VII Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2015

Кормовая мука является дополнительным ресурсом, прежде всего белкового питания, мясокостная мука обладает высокой пищевой ценностью и используются как в натуральном виде, так и в качестве премикса для изготовления комбикормов.

Это является ключевым фактором, ведущим к отставанию России по основным сельскохозяйственным показателям, касающимися животноводческой продукции, как в количественном, так и в качественном выражении. Основная часть несбалансированных кормов в России традиционно приходится на потребление крупного рогатого скота (КРС), свиней и других сельскохозяйственных животных. С этим, как, впрочем, и с иными факторами, связано негативное состояние данных секторов животноводства в России, сравнительно со странами с развитым сельским хозяйством.

Важным белковым компонентом комбикормов является мясокостная мука. Она производится в основном на мясокомбинатах, в технических цехах, а также птицефабриках.

Мясокостная мука является белковым кормом животного происхождения, предназначенным для домашней птицы, свиней. Её добавление в корма позволяет увеличить их продуктивность, обогащает протеинами, полезными минералами и витаминами, снижает затраты корма, поэтому важно следить за качеством мясокостной муки.

Кормовую муку животного происхождения вырабатывают в рассыпном и гранулированном виде, в соответствии с требованиями ГОСТ 17536-82«Мука кормовая животного происхождения» по технологическим инструкциям с соблюдением санитарных и ветеринарно-санитарных правил, утвержденных вустановленном порядке.

Для изготовления кормовой муки животного происхождения используют ветеринарные конфискаты, непищевое и малоценное в пищевом отношении сырье, получаемое при переработке всех видов убойного скота, птицы, кроликов и при производстве пищевой, технической и специальной продукции на мясокомбинатах, птицекомбинатах, мясоперерабатывающих и костеперерабатывающих заводах, птицефабриках и фабриках перопуховых изделий, а также трупы скота и птицы, допущенные ветеринарно-санитарным надзором для переработки на кормовую муку животного происхождения.

В зависимости от состава сырья кормовую муку животного происхождения подразделяют на следующие виды и сорта: мясокостную; мясную; кровяную; костную; из гидролизованного пера.

В зависимости от качества мясокостную муку подразделяют на три сорта: первый, второй и третий.

Мясокостная мука является наиболее доступным сырьем животного происхождения при производстве комбикормов.

С помощью мясокостной муки хорошего качества (1 и 2 сорт) достигается балансирование незаменимых аминокислот в комбикорме, кроме метионина и цистина. У правильно изготовленной и с низким содержанием склеропротеидов переваримость белка составляет 85-90%.

Является хорошим источником макроэлементов: кальция содержит 6,5-11,6%, фосфора 3,3-5,9%, натрия 1,5-1,6%, при этом доступного фосфора в среднем содержится 4,2% (в рыбной муке - 2,5%). Имеет ряд полезных биологически активных веществ и неидентифицированных факторов.

Мясокостная мука является хорошим источником витаминов В₁ особенно: рибофлавина, холина, никотиновой кислоты, кобаламина.

В ней содержатся некоторые не идентифицированные экстрактивные полезные факторы, такие как кишечный ростовой фактор из желудочно-кишечного тракта свиней, фактор Аккермана, ростовой фактор, присутствующий в золе.

В мясокостную муку вместе с мышечной тканью переходят некоторые соединения, играющие важную роль в обмене веществ. Это: аденозинтрифосфорная кислота (АТФ),креатин (в виде креатинфосфата), глутамин и глутаминовая кислота.

Ежедневное добавление в корм мясокостной муки в кормлении животных позволит:

• увеличить продуктивность,

• обогатить протеинами, аминокислотами, витаминами, минералами корма и увеличить их питательную ценность,

• нормализации обмена веществ,

• сократить затраты корма.

В зависимости от содержания белка, жира и минеральных солей мясокостную муку подразделяют на три сорта, остальные ее виды вырабатывают одного сорта. Данные, характеризующие химический состав, наличие примесей и патогенных микроорганизмов, приведены в табл.1.[33]

Таблица 1 - Качественные показатели мясокостной муки

Показатель	Мясокостная мука
	I	II	III
Массовая доля, %:
влаги, не более	9	10	10
протеина, не менее	50	42	30
жира, не более	13	18	20
Золы, не более	26	28	38
клетчатки, не более	2	2	2
антиокислителей, не более	0,02	0,02	0,02
Содержание посторонних примесей: металломагнитных, размером до 2 мм, г/т	150	200	200
минеральных, нерастворимых в соляной кислоте, %, не более	1,0	1,0	1,0
Наличие патогенных микроорганизмов	Не допускается
Общая токсичность	Не допускается

Микрофлора мясокостной муки

В мясокостной муке могут содержаться отдельные вредные продукты обмена веществ, которые остались в организме животного, использованного для ее производства.

