательные среды.

Были исследованы 57 антимикробных средств (мономицин, колистин, оксалиновая кислота, азитромицин, рокситромицин, доксициклин, левомицетин, хлорамфеникол, амикацин, неомицин, канамицин, гентамицин, сизомицин, фурадонин, цефоперазон, ципрофлоксацин, тетрациклин, бацитрацин, цефепин, бензилпенициллин, ампициллин, карбенициллин, амоксиклав, стрептомицин, ванкомицин, цефазолин, цефтазидим, цефотаксим, цефалотин, эритромицин, олеандомицин, фузидин, фурадипан, нистатин, клотримазол, флуконазол, амфотерин, рифампицин, линкомицин, амоксициллин, террамицин, оксациллин, клиндамицин, бициллин, дитрим, цефтриаксон, отибиовет, ампициллин, цефамандол, цефаклор, кларитромицин, левофлоксацин, энрофлоксацин, норфлоксацин, фурадон, фурагин, оптохин.

При проведении исследований пользовались МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам».

Определили уровень резистентности референс-штаммов B.bronchiseptica к химиотерапевтическим средствам. Полученные нами данные представлены в таблице.

Таблица - Чувствительность бактерий B.bronchiseptica (BBR) к химиотерапевтическим препаратам

№ п/п

Химиотерапевтический препарат

краткое название препарата

Содержание препарата в диске мкг

Диаметр зон задержки роста бордетелл (мм) на среде АГВ

Носоглоточный мазок

BBR 1

BBR 7

BBR 29

BBR 22-067

BBR 2

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

 

КАРБАПЕНЕМЫ

1

Имипенем / Циластатин

ИМ

10

15

17

15

17

17

-

 

ПРЕПАРАТЫ ГРУППЫ ПЕНИЦИЛЛИНА

2

Бензилпенициллин

ПЕН

10

0

0

0

0

0

-

3

Ампициллин

АМП

10

0

0

0

0

0

22

4

Карбенициллин

КАР

25

0

0

15

0

0

-

5

Амоксиклав

 

300

0

0

0

0

0

-

6

Амоксициллин

 

20

0

0

23

0

0

-

7

Бициллин

 

10

0

0

0

0

0

21

8

Оксациллин

   

0

0

0

0

0

-

 

АМИНОГЛИКОЗИДЫ

9

Амикацин

АН

30

16

15

18

15

16

-

10

Оксациллин

ОКС

10

0

0

0

0

0

-

11

Неомицин / Банеоцин

Нео

30

25

14

14

14

16

-

12

Мономицин

МОН

-

27

24

26

25

25

-

13

Канамицин

КАН

30

16

15

15

19

15

-

14

Гентамицин / Герамицин / Гентацикол

ГЕН

10

33

20

16

20

20

25

15

Сизомицин

-

10

14

11

17

14

12

-

16

Стрептомицин

Стр

30

0

0

10

9

0

15

17

Колистин

 

100

22

20

28

18

22

-

 

ПОЛИПЕПТИДЫ

18

Бацитрацин

БЦ

10

0

11

0

14

10

-

 

ГЛИКОПЕПТИДЫ

19

Ванкомицин

ВА

30

0

0

0

0

0

-

 

НИТРОФУРАНЫ

20

Фурадонин

ФД

300

15

15

15

12

15

-

21

Фуразолидон

 

300

0

0

0

0

0

-

22

Фурагин

 

300

0

0

0

0

0

-

 

ЦЕФАЛОСПОРИНЫ

23

Цефазолин

ЦЗ

30

0

0

0

0

0

9

24

Цефтазидим

 

30

0

0

0

0

0

-

25

Цефоперазон

ЦПР

75

17

36

25

19

15

30

26

Цефотаксим / Клафоран / Цефабол

ЦТК

30

15

0

0

0

0

-

27

Цефалотин

ЦФТ

30

0

0

20

0

0

16

28

Цефепим

ЦПМ

30

12

10

10

14

0

-

29

Цефтриаксон

 

-

0

0

0

0

0

17

30

Цефамандол

 

30

15

17

15

13

14

-

31

Цефаклор

 

