РАЗРАБОТКА КОМБИНИРОВАННОГО ГИПОГЛИКЕМИЧЕСКОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА - Студенческий научный форум

VI Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2014

РАЗРАБОТКА КОМБИНИРОВАННОГО ГИПОГЛИКЕМИЧЕСКОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА

Качмазова Б.А. 1, Кисиева М.Т. 2
1Северо-Осетинская Государственная Медицинская Академия
2Северо Осетинская государственная медицинская академия. Фармацевтический факультет. Владикавказ, Россия
 Комментарии
Текст работы размещён без изображений и формул.
Полная версия работы доступна во вкладке "Файлы работы" в формате PDF

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

АТФ - аденозинтрифостфат;

ГАМК - гамма-аминомасляная кислота;

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота;

ДР - диабетическая ретинопатия;

КПГ - конечные продукты  гликозилирования;

НГН - нарушенная гликемия натощак;

НТГ - нарушенная толерантность к глюкозе;

ПССП - пероральные сахороснижающие препараты;

СД - сахарный диабет;

ЦНС - центральная нервная система;

NADH - восстановленная форма никотинамида.

 


ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Сахарный диабет является одной из важнейших проблем, стоящих перед здравоохранением РФ. Актуальность поиска эффективных гипогликемических лекарственных средств обусловлена стремительным ростом числа больных сахарным диабетом, их ранней инвалидизацией и высокой смертностью, что связано с развитием диабетических осложнений.

В настоящее время в терапии СД 2 применяется весьма широкий арсенал «сахароснижающих» препаратов с различными фармакокинетическими и фармакодинамическими эффектами, направленными на устранение основных метаболических нарушений, приводящих к гипергликемии (нарушение секреции инсулина, инсулинорезистентность, избыточная продукция глюкозы печенью, замедление всасывания глюкозы в тонком кишечнике, стимуляция секреции инсулина и одновременное подавление выброса глюкозы) [1].

Препараты, применяемые для лечения СД 2 в настоящее время разделяют на несколько классов: инсулины, производные сульфонилмочевины, бигуаниды, ингибиторы альфа-глюкозидаз, тиазолидиндионы, меглитиниды (глиниды, прандиальные регуляторы гликемии), аналоги глюкагоноподобного пептида, глиптины, аналоги амилина, комбинированные препараты [1].

Cовременные возможности фармакологической компенсации сахарного диабета с поддержанием в течение суток уровня гликемии, близкого к норме, выходят на первый план в проблеме увеличения продолжительности и улучшения качества жизни больных с так называемыми поздними осложнениями СД - ретинопатией, нефропатией, невропатией [2].

Внимание врачей всегда привлекало лечение сахарного диабета естественными метаболитами. Одним из таких препаратов является таурин - жизненно необходимая сульфоаминокислота - естественный внутриклеточный метаболит [1]. Таурин оказывает влияние непосредственно на патогенетические процессы, уменьшая развитие и прогрессирование макро- и микроангиопатий.

Вторым метаболическим препаратом является витамин В6 - пиридоксин, который применяется при диабетической полиневропатии. Он служит кофактором более чем 100 ферментам, влияет на структуру и функцию нервной ткани, в первую очередь, регулируя метаболизм аминокислот, что обеспечивает нормализацию белкового обмена и препятствует накоплению избыточных количеств нейротропного яда - аммиака [3].

Цель дипломной работы - обосновать состав, разработать методики анализа и нормы качества комбинированного гипогликемического лекарственного средства на основе естественных метаболитов.

Для реализации поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

  • обобщить литературные данные о СД 2 типа и его осложнениях;
  • изучить номенклатуру препаратов, применяемых для лечения СД 2 типа;
  • рассмотреть фармакологическое действие таурина и пиридоксина гидрохлорида и перспективы применения в терапии СД 2 типа;
  • изучить методы анализа таурина и пиридоксина гидрохлорида;
  • обосновать перспективность создания комбинированного гипогликемического ЛС на основе таурина и пиридоксина гидрохлорида;
  • подобрать методики идентификации и количественного определения ингредиентов в ЛС «ТауВит»;
  • разработать нормы качества для комбинированного ЛС «ТауВит».

В настоящее время на фармацевтическом рынке России таурин представлен в виде лекарственного препарата «Дибикор», который применяется в комплексной терапии сахарного диабета 2 типа, глазных капель «Тауфон», применяемых при катаракте и дистрофических изменениях тканей глаза.