Общая бактериальная обсемененность мясокостной муки, по данным сотрудников ВНИИКП на ряде комбикормовых предприятий, составляла в среднем 2397 тыс. микробных клеток в 1 г (максимальное количество - 6200 тыс. в 1г). Согласно проекту новых ветеринарных требований по безопасности кормов в муке мясокостной, мясной, кровяной, костной и из гидролизированного пера допускается наличие общей бактериальной обсемененности, выраженное микробным числом (ОМЧ), КОЕ/г - не более 5х10⁵. В отобранных образцах кишечную палочку содержали 60% от общего количества исследованных проб, в том числе с коли-титром 0,1 в 36,4% проб. По вышеуказанным требованиям патогенная эшерихия (E.coli) в кормах животного происхождения не допускается (при определении в 25 г продукта). Обсемененность стафилококками выявлена в 90,6% проб в количестве до 4 875 тыс. в 1 г . Из других видов бактерий в мясокостной муке встречаются Salmonella, Campylobacter, Listeria, Clostridia.

Бактерии очень быстро размножаются, за сутки один микроб при благоприятных условиях способен дать 1 600 000 себе подобных. Из бактерий наиболее неприхотливой является кишечная палочка (Е.соli). Для ее роста достаточно азотосодержащего соединения аммиака, а в качестве источника углерода кишечная палочка может использовать такие простые соединения, как этиловый спирт и уксусную кислоту.

Кишечная палочка относится к грамотрицательным бактериям (группа бактерий, окрашивающихся по Граму в розовый цвет) .

Непатогенные разновидности кишечной палочки - постоянные обитатели кишечника животных. Многие ее штаммы способны подавлять развитие и уничтожать различные патогенные и гнилостные микробы: стрептококки, стафилококки, сибиреязвенные и чумные палочки и другие. Некоторые разновидности кишечной палочки являются предшественниками витаминов группы В и К, синтезируют аминокислоты. В то же время определенные биотипы кишечной палочки могут явиться возбудителями острых кишечных инфекций и других заболеваний животных. Их относят к энтеропатогенным кишечным палочкам. Они продуцируют энтеротоксин. Наиболее часто поражается энтеротоксинами молодняк с/х животных и птицы. Колибактериоз поросят и цыплят является распрстраненным, обычным заболеванием. Кишечная палочка, как постоянный обитатель кишечного тракта, выделяется с калом (пометом) в окружающую среду, где она не размножается, но сохраняет свою жизнеспособность примерно такой же срок, как патогенные энтеробактерии: шигеллы, сальмонеллы. Во внешней среде (воде, почве) она выживает в зависимости от конкретных условий в течение нескольких месяцев. При нагревании во взвесях погибает при 55^оС через час, при 60^оС - через 15 мин., при 100^оС - мгновенно, в однопроцентных растворах фенола - через 10 мин., в растворах сулемы 1:1000 - через 2 минуты.

Стафилококки относятся к грамположительным бактериям (группа бактерий, окрашивающихся по Граму в темно-фиолетовый цвет). Стафилококки хорошо размножаются при комнатной температуре, слабо - при температуре 2-4^оС, оптимум рН - 6,8-7,5, минимум - 4,2. Они являются условно патогенными бактериями. Кроме развития стафилококковой инфекции, стафилококки восстанавливают нитраты до более вредных нитритов, активно гидролизуют белки и жиры. Стафилококки в основном являются причиной возникновения энероколитов, но S.аurus (золотистый) способен поражать любой орган или ткань, чем вызываются многие заболевания. Он относится к наиболее патогенным микробам. Для птиц S.aurus является основным штаммом. Мастит животных часто вызывается стафилококками.

Эти бактерии характеризуются сравнительно высокой для неспорообразующих бактерий резистентностью к высушиванию и замораживанию. Энтеротоксические стафилококки устойчивы к поваренной соли - их рост задерживается при концентрации ее в продукте свыше 12%. Нагревание при 70^оС вызывает гибель стафилококков через 1 час, при 80^оС - через 10 - 30 минут. Трех-пятипроцентная эмульсия карболовой кислоты убивает культуру за 3 - 15 минут, 1% формалина - за 1 час. Но образовавшийся стафилококковый энтеротоксин часовое кипячение разрушает не полностью. Кроме того, он не разрушается спиртом, формалином, кислотами и щелочами.