30

20

18

20

16

17

-

 

ФТОРХИНОЛЫ

32

Ципрофлоксацин / Цифран

ЦИП / CFT

-

40

23

15

15

22

-

33

Офлоксацин

Оф

10

29

25

22

23

25

-

34

Левофлоксацин

 

5

18

16

17

15

13

-

35

Энрофлоксацин

 

5

20

18

16

15

15

-

36

Норфлоксацин

 

10

20

18

15

19

17

-

 

ХИНОЛЫ

37

Кислота оксалиновая

 

300

22

22

18

24

22

-

 

МАКРОЛИДЫ

38

Эритромицин

Эри

15

0

0

0

0

0

22

39

Азитромицин

АРН

15

20

17

15

20

25

-

40

Рокситромицин

РКМ

-

17

17

25

18

20

-

41

Олеандомицин

 

15

0

0

0

0

0

-

42

Кларитромицин

 

15

0

0

0

0

0

-

 

ФУЗИДИНЫ

43

Фузидин

ФУЗ

10

0

0

0

0

0

-

44

Фурадипан

 

15

0

0

0

0

0

-

 

ПРОТИВОГРИБКОВЫЕ

45

Нистатин

НИС

80

0

0

0

0

0

-

46

Итраконазол

ИКН

10

0

0

0

0

0

-

47

Клотримазол

 

25

0

0

0

0

0

-

48

Флуконазол

ФКН

40

0

0

0

10

0

-

49

Амфотерин В / Амбизом

АМВ

10

0

0

0

0

0

-

 

ПОЛИМИКСИНЫ

50

Римфапицин

РИФ

5

0

0

0

0

0

-

51

Колексин

 

-

22

22

23

23

21

-

 

ТЕТРАЦИКЛИНЫ

52

Тетрациклин

ТЕТ

30

17

0

11

16

10

-

53

Доксициклин

Док

30

22

25

21

22

23

-

54

Террамицин

   

20

21

19

22

20

-

ПРЕПАРАТЫ ГРУППЫ ЛЕВОМИЦЕТИНА

55

Левомицетин

ЛЕВ

10

25

25

25

25

25

27

56

Хлорамфеникол

 

300

22

17

25

17

28

-

ПРЕПАРАТЫ ГРУППЫ ЛИНКОМИЦИНА

57

Линкомицин

Лин

-

0

0

0

0

0

13

58

Клиндомицин

Кли

20

0

0

0

0

0

-

ПРОЧИЕ

59

Дитрим

 

-

0

0

0

0

0

20

60

Отибиовет

 

-

0

0

0

0

0

15

61

Оптохин

 

-

0

0

0

6

0

-

“0” отсутствие зоны задержки роста;

“-” исследование не проводилось.

Результаты данных исследований показали, что бордетеллы высокочувствительны (зона задержки роста 25 мм и более) к мономицину, колистину, цефопиразону, офлоксацину, азитромицину, рокситромицину, доксициклину, ципрофлоксацину, левомицетину и хлорамфениколу.

Исследуемые нами штаммы B.bronchisepticaчувствительны (зона задержки роста от 15 до 24 мм) к препаратам оксалиновой кислоте, карбенициллину, амоксициллину, амикацину, неомицину, канамицину, гентамицину, сизомицину, фурадонину, бацитроцину, цефоперазону, цефалотину, цефотаксиму, цефаклору, цефопиму, цефамандолу, левофлоскацину, энрофлоксацину, норфлоксацину, тетрациклину, имипенему, колексину, террамицину.

Исследуемые нами референс-штаммы B.bronchisepticaмалочувствительны (зона задержки роста 11-14 мм) к препарату бацитрацину и цефепину.

Нами зарегистрирован высокий уровень устойчивости бордетелл (зона задержки роста 10 мм и менее) к следующим препаратам: бензилпенициллину, ампициллину, амоксиклаву, бициллину, стрептомицину, ванкомицину, оксациллину, фуразолидону, фурагину, эритромицину, олеандомицину, кларитромицину, фузидину, фурадипану, нистатину, интраконазолу, клотримазолу, флуконазолу, амфотерину В, рифампицину, линкомицину, клиндамицину, цефазолину, цефтазидиму, цефотаксиму, цетриаксону, дитриму, отибиовету, оптохину. Следовательно, данные средства могут быть использованы в качестве селективных компонентов при разработке среды.