Пиридоксина гидрохлорид входит  в состав препаратов «Мильгамма» - в сочетании с другими витамина группы В, «Магне В6»- в композиции с магнием, а также в виде индивидуального препарата пиридоксина гидрохлорида.

Кроме того, известны многочисленные биологически активные добавки, содержащие таурин и пиридоксина гидрохлорид.

Впервые предлагается композиция естественных метаболитов - таурина и пиридоксина гидрохлорида в составе комбинированного лекарственного средства. Исследования по данному направлению предполагают обоснование состава, дозировок ингредиентов, разработку методик анализа (качественного и количественного) и норм качества комбинированного гипогликемического лекарственного средства.

Структура работы. Дипломная работа изложена на 57 страницах текста компьютерного набора, состоит из введения, обзора литературы, 1 главы собственных исследований, заключения, списка используемой литературы. Работа иллюстрирована 8 таблицами и 2 рисунками. Библиография включает 38 источников, 5 из которых иностранные.


ГЛАВА 1 Терапия сахарного диабета 2 типа и перспективы создания комбинированного гипогликемического лекарственного средства (обзор литературы)

 

1.1 Сахарный диабет 2 типа. Диабетические осложнения

Сахарный диабет 2-го типа (инсулиннезависимый диабет) - метаболическое заболевание, характеризующееся хронической гипергликемией, развивающейся в результате нарушения секреции инсулина или механизмов его взаимодействия с клетками тканей (ВОЗ, 1999 г.)

Сахарный диабет (СД) является актуальной медико - социальной проблемой для большинства стран мира. Частота возникновения этого заболевания значительно превысила ожидаемые параметры и на данный момент заболеваемость СД характеризуется Международной Диабетической Федерацией как эпидемия. По данным экспертной оценки количество больных СД на 2007 год может составлять 246 (около 6% населения в возрасте 20-79 лет), а к 2025 году увеличится до 380 миллионов (DiabetesAtlas IDF, 2006). Около 90-95% составляют пациенты с СД 2 типа. Еще больше пациентов (308 миллионов) имеют ранние нарушения углеводного обмена: нарушенную гликемию натощак (НГН) и нарушенную толерантность к глюкозе (НТГ). При этом эксперты говорят о том, что количество не выявленного СД может превышать зарегистрированный уровень в 2-3 раза [4].

СД 2 типа представляет собой группу гетерогенных нарушений углеводного обмена. Во многом этим объясняется отсутствие общепринятых теорий этиологии и патогенеза данного заболевания. Несомненным является, что при СД 2 типа одновременно имеется два основных дефекта: инсулинорезистентность и нарушение функции β-клеток. Это нашло свое отражение и в последней этиологической классификации нарушений гликемии, где указывается, что тип 2 может быть с преобладанием дефектов секреции инсулина или преобладанием инсулинорезистентности (Reportof WHO Consultation, 1999). У большинства больных СД 2 типа ухудшение тканевой чувствительности к инсулину представляет собой первичный (наследуемый) дефект. Если β-клетки не способны поддерживать достаточно высокий уровень секреции инсулина, чтобы преодолеть инсулинорезистентность, развивается гипергликемия. Такая последовательность событий характерна как для больных с метаболическим синдромом, так и для больных с нормальной массой тела (Reaven G., 1988). Но у некоторых больных СД 2 типа первичный дефект может возникать на уровне β-клеток и манифестировать в виде нарушения секреции инсулина. Инсулинорезистентность у таких больных развивается сочетано с или вслед за нарушением секреции инсулина. Больные такого типа встречаются гораздо реже и в основном представлены лицами с нормальной массой тела. Но какой бы дефект (т.е. снижение секреции инсулина или инсулинорезистентность) не инициировал развитие СД 2 типа, он затем ведет к возникновению второго дефекта. Важно то, что для возникновения значительного нарушения углеводного обмена должны быть представлены оба механизма [4].

Сегодня инсулинорезистентность определяется как нарушение биологического ответа на экзогенный или эндогенный инсулин. Эти изменения проявляются при изучении как метаболических (обмена углеводов, жиров и белков), так и митотических процессов (нарушение роста, дифференцировки клеток, синтеза ДНК, регуляции транскрипции генов). Несмотря на тесную связь инсулинорезистентности и метаболизма глюкозы, снижение чувствительности к инсулину сказывается на любом биологическом действии инсулина: обмене жиров и белков, метаболизма в эндотелии сосудов и экспрессии генов [4].