Среди патогенных бактерий наиболее распространенными являются сальмонеллы. Они относятся к грамотрицательным бактериям паратифозной группы, аэробы, не образуют спор. Большинство сальмонелл патогенны для с/х животных и птицы. Наиболее быстро сальмонеллы растут при 35 - 37^оС, оптимум рН - 6,0 - 7,5, минимум - 4,0 - 5,0. Они обладают сравнительно высокой степенью устойчивости к воздействию различных факторов окружающей среды (поваренную соль выносят до 30% в продукте). При 57^оС (в жидкой среде) большинство сальмонелл погибает в течение 1-3 мин, в то же время даже при очень низких температурах (-20^оС) они способны длительное время оставаться жизнеспособными, в замороженном мясе, например, сальмонеллы выживают от 6 до13 месяцев. Токсины сальмонелл и избыточное количество образующихся биологически активных веществ приводят к нарушению функционально адаптивных механизмов и обменных процессов на молекулярном и клеточном уровнях. При сальмонеллезе происходит нарушение проницаемости клеточных мембран, что способствует развитию интоксикации, диареи, обезвоживания и других симптомов. Поэтому по показателям безопасности сальмонеллы не допускаются (при исследовании 25 г корма).

Часто встречающийся вид сальмонелл - Salmonella pyllurum gallinarum вызывает одно из распространенных инфекционных заболеваний у птиц - пуллороз (бацилярный белый понос). Болезнь характеризуется поражением кишечника, паренхиматозных органов у цыплят и перерождением фолликулов яичников у взрослой птицы. Микроб хорошо растет на обычных средах, устойчив к воздействию факторов внешней среды, в курином помете сохраняется до 100 дней, в почве - более 400 дней. Однопроцентный раствор формалина убивает эти бактерии через 5 минут, 5-процентный раствор карболовой кислоты - через 30 секунд, марганцевокислый калий (1:20 000), 1% нафтализола и осветленный раствор хлорной извести, содержащей 0,5% активного хлора - через 5-20 минут.

В мясокостной муке и других кормовых средствах могут находиться стрептококки - грамположительные, факультативные анаэробы или аэробы. Наибольшее значение в патологии с/х животных и птицы имеют В-гемолитические стрептококки, которые являются возбудителями сепсиса, раневых инфекций кожи и других тканей, ревматизма и рожи (свиней). Стрептококки группы В являются возбудителями мастита у коров, групп В,С,Д и Е - возбудителями инфекций у животных разных видов. Оптимальная температура для роста патогенных стрептококков - 37^оС. Стрептококки разных групп, за исключением группы Д, погибают при нагревании до +56^оС в течение 30 минут. Сулема (1%) и фенол (5-процентный раствор) убивают стрептококки в течение 15 минут. Культура стрептококков сохраняет жизнеспособность в окружающей среде, но быстро утрачивает вирулентность.

В мясокостной муке и других кормовых средствах может выявляться синегнойная палочка (Psеudomonas aerugenosa), относящаяся к грамотрицательным подвижным аэробным бактериям. Для роста синегнойной палочки достаточно одного органического соединения, например цитрата (лимонной кислоты), как источника углерода и энергии. Оптимальная температура ее инкубации 37^оС (рН среды - 6,6-7,0), может расти и при 42^оС. По сравнению с другими грамотрицательными бактериями синегнойная палочка биологически малоактивна. Но она вырабатывает биологически активные вещества, которые можно считать факторами ее патогенности: экзотоксины А, В и С (обладают высокой токсичностью), энтеротоксин, лейкоцидии, гемолизины и другие. Синегнойная палочка устойчива к большинству антибиотиков. Наиболее активны в отношении ее аминогликозиды. Синегнойная палочка проявляет чувствительность к таким антисептикам, как 0,5% раствор хлорамина, 3% раствор перекиси водорода, 2% раствор фенола (карболовой кислоты).

