VII Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2015

Бруцеллез (Brucellosis) — инфекционная, хронически протекающая болезнь домашних, некоторые виды диких животных и человека, характеризующаяся поражением многих систем жизнеобеспечения, нарушением функций сосудистой, пищеварительной, мочеполовой систем и системы воспроизводства.

Возбудителем бруцеллеза крупного рогатого скота является микроорганизм Brucellaabortus.

У коров основным клиническим признаком бруцеллеза является аборт и реже рождение нежизнеспособного приплода. Аборт чаще всего происходит на 5 – 8-м месяце. За 1 – 2 дня до наступления аборта у коров отмечается припухание наружных половых органов, выделение из влагалища бесцветной или буроватой жидкости и набухание вымени. После аборта происходит задержка последа и развивается эндометрит, сопровождающийся обильными слизисто-гнойными или гнойно-фибринозными выделениями.

Бруцеллез распространен в регионах с развитым животноводством. В России бруцеллез встречается в Краснодарском и Ставропольском краях, на Южном Урале и в других областях. Республика Башкортостан считается благополучной по данному заболеванию.

Диагноз на бруцеллез крупного рогатого скота устанавливают комплексно на основании анализа эпизоотологических данных, клинических признаков, лабораторных исследований.

Бактериологическая диагностика бруцеллеза предусматривает бактериоскопию мазков из патологического материала и при необходимости постановку биопробы на морских свинках. Бактериоскопия мазков-отпечатков, окрашенных по Граму и специальными методами (по Козловскому, Шуляку—Шину), имеет ориентировочное значение. Выделение культуры бруцелл при посеве биоматериала на специальные питательные среды и положительная биопроба на морских свинках имеют решающее значение при постановке бактериологического диагноза на бруцеллез.

Для массовых профилактических и диагностических прижизненных исследований скота на бруцеллез широко используют реакцию агглютинации в пробирках (РА), реакцию связывания комплемента (РСК) или реакцию длительного связывания комплемента (РДСК), пластинчатую реакцию агглютинации – роз-бенгал проба (РБП), кольцевую реакцию с молоком (КР), реакцию иммунодиффузии с О-ПС антигеном (РИД).

В период учебной практики я проводила исследование сыворотки крови крупного рогатого скота на бруцеллез под руководством ведущего ветеринарного врача серологического отдела БашНПВЛ. Применяли следующие серологические реакции: РБП, РА и РСК.

Роз-бенгал проба. Реакцию проводили на чистых сухих эмалированных диагностических пластинах с лунками. На бортиках пластинки против каждой лунки записывали номер исследуемой сыворотки. Исследуемые сыворотки крови в дозе 0,03 мл вносили на дно лунки при помощи микропипетки. В каждую лунку рядом с сывороткой при помощи микропипетки вносили 0,03 мл (две капли) антигена. Затем антиген в каждой лунке тщательно смешивали с сывороткой.

В начале работы поставили контроль антигена с негативной и позитивной бруцеллезной сыворотками в тех же дозах.

Учет результатов реакции проводили визуально в течение 4 минут после смешивания сывороток с антигеном при слегка наклонном положении пластинки.

Реакцию считают положительной при наличии выраженной агглютинации окрашенных бруцелл антигена в виде мелких или крупных хлопьев розового цвета, выделяющихся на белом фоне лунки. Реакцию считают отрицательной при отсутствии агглютинации (смесь гомогенна, равномерно окрашена). При нечетко выраженной агглютинации проводят повторное исследование данной сыворотки и по его результатам дают окончательную оценку реакции (положительная или отрицательная).

Во всех опытных лунках агглютинация отсутствовала, следовательно, все исследуемые пробы сыворотки крови крупного рогатого скота дали отрицательный результат.

Реакция агглютинации. Реакцию агглютинации проводят в серологических пробирках в объеме 1 мл в четырех разведениях: 1:50, 1:100, 1:200 и 1:400. При массовых исследованиях допускается постановка реакции в первых двух разведениях.

Сыворотки крупного рогатого скота разливали групповыми дозаторами Флоринского в две пробирки в дозах 0,02 и 0,01 мл. Затем в каждую пробирку добавляли по 1,0 мл антигена, разведенного соответствующим раствором хлорида натрия 1:20. При этом разведения сывороток стали, соответственно, 1:50 и 1:100. Одновременно с испытуемыми сыворотками ставили контроли с негативной и позитивной бруцеллезной сыворотками в таких же разведениях. После добавления к испытуемым и контрольным сывороткам антигена штативы с пробирками встряхивали для смешивания компонентов и поместили в термостат при 37°С на 16 - 20 ч, затем выдерживали при комнатной температуре в течение 1 ч.

Результаты реакции учитывают визуально, определяя степень просветления жидкости, внешний вид агглютината (при его наличии) или антигена на дне пробирки до и затем, после легкого встряхивания, оценивают в крестах.

Во всех пробирках просветления жидкости и образования «зонтика» не наступило. Следовательно, все исследуемые пробы сыворотки крови крупного рогатого скота дали отрицательный результат.

Реакция связывания комплемента. Реакцию проводили в одной пробирке в разведении сыворотки 1:5 с антигеном. Необходимые разведения сывороток готовили следующим образом: к 0,05 мл испытуемой сыворотки добавляли 0,2 мл физиологического раствора (разведение 1:5). Сыворотку, физиологический раствор и другие компоненты реакции вносили при помощи аппарата Флоренского.

Реакцию связывания комплемента учитывают визуально. При постановке реакции в одной пробирке (при массовом исследовании) учет проводят один раз - сразу после извлечения штативов из водяной бани. Результаты реакции оценивают в крестах.

Во всех пробирках осадок отсутствовал, жидкость была интенсивно окрашена. Следовательно, все исследуемые пробы сыворотки крови крупного рогатого скота дали отрицательный результат.

Проведенные плановые серологические исследования позволяют своевременно выявить больных бруцеллезом животных и являются главным профилактическим мероприятием против бруцеллеза.

 

Код для цитирования: Скопировать