Инсулинорезистентность является центральным механизмом эволюции СД 2 типа, как и генерализованного метаболического синдрома в целом. Она тесно связана с сердечно - сосудистыми факторами риска, такими как гипертония и дислипидемия, вносящими существенный вклад в развитие ишемической болезни сердца, поэтому для уменьшения риска развития осложнений необходимо не только достижение компенсации углеводного обмена, но и комплексная коррекция остальных метаболических нарушений. Во многом выбор метода лечения может определяться степенью нарушения инсулинсекреторной функции поджелудочной железы (R.A.DeFronzo, 1992; D.Porte, 1990).С другой стороны, с развитием новых методов количественной оценки чувствительности к инсулину, внимание исследователей привлекает нарушение действия инсулина на уровне тканей (G.M.Reaven, 1995; Е. Ferrannini, 1994; В. Martin, 1992). На современном этапе наибольшее внимание уделяется следующим методам количественной оценки действия инсулина: гиперинсулинемический клэмп и структурные математические модели на основе внутривенного (минимальная модель, FSIGTT) и перорального (OSIG) глюкозотолерантного теста или определения глюкозы и инсулина натощак (с вычислением целого ряда индексов, в том числе НОМА, QUICKI) [4].

Обычно на первом этапе лечения СД 2 типа используется немедикаментозная терапия, которая включает в себя диетотерапию и увеличение физической активности. Многочисленными исследованиями уже давно доказано, что у большинства больных снижение массы тела позволяет достичь устойчивой компенсации углеводного обмена, уменьшить инсулинорезистентность, а также получить положительный эффект в отношении часто сопутствующих артериальной гипертонии и дислипидемии. Физические упражнения рассматриваются как важный метод в структуре комплексной терапии СД 2 типа. Кроме ускорения снижения веса, физическая активность сама по себе улучшает чувствительность к инсулину и, как следствие этого - показатели состояния углеводного обмена (W.C.Knowleretal., 2002) [4].

Если правильное соблюдение диеты в сочетании с физическими нагрузками не приводит к компенсации углеводного обмена, то следующим этапом следует назначение пероральных сахароснижающих препаратов (ПССП). К сожалению, зачастую приходится назначать ПССП при сохраняющейся декомпенсации СД на фоне явного несоблюдения диеты. Подбор адекватной сахароснижающей терапии и достижение желаемой степени компенсации заболевания у больных СД 2 типа представляет определенные сложности. Это обусловлено значительной гетерогенностью СД 2 типа, которая затрудняет поиск патогенетического лечения в каждом конкретном случае. В настоящий момент существуют много видов ПССП для лечения СД 2 типа, обладающих различными механизмами действия. В целом эти механизмы направлены на устранение трех основных метаболических нарушений, приводящих к гипергликемии: нарушение секреции инсулина поджелудочной железой, периферическая инсулинорезистентность, избыточная продукция глюкозы печенью. Дополнительный механизм действия - замедление всасывания глюкозы в тонком кишечнике и уменьшение скорости опорожнения желудка, за счет этого уменьшение постпрандиального подъема гликемии. Также могут применяться препараты для лечения ожирения (аноректики и ингибиторы желудочно-кишечных липаз), которые за счет снижения веса уменьшают инсулинорезистентность [4].

Принятый в 2006 г. и обновленный в 2008 г. консенсус Европейской ассоциации по изучению диабета (EASD) и Американской диабетической ассоциации (ADA) рекомендует, что на первом этапе лечения СД 2 типа, кроме изменения образа жизни, в большинстве случаев требуется назначение метформина. Если не достигнуты цели гликемического контроля, на 2 этапе могут быть добавлены другие препараты (в качестве хорошо доказанных - препараты сульфонилмочевины или базальный инсулин, в качестве менее доказанных - тиазолидиндионы или агонисты рецепторов глюкагоноподобного пептида-1). Аналоги амилина, меглитиниды, ингибиторы α-глюкозидаз. На 3 этапе возможно сочетание даже трех ПССП, однако начало и интенсификация инсулинотерапии предпочтительны. Влияние инсулинотерапии при СД 2 типа на инсулинорезистентность может проявиться в ухудшении чувствительности к инсулину (например, за счет увеличения массы тела и гиперинсулинемии) или улучшении за счет снижения влияния «глюкозотоксичности» (Yki-Jarvinen Н., 1995). Комбинации инсулинотерапии с пероральными сахароснижающими препаратами таких групп, как бигуаниды и тиазолидиндионы, в некоторых исследованиях приводят к благоприятным эффектам: минимизация увеличения массы тела на фоне инсулинотерапии (Relimpio F., 1998) и снижение суточной потребности в инсулине при улучшении метаболического контроля (Schwartz S., 1998, Buse J.B., 1998). Очевидно, что усиление инсулинорезистентности на фоне какого-либо вмешательства является нежелательным фактором. Следовательно, изучение изменений чувствительности к инсулину, динамики метаболических показателей и влияния улучшения гликемического контроля на эти параметры на фоне инсулинотерапии является актуальной задачей [4].