В мясокостной муке, выработанной из трупов животных, может встретиться палочка ботулизма (Bacillaceae), так как она относится к споровым аэробам; после смерти животного споры в кишечнике прорастают, микроб размножается и проникает в мышцы. Бактерии семейства Васillасеае являются грамположительными. Большинство из них - мезофилы, с оптимальной температурой роста 30^оС, но есть термофильные, растущие при более низкой температуре. Одной из причин накопления в мясокостной муке токсиамина-гистамина (о нем рассматривалось ранее) является протеолиз с последующим декарбоксилированием аминокислот, происходящим под действием палочки ботулизма. Она вырабатывает ботулиновый энтеротоксин, который является наиболее сильным из энтеротоксинов. К нему чувствительны все сельскохозяйственные животные и птица. Но он малоустойчив к физическим и химическим воздействиям.

В мясокостной муке, равно как и в других кормовых средствах, могут находиться условно патогенные бактерии рода Proteus. Они относятся к грамположительным, не образующим спор, капсул и пигментов аэробным бактериям. Рroteus не требовательны к питательным субстратам, рост возможен при температуре 10-43^oC. Бактерии резистентны к многим антибиотикам, в частности к пеницилину и тетрациклину. Наибольшая чувствительность протея отмечается в отношении цефалоспонинов и аминогликозидов.

Таким образом, все вышеуказанные бактерии могут вызвать кормовые токсикоинфекции. Они возникают как при попадании с кормом токсинов, так и их продуцировании в организме животного. Определенное значение следует придавать третьему фактору - образованию в кормовых продуктах под действием микробных ферментов токсичных для животных аминов: тирамина, гистамина, кадаверина и путресцина при декарбоксилировании соответственно тирозина, гистидина, лизина и орнитина.

Под действием комплекса токсинов развиваются как местные изменения со стороны желудочно-кишечного тракта (воспалительный процесс, изменение синтеза различных биологических веществ, нарушение моторики желудочно-кишечного тракта, дисбактериоз кишечника), так и общетоксический синдром (повышение температуры организма, нарушение деятельности сердечно-сосудистой системы и нервной системы и др.). При инфицировании продуктов стафилококками при температуре 36-37^оС для накопления токсинов достаточно 4-5 часов. Этот процесс идет сравнительно интенсивно и при комнатной температуре.

Факторы риска при производстве мясной, мясокостной муки:

1. проблемы бактериального происхождения- гниение, бактериальные токсины, сальмонелла, клостридия и др.

1. проблемы вследствие окисления(прогоркания)- пероксиды, кетоны, альдегиды.

Для того, чтобы получить качественную мясную, мясокостную муку очень важно производить её из как можно более свежих отходов бойни, защищать от бактериального обсеменения и стабилизировать антиоксидантам

Исходя из выше изложенного целью наших исследований явилось изучение микробного пейзажа отобранных проб мясокостной муки.

Работу выполняли в бактериологической лаборатории Научно-исследовательского инновационного центра микробиологии и биотехнологии «Ульяновской ГСХА им. П.А.Столыпина»

Материалом для исследования послужили 9 проб мясокостной муки.

Исследования проводили согласно ГОСТ 17536-82 – Мука кормовая животного происхождения. Технические условия; ГОСТ 17681-82 – Мука животного происхождения. Методы испытания.; ГОСТ 25311-82 – Мука кормовая животного происхождения. Методы бактериологического анализа.

Пробы мясокостной муки отбирали от 3- партий (по 3 пробы от партии).

Масса точечной пробы была равна 100 г. Масса объединенной пробы была 500 г. Объединенную пробу тщательно перемешивали и делили пополам. Каждую часть упаковывали в стерильную стеклянную банку. Всего было отобрано девять проб.

Подготовка к анализу. Приготовление питательных сред для проведения микробиологических исследований проб мясокостной мукипроизводили по ГОСТ 995¹. ГОСТ 18963, ГОСТ 21237 и по методикам, утвержденным в установленном порядке.

Приготовление испытуемой взвеси и разведений. От общей пробы отвешивали на лабораторных весах навеску массой 5 г и помещали ее в стерильную колбу, содержащую 45 см³ стерильного физиологического раствора, и тщательно перемешивали в течение 30 мин, получая основное десятикратное разведение (Рис.1 а,б,в). После отстаивания в течение 10 минут из надосадочного слоя брали пипеткой 1 см³ жидкости, вносили в пробирку с 9 см³ стерильного физиологического раствора и получали последующее разведение. Из этой пробирки готовили последующие разведения (тысячекратное и т.д.).

а б

в

Рис. 1. - Подготовка проб к исследованию

а,б,в – этапы подготовки основных разведений проб для микробиологических исследований

Микробиологические исследования проводили по следующим показателям: определение КМАФАнМ, БГКП, бактерий из рода Salmonella, бактерий Listeriamonocytogenes, бактерий рода Proteus, присутствие анаэробов и плесневых грибов и дрожжей

Результаты проведенных исследований представлены в таблице 1.

