VI Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2014

Введение. При микроскопическом исследовании лимфоидных тканей и органов большое значение имеют техника взятия материала и проведение последующих этапов гистологической проводки. Имеются некоторые особенности при изготовлении препаратов лимфоидных органов из-за их особой тканевой структуры.

Цель исследования: определить особенности проведения этапов гистологической проводки при изготовлении препаратов селезенки крыс.

Материалы и методы. Изучению подверглись6 половозрелых белых крыс-самцов, масса которых составила 170 – 250 г. Экспериментальные животные поделены на 2 группы. В 1-ой группе селезенка крыс удаляли и резали на кусочки диаметром до 1 см. У крыс 2-ой группы спленэктомия выполнялась с применением специального приема – иссечение органа с захватыванием капсулы.

Фиксация проводилась в формалине без предварительного промывания в воде. Объем фиксирующей жидкости превосходил объем фиксирующего материала в 30 раз при комнатной температуре, в течение 24 часов.

Промывка материала проводилась под проточной водой в течение 8 часов. Целую, инкапсулированную селезенку и селезенку, порезанную кусочками, помещали в первую емкость (70% спирт) на 24 часа; затем – во 2-ю (96% спирт) на 24 часа; далее – в 3-ю (96% спирт) на 24 часа и в 4-ю (100% спирт) – на 2 часа.

Фиксированные селезенки животных 2-ой группы только после обезвоживания разрезали на кусочки 0,5 – 1 см и помещали в хлороформ на 6 часов, а кусочки селезенки животных 1-ой группы, разрезанные перед фиксацией, помещали в ксилол на 3 часа. Для постепенного и лучшего пропитывания парафином кусочки селезенки из хлороформа переносили в расплавленную смесь хлороформа с парафином и оставляли в термостате при температуре 38 градусов на 2 часа. При работе с ксилолом кусочки органов переносили в смесь ксилола с парафином на 2 часа при температуре 38 градусов. Смесь хлороформа/ксилола с парафином готовили из равных объемных частей просветлителя и парафина, для чего парафин предварительно растапливали.

Дальше материал дважды заливали разным по структуре парафином. Первая заливка произведена Парафином-1 (грубокристаллическая белая масса) на 2 часа в термостате при температуре 64 градуса. Вторая заливка выполнялась Парафином-2 (полупрозрачная аморфная гомогенная масса) на 2 часа при температуре в термостате 64 градуса. Работа в двух порциях парафина обусловлена необходимостью тщательного освобождения объекта от хлороформа/ксилола, примесь которого изменяет пластичность парафина, делая его крошковатым.

Для проводки селезенки крыс 2-ой группы использовали определенный метод заливки: побывавшие кусочки во втором парафине помещали в формочки, предварительно смазанные глицерином и разогретые на спиртовке до температуры 60 – 70 градусов. Исследуемый материал из второго парафина, не вынимая из термостата, горячим анатомическим пинцетом быстро перекладывали в формочку и заливали чистым Парафином-2 в расплавленном состоянии. Толщина слоя парафина над уровнем кусочков составила 1 см. Когда парафин достаточно затвердевал, его извлекали из формочки, подрезая края и формируя блоки.

Парафиновые блоки наклеивали на деревянные колодки той стороной, на которой больше парафина с помощью горячего шпателя. На следующем этапе шаг микротома устанавливался на отметке 5 мкм. Для того чтобы срезы прочно пристали к предметному стеклу и не отклеились во время окраски, стекла обезжиривались и покрывались адгезивной средой. Окраска препаратов проводилась обычным способом гематоксилин-эозином. Различий в проведении этого этапа между 2-мя группами не было.

Результаты и их обсуждение. Микроскопирование полученных препаратов установило следующее. В препаратах 1-ой группы ткань органа имела рваные дефекты, границы белой пульпы селезенки четко не определялись. Препараты селезенки крыс 2-ой группы были практически без разрывов, достаточно хорошо определялась граница между белой и красной пульпой. Полученные результаты обусловлены следующим:

1. Перед фиксацией органы крыс 1-ой группы сразу разрезались на мелкие кусочки, а селезенки крыс 2-ой группы подвергались гистологической проводке инкапсулированными. Проникновение фиксатора через капсулу происходит бережнее в сравнении с разрезанным материалом и обеспечивает сохранность структур органа.

2. Заливка материала № 2 в окончательный парафин произведена щадящим способом – в формочку, предварительно смазанную глицерином.

3. Использование хлороформа, хотя и более длительное по времени, более бережно удаляет спирт и растворяет парафин, минимально изменяя структуру ткани.

Выводы. Полученные результаты позволяют сделать заключение о том, что изготовление препаратов лимфоидных органов, в частности селезенки, требует соблюдения некоторых особенных условий и аналогов сред, для того чтобы добиться максимального результата. Наилучшие результаты продемонстрировал специальный метод заливки: кусочки ткани селезенки следует помещать в парафиновые формочки, предварительно смазанные глицерином и разогретые на спиртовке до температуры 60 – 70 градусов. Исследуемый материал, не вынимая из термостата, горячим анатомическим пинцетом следует переложить в формочку и залить чистым парафином в расплавленном состоянии. При затвердевании парафина его следует извлечь из формочки, подрезая края и формируя блоки.