Диабет 2 типа составляет 85-90% от всех типов сахарного диабета и наиболее часто развивается у людей старше 40 лет, и, как правило, ассоциирован с ожирением. Заболевание прогрессирует медленно. Для него характерны второстепенные симптомы, кетоацидоз развивается редко. С течением времени развиваются осложнения: микро- и макроангиопатия, нефро- и нейропатия, ретинопатия и другие [5].

Острота проблемы связана не только с распространенностью диабета, но и с высокой частотой развития сосудистых осложнений. Именно сосудистые осложнения определяют статистику ранней инвалидизации и смертности при диабете. В ряду поздних осложнений диабета первое место занимает диабетическая ретинопатия (ДР), являясь причиной прогрессирующего и безвозвратного снижения зрения [6].

В большинстве стран повреждение сетчатки, вызванное диабетом - это самая частая причина слепоты и слабовидения. Инвалидность по зрению отмечается более чем у 10% диабетиков [7,8].Поскольку СД 2 типа часто протекает латентно в течение многих лет, к моменту установления диагноза от 7% до 38% пациентов уже имеют признаки ретинопатии [8,9,10]. Через 10 лет от начала заболевания патологические изменения глазного дна отмечаются у 40-50%, а на фоне 20-летней длительности диабета различные появления ретинопатии обнаруживаются более чем у 90% пациентов [11,12].

На возникновение и прогрессирование ДР могут влиять разнообразные факторы, что объясняет большую вариабельность результатов различных исследовательских групп, изучающих данную проблему. Как правило, у пациентов с сахарным диабетом 2 типа выявляется целый комплекс клинических и лабораторных нарушений, возможно связанных с развитием ДР Противоречивость результатов большинства исследований, посвященных изучению осложнения и связанных с ним факторов риска объясняется трудностями, возникающими при попытке оценить значение, вклад каждого отдельного фактора в развитие диабетической ретинопатии [6].

Лазерная фотокоагуляция сетчатки является эффективным методом в случае угрожающей зрению ретинопатии. Важнейшие моменты, значительно снижающие риск развития и прогрессирования ретинопатии - строгий контроль гликемии и артериального давления - не могут полностью защитить от развития осложнений, а, кроме того, трудно достижимы в клинической практике. В настоящее время в большинстве стран продолжается активный поиск дополнительных средств профилактики и лечения диабетической ретинопатии [6].

До последнего времени рекомендации пациентам, имеющим начальную (непролиферативную) ретинопатию, ограничивались назначением препаратов, обладающих ангиопротективным действием. Однако использование в лечебных или профилактических целях ангиопротекторов (трентал, доксиум, дицинон и др.) признано малоэффективным и в настоящее время в большинстве стран эти препараты не применяются [6].

Диабетическая нейропатия (наиболее распространённой формой диабетической нейропатии является полинейропатия) затрагивает более 50% больных диабетом. Полинейропатии характеризуются диффузным поражением нервных волокон, входящих в состав различных нервов, и занимают ведущее место среди неврологических осложнений соматических заболеваний. Как правило, клинические симптомы развиваются спустя 5-10 лет от начала основного заболевания, считается, что не менее чем у 10% пациентов сахарный диабет и верифицируется только после манифестации нейропатии. Обычно диабетическая нейропатия проявляется покалываниями, болями, онемением или слабостью в руках и ногах. К факторам риска развития полинейропатии у больных диабетом относят длительность самого заболевания, уровень и значительные колебания гликозилированного гемоглобина (является показателем компенсации углеводного обмена на протяжении последних 60-90 дней) в крови, дислипидемию, высокий индекс массы тела, альбуминурию, гипертензию и курение [13].