Таблица1- Результаты проведенных микробиологических исследований

Наименование показателя	Исследуемые пробы
	1	2	3	4	5	6	7	8	9
КМАФАнМ, м.к./г	9,8 х 103	1,17 х 103	8,86 х 103	5,24 х 103	8,90 х 103	5,0 х 104	1,56 х 104	17 х 1034	2,8 х 104
Установленные требования к показателю	Не более 5х105
БГКП	0,1	-	-	-	-	-	-	-	-
Реакция агглютинации	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Биопроба	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Установленные требования к показателю	Не допускается
бактерии рода Salmonella	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Установленные требования к показателю	Не допускается
бактерии рода Proteus	-	-	-	-	-	-	-	-	-
	Не допускается
бактерии рода Listeria	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Установленные требования к показателю	Не допускается
Патогенные анаэробы	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Установленные требования к показателю	Не допускается
Рост на среде Сабуро	+	+	+	+	+	+	+	+	+
Установленные требования к показателю	Не нормируется

Из таблицы 1 видно, что исследуемые пробы мясокостной муки отвечали установленным требованиям к показателям.

Изучение биологических свойств выделенных микроорганизмов

В результате проведенных исследований были выделены 28 штаммов бактерий, которые идентифицировали по биологическим свойствам и результатам микроскопии.

Культуральные свойства выделенных микроорганизмов изучали на жидких и плотных питательных средах.

Рост бактерий в жидких питательных средах характеризовался следующими признаками:

- не встряхивая содержимое пробирки с посевом, вначале обращали внимание на поверхностный рост, который был в виде пристеночного кольца и/или пленки по всей поверхности сре­ды. По своему характеру пленка была нежная, ровная; по консистенции - хрупкая;

- отмечали также характер и степень помутнения среды, которое было у разных микроорганизмов - незначительное (в виде опалесценции), слабое, умеренное и интенсивное;

- изменение цвета питательной среды – питательная среда приобретала зеленоватый цвет.

- отдельные штаммы бактерий на жидких питательных средах (МПБ) образовывали на дне пробирки осадок, который выявляется при легком встряхивании. Он был незначительным, иногда обильным или крошковидным.

Рост бактерий на плотных питательных средах характеризовался следующими признаками:

- микроорганизмы на плотных питательных средах росли виде колоний различающихся по величине, форме, контуру края, рельефу, поверхности, цвету, структуре и консистенции.

• Величину колонии определяли ее диаметром. В зависимости от диаметра различали колонии точечные (диаметр меньше 1 мм), мелкие (диаметр 1-2 мм), средние (диаметр 2-4 мм) и крупные (диаметр 4-6 мм и более). Форма колонии бывает правильная — круглая, неправильная — амебовидная, ризоидная — корневидная, напоминающая переплетающиеся корни деревьев. Характер контура края определяли при просмотре колонии под микроскопом с малым увеличением. Различали ровные края в виде четко выраженной линии и неровные.

• Рельеф колонии характеризовался приподнятостью ее над поверхностью питательной среды и контуром формы в вертикальном разрезе. Определяли рельеф колонии невооруженным глазом при рассматривании сверху и сбоку.

Различали: 1) каплеобразные и куполообразные колонии правильной круглой формы с различно выраженной степенью выпуклости, которые в вертикальном разрезе представляют собой сегмент шара и отличаются только длиной радиуса. Колонии слабовыпуклые имеют большую длину радиуса; куполообразные — меньшую; 2) колонии плоско-выпуклые с плоским верхом, пологими или круто обрывающимися краями; имеют в вертикальном разрезе форму трапеции.

• Поверхность колонии изучали под микроскопом при малом увеличении. Поверхность колоний бывала матовая или блестящая с глянцем, сухая или влажная, гладкая или шероховатая. Гладкие колонии обозначают буквой S (smooth), шероховатые — буквой R (rough), что означает соответственно «гладкий» и «шероховатый».

• Цвет колонии определялся пигментом, который продуцирует культура микробов. В проходящем свете такие колонии в большей или меньшей степени прозрачны. Пигментообразующие виды микроорганизмов давали колонии различных цветов: белые, кремовые, желтые, золотисто-оранжевые.

• Консистенцию колонии, определяющую ее физическое состояние, исследовали посредством прикосновения или взятия из нее части материала бактериальной петлей.