Антибиотикорезистентность штаммов B.bronchiseptica представлены на рисунках 1-4.

 

2

32

4

5

6

1

 

Рис. 1. Чувствительность референс-штамма B.bronchiseptica 7 на АГВ – среде:

№1 – цефазолин, №2 – гентамицин, №3 – нистатин, №4 – ципрофлоксацин, №5 – тетрациклин, №6 - цефалотин

 

1

2

3

4

5

6

 

Рис. 2. Чувствительность референс-штамма B.bronchiseptica 22-067 на АГВ – среде:

№1 – цефазолин, №2 – ципрофлоксацин, №3 – тетрациклин, №4 – цефалотин, №5 - нистатин

 

2

1

3

4

5

6

 

Рис. 3. Чувствительность референс-штамма B.bronchiseptica 214 на АГВ – среде:

№1 – цефазолин, №2 – цефалотин, №3 - ципрофлоксацин, №4 – цефотаксим, №5 - тетрациклин, №6 - гентамицин

 

1

2

3

4

5

6

 

Рис. 4. Чувствительность референс-штамма B.bronchiseptica 1 на АГВ – среде:

№1 – цефазолин, №2 – ципрофлоксацин, №3 - цефалотин -, №4 – гентамицин, №5 - тетрациклин, №6 - цефотаксим

Учитывая, показатели антибиотикочуствительности носоглоточной флоры (биоматериал от животных), для конструирования селективной добавки мы выбрали 4 антимикробных средства: цефтриаксон, цефазолин, цефатоксим, линкомицин.

Библиографический список

  1. Васильев Д.А., Сверкалова Д.Г., Никульшина Ю.Б., Стеанова Т.А., Семанин Е.А., Казакова А.С., Никулина Е.Н. Бордетеллёз кошек и собак. Материалы II-й Открытой Всероссийской конференции молодых ученых «Молодёжь и наука XXI века».- Ульяновск, 2007. – Ч.1. – С. 222-225.

  2. Васильев Д.А. Выделение и идентификация Bordetella bronchiseptica от животных // Васильев Д.А. Мастиленко А.В. Сверкалова Д.Г. Васильева Ю.Б. / Естественные и технические науки. – 2010. - № 5 – С. 233-235.Васильев В.Ю.

  3. Мастиленко А.В. Разработка идентификации B.bronchiseptica на основе иммунохимических и молекулярно-генетических методов / А.В. Масти-ленко // Автореф. дис. … канд. биол. наук. – Саратов, 2010. – 21 с.

  4. Никульшина Ю.Б., Сверкалова Д.Г., Васильев Д.А., Хлынов Д.Н. Выделение бактерий рода Bordetella bronchiseptica от домашних животных / Роль молодых ученых в развитии национального проекта «Развитие АПК». Москва. МГАУ. – 2007. – Ч 1. с. 281-284.

  5. Никульшина Ю.Б., Сверкалова Д.Г., Хлынов Д.Н., Никулина Е.Н. [и др.] Изучение возможности зооантропонозной передачи бордетеллёза // тр. Всероссийского совета молодых ученых аграрных образовательных и науч. учреждений. М.: Академия кадрового обеспечения АПК, 2008. Т.1. С. 152–155.

  6. Сверкалова Д.Г., Степанова Т.А., Василева Ю.Б., Казакова А.С., Никулина Е.Н. Бордетеллез кошек и собак // Материалы II-й Открытой Всероссийской конференции молодых ученых / Молодежь и наука XXI века. – Ульяновск, 2007. - Ч. 1. – С. 222-225.

  7. Семанина Е.Н. Разработка биопрепарата на основе выделенных и изученных бактериофагов для диагностики, лечения и профилактики бордетеллёзной инфекции животных и людей // Актуальные проблемы физической и функциональной электроники: материалы 12-й региональной научн. школы-семинара. Ульяновск, 2009. Т.2. С. 140–141.

Просмотров работы: 2640