Сегодня достижение стабильной нормогликемии является первым этапом в лечении диабетической нейропатии, который, тем не менее, имеет огромное значение, что подтверждается сопоставимостью частоты развития нейропатий у больных сахарным диабетом 1 и 2 типа. Так, в исследовании DCCT (The Diabetes Controland Complications Trial Research Group, 1993) было показано, что адекватный гликемический контроль приводил к уменьшению частоты развития новых случаев полинейропатии, а у пациентов с недавно выявленной полинейропатией на фоне стабильного гликемического контроля отмечался регресс клинических симптомов [14]. Последовавшее затем исследование, в которое было включено большинство участников DCCT показало, что предшествующий длительный адекватный гликемический контроль достоверно улучшал отдалённый прогноз, снижая вероятность развития полинейропатии и других поздних осложнений диабета. Однако в клинической практике, оптимальная и длительная компенсация углеводного обмена достигается у относительно небольшого числа пациентов. Учитывая прогрессирующий характер заболевания, весьма актуальным является возможность использования лекарственных препаратов, влияющих на различные звенья патогенеза диабетической нейропатии. При нарушениях, приводящих к снижению качества жизни пациента, наряду с базовыми антидиабетическими препаратами, рекомендуют применять также специфическое лечение поражённых нервных волокон и микрососудов. Типичным поражением периферических нервов при диабете является дистальная полинейропатия. Метаболические изменения преимущественно поражают сенсорные нервные волокна, в результате чего возникают парестезии и боли. Пациентов беспокоят покалывания, онемение, зябкость стоп или чувство жжения, боли в конечностях. В течение нескольких лет болезненные симптомы появляются преимущественно в покое, а затем становятся всё более постоянными и интенсивными. Обычно с самого начала заболевания удаётся выявить нарушения болевой, температурной и/или вибрационной чувствительности, снижение рефлексов и двигательные расстройства.

Помимо борьбы с гипергликемией, многие авторы связывают определённые перспективы в лечении диабетической нейропатии с проведением профилактической терапии, направленной на улучшение метаболизма нервной ткани. Собственно метаболическая терапия предполагает применение препаратов, содержащих вещества, свойственные внутренней среде организма и обладающих первично метаболическим действием, т. е. влияющих на гомеостаз, непосредственно включаясь в биохимические процессы в качестве субстратов, коферментов, кофакторов или других участников метаболизма, а не через регулирующие механизмы, как абсолютное большинство лекарств. Обычно метаболические препараты имеют вспомогательное значение, но при нейропатиях их роль возрастает, поскольку нарушения метаболизма являются, в данном случае, важным звеном патогенеза [13].

 

1.2 Лечение сахарного диабета 2 типа

Одним из недостатков препаратов инсулина является невозможность энтерального применения. В связи с этим в течение длительного времени делались попытки обнаружения гипогликемических средств, эффективных при приеме внутрь. В настоящее время такие препараты широко применяются при сахарном диабете 2 типа. Они имеют отличные от инсулина механизмы действия и представлены несколькими подгруппами:

1.             Производные сульфонилмочевины.

2.             Производные аминокислот.

3.             Тиазолидиндионы.

4.             Бигуаниды.

5.             Ингибиторы α - глюкозидазы [15].

 

1.2.1 Производные сульфонилмочевины

Наиболее часто применяемая группа синтетических противодиабетических средств. Выделяют 2 поколения (генерации) производных сульфонилмочевины:

1-е поколение: карбутамид, толазамид, толбутамид;

2-е поколение: хлорпропамид, глибенкламид, гликлазид, глипизид, гликвидон.

Главным компонентом гипогликемического действия является способность этих веществ стимулировать выделение эндогенного инсулина β - клетками островкового аппарата. Такое действие препаратов является результатом блокады АТФ-зависимых калиевых каналов β - клеток [16].

Кроме того, производные сульфонилмочевины: 1) восстанавливают чувствительность β - клеток к глюкозе; 2) увеличивают плотность инсулиновых рецепторов в инсулинозависимых тканях; 3) повышают чувствительность рецепторов к инсулину и улучшают трансдукцию пострецепторного сигнала [16].