После изучения культуральных свойств выделяемых бактерий на плотной питательной среде из отдельной колонии готовили мазок и окра­шивали по методу Грама. Проводили микроскопию.

Морфологию и тинкториальные свойства выделенных микроорганизмов изучали при окрашивании по методу Грамма. Этот метод позволил нам все исследуемые микроорганизмы разделить на две группы: грамположительные (Гр+) и грамотрицательные (Гр–).

Сахаролитические свойства изучали на средах с углеводами – средах Гиса путем посева исследуемых микроорганизмов на дифференцирующий ряд. В результате ферментации углеводов и образовании кислотных продуктов распада индикатор изменял свою окраску, в некоторых случаях образовывался еще и газ.

Действие протеолитических ферментов, т.е. способность микроорганизмов расщеплять белки, изучали на среде с желатином (МПЖ) производя посев чистой культуры бактерий уколом в столбик мясопептонного желатина. Посевы выдерживали при комнатной температуре (22⁰С) в течении 5 дней, при этом регистрировали наличие и характер разжижения.

Также определяли продукты более глубокого расщепления белка:

• индол определяли способом Мореля – с помощью полоски фильтровальной бумаги пропитанной насыщенным раствором щавелевой кислоты и при наличии индола она приобретала розовый цвет;

• аммиак – по посинению розовой лакмусовой бумаги;

• сероводород - с помощью полоски фильтровальной бумаги пропитанной, смоченной уксуснокислым свинцом. При взаимодействии сероводорода и уксуснокислого свинца бумага чернела за счет образования сернистого свинца.

Далее проводили тест на наличие каталазы. Каталаза разлагает перекись водорода на воду и молекулярный кислород. Для обнаружения каталазы на поверхность 24-часовой культуры на скошенном МПА наливали 1 мл 1%-го раствора перекиси водорода. Появление пузырьков газа при наклонном положении пробирки регистрировали как положительную реакцию. В качестве контроля параллельно исследовали культуру, заведомо содержащую каталазу.

У стафилококков определяли наличие плазмокоагулазы. Эта одна из наиболее надежных проб для выявления патогенности выше указанных микроорганизмов. Для ее постановки разливали по 1 мл стерильной плазмы, вносили бактериологической петлей культуру исследуемых бактерий и помещали в термостат. Проверяли результаты через 30 минут, 2, 4 часа и на другой день. При положительной реакции происходила коагуляция (свертывание плазмы). В нашем случае патогенных штаммов выделено не было.

Определяли гемолитическую способность. Для этого исследуемую культуру засевали на поверхность кровяного МПА. Для приготовления этой среды к 2%-му расплавленному и охлажденному до 45 °С МПА добавляли 5 % дефибринированную кровь барана. Культивирование проводили при 37 °С в течение 48 часов. Все исследуемые штаммы бактерий гемолитической активностью не обладали.

Подвижность исследуемых микроорганизмов определяли методом «висячей» капли и уколом в полужидкий агар;

Метод «висячей» капли. Для приготовле­ния этого препарата использовали специальные предметные стекла с углублением («лункой») в центре. Небольшую каплю исследуемого материала наносили на середину покровного стекла, края лунки предварительно смазывали вазелином. Предметное стекло накладывали на покровное так, чтобы капля находилась в центре лунки. Затем его осторожно переворачивали, чтобы капля свиса­ла в центре герметично закрытой полости лунки. В такой замкнутой полости капля защищена от высыхания

При микроскопии препаратов в проходящем свете для получения большей контрастности слегка затемняли поле зрения; конденсор при этом опускали, поступление света регулировали вогнутым зеркалом. Вна­чале пользовались малым увеличением (объектив х8), после того как обнаруживали край капли, устанавливали объектив иммерсионный. Микроорганизмы считали подвижными если бактерии могли пересекать все поле зрения и совершать круговые движения.

Укол в полужидкий агар.Для этого бактериологическойпетлей производили посев исследуемой культуры уколом до дна пробирки с полужидкой питательной средой. Подвижные культуры росли по всей питательной среде, образуя равномерное помутнение, а неподвижные - только по уколу в виде стержня, сохраняя прозрачность незасеянного участка среды.

Учет результатов предоставлен в таблицах 2-1 и 2-2.

