VII Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2015

Микологический анализ некоторых видов грибов представляет собой определенные трудности, связанные с точным определением вида. Группой исследователей-микологов была предложена методика использования цветных химических реакций для диагностики отдельных видов. Методика производства цветных реакций на грибах проста, общедоступна и заключается в следующем.

Химические цветные реакции — один из методов идентификации грибов, прежде всего макромицетов.

Впервые химический метод был применён в 1866 году финским ботаником Вильямом Нюландером (1822—1899) для систематики лишайников.

Позже Мюллер изучал действие химических реактивов на полипоровые грибы и обнаружил появление фиолетовой окраски у Hapalopilus nidulans, Харлей открыл исчезновение фиолетовой окраски мякоти груздя чёрного под действием щёлочи. Наиболее полные данные о химических цветовых реакциях баздиальных грибов содержатся в работах Кюнера и Романьези, Зингера (1975), Майкснера, Вассера. Для лишайников химический метод углублённо изучался в 1930-х годах японским микологом Я. Асахиной^[1] и подробно описан А.Н. Окснером.^[2]

Материалы и реактивы: В качестве реактивов для производства цветных реакций берутся: Щелочи: едкий натр и едкое кали (10% раствор), аммиак (25 % раствор). Кислоты: серная кислота (уд. вес 1,84), соляная кислота (уд. вес 1,19) и азотная кислота (уд. вес 1,40). Соли железа: хлорное железо (5% раствор) и железный купорос (10% раствор).

Органические реактивы: формалин с серной кислотой (1:1), ванилин с серной кислотой (ванилина 0,25 г, серной кислоты 2 мл, воды 2 мл), спиртовой раствор гваяковой смолы (1:10), парафенилендиамин (раствор в воде 1:10).

Методика выполнения анализа

Грибы перед исследованием должны быть промыты водой от грязи.

2. Образцы для исследования должны быть доброкачественными и неиспорченными. Разложение грибов может вести к добавочным цветным реакциям, которые затемняют основную реакцию. В частности, личинки червей дают цветную реакцию с серной кислотой.

3. Нарезанные секторами кусочки шляпки с частью ножки гриба подвергаются воздействию перечисленных реактивов, несколько капель, которых наносится на поверхность шляпки (кутикулу) и на свежую поверхность разреза. Затем непосредственно в течение нескольких минут наблюдается появление или отсутствие той или иной цветной реакции.

Результаты исследований

Настоящий опенок дает выраженные цветные реакции лишь при воздействии серной кислоты (слабо лиловая окраска или без особых изменений и азотной кислоты (оранжево-красная окраска шляпки и ножки), с остальными реактивами - никаких характерных изменений не дает. Летний опенок в свежем виде еще менее реактивен, чем предыдущий вид.

Ложные опята (Hypholoma и Cortinarius) дают с железным купоросом и хлорным железом довольно характерные реакции (оливковое или зеленоватое окрашивание), которые представляют возможность сравнительно легко отличить настоящий опенок от ложных опят как в свежем виде и довольно значительную реактивность грибов со щелочами (появление красновато-бурых, оранжево-рыжих и желтых тонов в окраске тканей).

Свинушка свежая даст фиолетовую окраску от аммиака.

Свинушка в свежем и соленом виде от ванилинового реактива окрашивается в мутно розовый цвет.

Кортинариус – бурая окраска от аммиака.

Кортинариус от ванилинового реактива остается без изменения

Гваяковая смола в свинушке вызывает появление сине-зеленой окраски.

Ядовитые мухоморы (зеленая бледная поганка, порфировый, красный и пантерный) дают более или менее выраженные реакции с серной кислотой: у бледной поганки появляется лиловатая окраска пластинок и мякоти, у порфирового мухомора - слабо лиловое окрашивание шляпки, у красного - слабое покраснение пластинок, у пантерного - коричневато-фиолетовая окраска.

Бледная поганка желтая с серной кислотой не дает цветных реакций, но с азотной получается зеленовато-коричневая окраска пластинок и кольца, с фенолом - серовато-лиловое окрашивание мякоти и пластинок.

Съедобные виды мухоморов дают реакцию с фенолом (поплавок - красно-бурое окрашивание), с серной кислотой (поплавок слабое порозовение, краснеющий мухомор - желтоватый оттенок) и с азотной кислотой (краснеющий мухомор - лимонный оттенок).

Зеленая сыроежка инертна по отношению к кислотам и в то же время реагирует с фенолом (оранжевое окрашивание).

Шампиньон дает малохарактерные и не постоянные реакции с серной кислотой - порозовение шляпки или отсутствие характерных изменений, с гваяковой смолой - побурение. Эти реакции ядовитых аманит и их «двойников» позволяют все же отличать их между собой, например, в случае наличия только остатков грибов, как это нередко имеет место при грибных отравлениях.