Толбутамид (Бутамид) относится к производным сульфонилмочевины первого поколения. Гипогликемическое действие развивается в течение 1 ч (уровень глюкозы снижается на 30%), достигает максимума через 5-7 ч и продолжается около 12 ч. Назначается в дозе 1 г (2 таблетки по 0,5 г) 2 раза в сутки при сахарном диабете 2 типа [16].

Побочные эффекты: повышение аппетита, гипогликемия, при длительном применении - повышение смертности от заболеваний сердечно-сосудистой системы. Парестезии, бессонница, головокружение, тошнота, рвота [16].

Противопоказания: гиперчувствительность, кетоацидоз, беременность, лактация [16].

Хлорпропамид (Диабенезе) отличается от толбутамида большей продолжительностью действия (24 - 36 ч после однократного применения), более высокой активностью (назначают по 0,25 - 0,5 г 1 раз в сутки) и наличием «тетурамоподобного» эффекта (угнетает альдегиддегидрогеназу, в связи с чем останавливает окисление этилового спирта на стадии образования уксусного альдегида). О последнем следует оповещать больных и рекомендовать воздерживаться от приема спиртных напитков на время лечения хлорпропамидом [16].

Глибенкламид (Манинил, Гилемал, Глюкобене, Даонил) отличается от толбутамида и хлорпропамида более высокой (на 2 порядка) активностью (назначают по 0,005-0,001 г 1-2 раза в сутки). Гипогликемическое действие наступает через 2 ч, достигает максимума через 7-8 ч и продолжается до 24 ч. Кроме гипогликемического действия обладает также гиполипидемическим (снижает в плазме крови уровень атерогенных липопротеинов) и антитромбогенным эффектами [16].

Глипизид (Антидиаб, Глибенезретард,Минидиаб) отличается от глибенкламида (и прочих производных сульфонилмочевины 2 поколения) относительно малым периодом полуэлиминации (t1/2 3-4 ч), в связи с чем имеет менее выраженную способность к кумуляции [16].

Гликвидон (Глюренорм) рассматривается как наиболее эффективное и хорошо переносимое производное сульфонилмочевины, в связи с чем может назначаться лицам с заболеваниями печени и почек [16].

Гликлазид (Глиорал, Диабетон, Диабрезид, Реклид) в ходе метаболических изменений образует 8 метаболитов, один из которых оказывает выраженное влияние на микроциркуляцию. Это проявляется снижением агрегации тромбоцитов, снижением коагуляции (гепариноподобное действие), активацией фибринолиза, а также некоторым антиоксидантным действием. В связи с этим при применении гликлазида улучшается микроциркуляция, снижается выраженность ангиопатий, ретинопатии, нефропатий, улучшается васкуляризация и трофика конъюнктивы, уменьшаются признаки микрозастоя. Препарат особо показан при сахарном диабете 2 типа, осложненном ангиопатиями, ретинопатиями, нефропатиями [16].

Группа производных сульфонилмочевины в целом хорошо переносится больными, однако имеет ряд фармакокинетических и фармакодинамических особенностей. Во-первых, производные сульфонилмочевины повышают аппетит. Это свойство расценивается как побочное действие, поскольку антидиабетическая терапия проводится на фоне диетической коррекции. Во-вторых, производные сульфонилмочевины связываются с белками плазмы крови, ввиду чего могут вступать в фармакокинетическое взаимодействие с нестероидными противовоспалительными средствами, антикоагулянтами непрямого действия и др. В-третьих, эти препараты проникают через плацентарный барьер, что следует учитывать при их назначении в период беременности. В-четвертых, производные сульфонилмочевины имеют недостаточную селективность в отношении калиевых каналов β - клеток, в связи с чем могут блокировать калиевые каналы кардиомиоцитов и ангиомиоцитов, что, в свою очередь, может приводить к увеличению смертности от заболеваний сердечно-сосудистой системы [16].

 

1.2.2 Производные аминокислот

Натеглинид (Старликс) - производное фенилаланина. Некоторые аминокислоты способны активировать выделение инсулина β-клетками островкового аппарата поджелудочной железы. На этом основано гипогликемическое действие натеглимида. Повышение выделения инсулина при применении натеглимида является результатом блокады АТФ-зависимых калиевых каналов β-клеток и повышения чувствительности β - клеток к глюкозе (без изменения базального уровня инкреции инсулина). Отличительной особенностью препарата является короткий латентный период (несколько секунд) и небольшая продолжительность действия (не более 30 мин). В связи с этими свойствами препарат применяют для уменьшения постпрандиальной гипергликемии (повышение глюкозы в крови после приема пищи). С этой целью натеглимид назначают внутрь непосредственно перед едой (за 1-30 мин). Из побочных эффектов наиболее вероятны аллергические реакции [15].