Таблица 2 - Биохимические свойства выделенных микроорганизмов

Среды Гисса	Выделенные штаммы микроорганизмов
	1 проба				2 проба		3 проба			4 проба
	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10		11	12		13	14
Клиглера	+	-	+	+	-	+	+	+	+	-		+	+		+	-
Симманса	+	-	+	+	-	+	+	-	+	-		-	-		+	-
с мальтозой	+	+	+	-	-	+	-	+	-	+		+	-		+	-
с лактозой	+	+	+	-	-	+	сл.+	+	сл.+	-		+	-		-	-
с сахарозой	+	+	+	-	-	+	-	+	-	+		+	-		+	-
с сорбитом	-	+	-	-	-	-	-	-	-	+		-	-		+	-
с дульцитом	-	-	-	+	+	-	-	-	-	+		-	+		+	-
с маннитом	+	+	+	-	-	+	cл.+	+	cл.+	+		+	-		+	-
с глюкозой	-	+	-	-	-	-	+	+	-	+		-	-		+	+
с маннозой	+	+	+	+	+	+	-	-	+	-		+	+		-	+
с арабинозой	+	+	+	+	-	+	+	+	+	+		-	+		-	+
индол	-	-	-	+	-	-	-	-	-		-	-	+	+		-
каталазы	+	+	+	-	+	+	-	+	-		+	+	-	+		+
подвижность	-	+	-	-	+	-	-	-	-		-	-	-	-		-
по Грамму	-	-	+	+	-	+	+	+	+		-	+	+	+		+
	S.aureus	E.coli	Род Bacillus	Род Bacillus	Род Bacillus	S.aureus	род Streptococcus	S.aureus	Род Bacillus		S.albus	S.aureus	S.aureus	Род Bacillus		Род Bacillus

Таблица 13-2

Биохимические свойства выделенных микроорганизмов

Среды Гисса

Выделенные штаммы микроорганизмов

5 проба

6 проба

7 проба

8 проба

9 проба

15

16

17

18

19

20

21

22

23

24

25

26

27

28

Клиглера

+

+

+

-

+

+

+

+

+

-

+

+

+

-

Симманса

+

+

-

-

+

-

+

-

+

-

-

-

-

-

с мальтозой

+

+

+

-

+

+

-

+

-

+

+

-

+

-

с лактозой

+

+

+

-

+

+

+

+

+

-

+

-

-

-

с сахарозой

+

+

+

-

+

+

-

+

-

+

+

-

+

-

с сорбитом

+

+

-

-

+

-

+

+

+

+

+

+

+

-

с дульцитом

-

-

+

+

-

+

+

-

+

+

-

-

-

+

с маннитом

+

+

+

-

+

+

cл.+

+

cл.+

+

+

-

+

-

с глюкозой

+

+

-

-

+

-

+

+

+

+

+

+

+

+

с маннозой

+

+

-

+

+

+

+

-

+

+

+

+

-

+

с арабинозой

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

-

+

-

+

Образование индола

_

_

_

_

_

_

_

_

_

_

_

+

+

_

каталазы

+

+

+

+

+

+

-

+

-

+

+

-

+

+

подвижности

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

+

-

по Грамму

+

-

+

+

-

+

+

+

+

-

+

+

+

+

S.aureus

S.aureus

Род Bacillus

Род Pseudomonas

S.aureus

Род Bacillus

S.aureus

S.albus

Род Bacillus

Род Bacillus

S.aureus

S.albus

Род Bacillus

S.aureus

Идентификацию выделенных микроорганизмов проводила в соответствии с тестами, изложенными в определителе бактерий Д. Х.Берги “Руководство по систематике бактерий”.

Результаты проведенных исследований мясокостной муки по определению микробного пейзажа представлены в таблице 14:

Таблица -14

Микробный пейзаж исследуемых проб

Выделенная культура	№ пробы
	1	2	3	4	5	6	7	8	9
Staphilococcus aureus	+	+	+	+ (3 штамма)	+ (2 штамма	+	+ (2 штамма)	+(2 штамма)	+
Бактерии рода Pseudomonas					+
Бактерии рода Streptococcus			+
Escherichia coli	+
Бактерии рода Bacillus	+ (2 штамма)	+	+	+ (2 штамма)	+	+	+	+	+
Всего по каждой пробе	4	2	3	5	4	2	3	3	2
Выделено штаммов со всех проб	28

Из таблицы 14 видно, что в результате проведенных исследований были выделены 28 штаммов бактерий.