Цветные реакции ткани грибов, не являются только реакциями грибных пигментов. Наряду с последними, в некоторых цветных реакциях вступают во взаимодействие также белки и дубильные вещества, находящиеся в грибах. Так, например, желтое окрашивание ткани грибов от действия азотной кислоты представляет собой общеизвестную ксантопротеиновую реакцию, даваемую тирозином, триптофаном и в более слабой степени - фенилаланином. Окраска фиолетовых и лиловых тонов, наблюдающаяся у некоторых грибов от действия серной кислоты, возможно относится за счет присутствия триптофана или углеводов. Зеленая или оливковая окраска грибной ткани от действия серного железа относится за счет содержания в некоторых грибах дубильных веществ

Флюоресцентный анализ при диагностике съедобных и ядовитых грибов.

Для целей микологической диагностики возможно также применение флюоресцентного метода исследования.

Наблюдают характер свечения целых грибов и их отдельных анатомических частей (шляпка, ткань, пластинки, ножка) под действием ультрафиолетовых лучей, профильтрованных через фильтр Вуда.

Грибы исследуют в свежем и соленом виде.

Настоящий опенок в свежем виде легко отличается от ложных опят, благодаря наличию довольно интенсивного канареечно желтого свечения, наблюдаемого у последних. Летний опенок отличается светло желтым свечением. Лишь для кортинариуса не было отмечено отличительных свечений.

В фильтрованном ультрафиолетовом свете грибы легко отличаются друг от друга по характеру свечения: желтое и светло-желтое у шампиньона, коричневое, а на разрезе голубоватое - у мухомора и ярко желтое - у дождевика.

Взрослые экземпляры шампиньонов также отличаются светло желтым свечением ткани и пластинок от бледной поганки (желтой), красного и краснеющего мухомора и поплавка, имевших голубоватое, слабо фиолетовое свечение.

Почти у всех исследованных сыроежек наблюдается характерное канареечно-желтое свечение, иногда весьма яркое. Некоторые сыроежки (например, зеленая, желтая и др.) могут служить поводом для смешения их с разновидностями бледной поганки.

Экспериментальные данные показали, что в бледной поганке, красном мухоморе, краснеющем мухоморе и поплавке такого свечения не отмечается.

Без применения флюоресцентного анализа сыроежки с оборванными ножками (вида virescens, livida и др.) должны были бы из осторожности браковаться или подвергаться квалифицированному микологическому контролю, который далеко не всегда бывает в распоряжении санитарного надзора.

В случае грибных отравлений, когда приходится иметь дело лишь с грибными отходами в виде очисток, кусочков грибной ткани флюоресцентный метод может оказать, как видно из выше изложенного, диагностическую помощь. Цветные химические реакции, происходящие в результате воздействия некоторых реактивов на ткань грибов, а также флюоресцентный анализ не могут, конечно, заменить собой микологического определения, однако как дополнительные методы микологической диагностики могут оказать значительную пользу в особых случаях.

Бактериологическое исследование грибов.

Бактериологическое исследование грибов производится сравнительно редко и только в тех случаях, когда посылается образец для исследования по поводу имевшего места отравления, где имеются достаточные основания и данные полагать о наличии бактериальной этиологии данной вспышки отравления (обстоятельства дела, съедобные грибы и соответствующая клиническая картина с повышенной температурой).

1. Змитрович И. В. Семейства ателиевые и амилокортициевые. — М. — СПб.: Товарищество научных изданий КМК, 2008. — С. 24—25. — ISBN 978-5-87317-561-1^>

2. Гистологические методы исследования [Электронный ресурс]: http://www.vesta-med.ru/component/option,com_mtree/task,viewlink/link_id,356/Itemid,91

3. Гусев М.В., Минеева Л.А. Мир прокариот [Электронный ресурс]: http://evolution.powernet.ru/library/micro/04.html

4. Клеточные мембраны [Электронный ресурс]: http://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%9C%D0%B5%D0%BC%D0%B1%D1%80%D0%B0%D0%BD%D1%8B

5. Пластиды [Электронный ресурс]: http://biologis.ru/plastidy

6. Справочник "Лабораторные методы исследования в клинике" под ред. проф. В.В. Меньшикова. – М.: Медицина, 1987.

7. Справочник по клиническим лабораторным методам исследования под ред. Е. А. Кост. – М.: Медицина, 1975.

8. Цитохимические методы исследования [Электронный ресурс]: http://www.clinlab.info/Cytochemical_research.shtml

Код для цитирования: Скопировать