 

1.2.3 Тиазолидиндионы

Пиоглитазон (Актос) повышает выделение инсулина β-клетками островков поджелудочной железы. Кроме того, пиоглитазон повышает чувствительность инсулинозависимых тканей к инсулину, что, вероятно, связано с сенсибилизацией инсулиновых рецепторов. Это свойство тиазолидиндионов весьма ценно при формировании инсулинорезистентных форм сахарного диабета [17].

 

1.2.4 Бигуаниды

Метформин (Глюкофаг, Глиформин, Сиофор) - единственный представитель данной группы синтетических противодиабетических средств. Гипогликемическое действие метформина не является следствием увеличения секреции инсулина β-клетками поджелудочной железы. Детальный механизм действия не вполне ясен, но не вызывают сомнения следующие компоненты: 1) снижение всасывания глюкозы в кишечнике; 2) увеличение захвата глюкозы скелетными мышцами; 3) увеличение утилизации глюкозы (стимуляция анаэробного гликолиза); 4) снижение продукции глюкозы гепатоцитами; 5) понижение уровня глюкагона в крови; 6) повышение чувствительности инсулинозависимых тканей к инсулину [18].

Метформин обладает рядом ценных свойств: снижает уровень атерогенных липопротеинов, холестерина, триглицеридов в плазме крови, уменьшает аппетит и массу тела [18].

Показания к применению: сахарный диабет 2 типа (в особенности - диабет «тучных») [18].

Побочные эффекты: тошнота, рвота, понос, метеоризм, боли в животе. Указанные побочные эффекты, не являясь жизнеопасными, ограничивают применение метформина, поскольку возникают довольно часто. Кроме того, возможен лактатный ацидоз. Его возникновение обусловлено тем, что метформин стимулирует анаэробный гликолиз, конечным продуктом которого является молочная кислота. Симптомами лактацидоза являются слабость, сонливость, мышечные боли, одышка, гипотермия, гипотония, брадиаритмия [18].

Противопоказания: гиперчувствительность, нарушения функции печени и почек, метаболический ацидоз, беременность, лактация [18].

1.2.5 Ингибиторы α-глюкозидазы

Акарбоза (Глюкобай) - олигосахарид, получаемый из микроорганизмов Actinoplanes utahensis путем ферментации. Акарбоза является обратимым ингибитором панкреатической α-амилазы и кишечной мембранно-связанной α-глюкозидазы. В результате алиментарные полисахариды не расщепляются до дисахаридов (угнетение α-амилазы), а дисахариды не расщепляются до моносахаридов (угнетение α-глюкозидазы) и, таким образом, нарушается образование и всасывание моносахаридов в кишечнике. Выраженной гипогликемии препарат не вызывает, но при назначении перед приемом пищи снижает постпрандиальную гипергликемию [19].

Показания к применению: сахарный диабет 2 типа (чаще всего в комбинации с другими противодиабетическими средствами) [19].

Побочные эффекты: метеоризм (отмечается у 20-30% пациентов), понос (отмечается у 3% пациентов), боли в животе. Указанные эффекты связаны с тем, что не всосавшиеся углеводы ферментируются кишечной микрофлорой с выделением газа [19].

Противопоказания: хронические воспалительные заболевания кишечника с нарушением функции всасывания [19].

Кроме указанных препаратов, в комплексном лечении сахарного диабета 2 типа могут использоваться фитотерапевтические средства. Чаще всего их применяют при легком течении заболевания как дополнение к диетотерапии, либо в комплексе с другими синтетическими антидиабетическими средствами [19].

Сбор «Арфазетин» имеет следующий состав:

- побегов черники - 20%;

- створок плодов фасоли обыкновенной 20%;

- корня аралии маньчжурской (или корневища с корнями заманихи) 15%;

- плодов шиповника 15%;

- травы хвоща полевого 10%;

- травы зверобоя 10%;

-  цветков ромашки аптечной 10%.