Из пробы №1 выделены один штамм бактерий рода Staphilococcus, Escherichia coli и 2 штаммабактерий рода Bacillus. Из пробы №2 по одному штамму - бактерий рода Staphilococcus и рода Bacillus. Из пробы №3 по одному штамму - бактерий рода Staphilococcus, рода Streptococcus и рода Bacillus. Из пробы №4 – 3 штамма бактерий рода Staphilococcus и 2 штамма бактерий рода Bacillus. Из пробы №5 – 2 штамма бактерий рода Staphilococcus, по одному штамму Pseudomonas aeruginosa и бактерий рода Bacillus. Из пробы №6 по одному штамму - бактерий рода Staphilococcus и рода Bacillus. Из пробы №7 - 2 штамма бактерий рода Staphilococcus и 1 штамм бактерий рода Bacillus. Из пробы №8 - 2 штамма бактерий рода Staphilococcus и 1 штамм бактерий рода Bacillus. Из пробы №9 по одному штамму - бактерий рода Staphilococcus и рода Bacillus.

Выводы

1. Для проведения исследований были отобраны девять проб мясокостной муки.

2. Количество мезофильных аэробных и факультативно- анаэробных микроорганизмов в исследуемых пробах мясокостной муки находилось в пределах от 1,17 х 10³ до 5,0 х 10⁴ м.к./г, что не превышает установленные требования к показателю и косвенно свидетельствует о высоком качестве выпускаемого корма.

3. Исследуемые пробы мясокостной муки по наличию санитарно-показательных микроорганизмов имели следующие показатели: в 1 пробе были обнаружены БГКП в титре 0,1 но они не обладали патогенными свойствами; бактерии рода Salmonella, Listeria и патогенные анаэробы (Clostridiumperfringens и Clostridiumbotulinum) отсутствовали во всех исследуемых пробах.

4. Исследуемые пробы мясокостной муки имели следующий микробный пейзаж: проба - №1 по одному штамму бактерий выделены: бактерии рода Staphilococcus, Escherichia coliи 2 штаммарода Bacillus; проба №2 по одному штамму - бактерии рода Staphilococcus и рода Bacillus; проба №3 по одному штамму - бактерии рода Staphilococcus, бактерии рода Streptococcus и рода Bacillus; проба №4 – 3 штамма бактерии рода Staphilococcus и 2 штамма рода Bacillus; проба №5 – 2 штамма бактерий рода Staphilococcus, по одному штамму Pseudomonas aeruginosa и рода Bacillus; проба №6 по одному штамму – бактерий рода Staphilococcus и рода Bacillus; проба №7 - 2 штамма бактерий рода Staphilococcus и 1 штамм рода Bacillus; проба №8 - 2 штамма бактерий рода Staphilococcus и 1 штамм рода Bacillus; проба №9 по одному штамму - бактерий рода Staphilococcus и рода Bacillus .

5. Все исследуемые пробы мясокостной муки содержали дрожжи и плесневые грибы.

6. Исследуемые пробы мясокостной муки является качественным продуктом и отвечает санитарным требованиям предъявляемым к данному виду продукции.

Библиографический список

1. ГОСТ 17536-82 – Мука кормовая животного происхождения. Технические условия.

2. ГОСТ 17681-82 – Мука животного происхождения. Методы испытания.

3. ГОСТ 25311-82 – Мука кормовая животного происхождения. Методы бактериологического анализа.

4. Определитель бактерий Берджи В 2-х томах. Т.1 Пер.с англ./ Под ред. Дж.Хоуолта, Н.Крига, П.Снита, Дж.Стейли, С.Уилльямса. – М. Мир, 1997. – 432с.

5. Микробиология : учебник для студ.биол.специальностей вузов/ М.В.Гусев, Л.А.Минеева. – 8-е изд., стер. – М.: Издательский центр «Академия». 2008. – 464с.

6. Практикум по микробиологии: Учеб.пособие для студ. высш. учеб. заведений / А.И.Нетрусов, М.А.Егорова, Л.М.Захарчук и др.; Под ред. А.И.Нетрусова. – М.: Издательский центр «Академия», 2005. – 608с.

7. Серегин И.Г., Никитченко В.Е., Никитченко Д.В. Ветсанэкспертиза убоя животных и птицы: Учеб.пособие. – М.: РУДН, 2010. -381с.

8. Серегин И.Г., Уша Б.В. Ветеринарный надзор за животными и животноводческой продукцией в условиях чрезвычайных ситуаций: Учебное пособие. – М.: Изд-во МГУБП, 2010.- 320с.

9. Искаков М.М., Искаков Р.М. Ветеринарные конфискаты и их переработка. Учебное пособие. – Алматы, 2011. – с. 101.

1

 

22

 

Код для цитирования: Скопировать