 Сбор заваривают в домашних условиях, принимают внутрь за 30 мин до еды по 1/3 или 1/2 стакана 2-3 раза в день курсом в 20-30 дней. Через 10-15 дней курс повторяют. В течение года проводят 3-4 курса. Применение сбора позволяет снизить суточную дозу синтетических антидиабетических средств [15].

 

1.3 Фармакологическое действие таурина и пиридоксина гидрохлорида в терапии СД 2 типа

1.3.1 Фармакологическое действие таурина

Одним из механизмов развития диабетических ангиопатий считают наличие генетической предрасположенности к морфофункциональной аномалии клеточных мембран, реализующейся в сосудистую патологию через метаболические нарушения [20,21]. В связи с этим целесообразно использование в лечении больных сахарным диабетом лекарственных средств мембраностабилизирующего действия [22]. Одним из таких препаратов является таурин (Тауфон), разработанный сотрудниками Института экспериментальной кардиологии КНЦ РАМН и Института биофизики МЗ РФ. Его действующим началом является 2-аминоэтансульфоновая кислота, способная влиять на мембрану клеток, в частности ее жесткость и фосфолипидный состав, а при длительном применении оказывать также регулирующее действие на метаболизм, в том числе углеводный обмен [23].

В настоящее время доказано, что отдельные эффекты таурина связаны с его участием в окислительно - восстановительных реакциях. Так,  например, продемонстрировано, что в культуре клеток (нейтрофилы и эозинофилы) он хлорируется, нейтрализуя НОСl, продуцируемую миелопероксидазой, формируя стабильные хлорамины и тем самым предотвращая клетки от аутолиза. Кроме того, показано, что благодаря способности реагировать с гипохлоратом (прооксидантом) и удалять его с образованием относительно стабильного таурохлорамина, таурин ослабляет повреждения ДНК, вызванные ароматическими аминосоединениямиinvitro. Высокий уровень таурина и гипотaурина обнаружен также в половых железах, где предполагается, что последний, окисляясь до таурина, действует как антиоксидант [24].

Показано также, что таурин in vivo потенцирует эффект инсулина, активируя утилизацию глюкозы в сердце, вызывая повышение фруктозо - 1,6-дифосфата, лактата (нонепирувата) и  усиление окисления цитоплазматического NADН. При этом активируется фосфофруктокиназа, ауровень АТФ и цитрата снижается. Таурин invivo оказывает стимулирующее действие на выделение поджелудочной железой инсулина безучастия адренергических рецепторов путем активации гликолиза в β-клетках и, защищая от токсического действия островки Лангерганса, предотвращает вызываемые стрептозотоцином гипергликемию и снижение уровня иммунореактивного инсулина, активирует выброс инсулина в кровь по цАМФ - зависимому механизму [25].

Малая токсичность, богатый спектр фармакологических, физиологических и биохимических эффектов позволяют рассматривать таурин как весьма перспективные лечебные средства при сахарном диабете второго типа [24].

 

1.3.2 Фармакологическое действие пиридоксина гидрохлорида

Патогенетически обоснованным при лечении диабетической нейропатии является, таким образом, применение витаминов группы В, благодаря их специфическому нейротропному действию [13]. Витамины группы В широко назначают в качестве метаболической терапии с целью улучшения функции периферических вегетативных нервных волокон, замедления прогрессирования осложнений и уменьшения интенсивности болевого синдрома [3].

Нейротропными традиционно считаются следующие витамины группы В - тиамин (В1), пиридоксин (B6) и цианокобаламин (B12). Эти витамины обладают разнообразными метаболическими и клиническими эффектами, но их объединяет высокая значимость для нормального функционирования нервной ткани [3].

Витамин B6 - пиридоксин - является кофактором более чем для 100 ферментов, влияет на структуру и функцию нервной ткани, в первую очередь благодаря способности регулировать метаболизм аминокислот, обеспечивая, таким образом, нормализацию белкового обмена и препятствуя накоплению избыточных количеств нейротоксичного аммиака. Оптимизация деятельности нервной системы дополнительно обеспечивается участием пиридоксина в синтезе катехоламинов, гистамина и тормозящего медиатора ЦНС - гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК). Кроме того, пиридоксин увеличивает внутриклеточные запасы магния, играющего важную роль в обменных процессах и в деятельности нервной системы [26].

Физиологически активная форма пиридоксина (витамина В6) - пиридоксальфосфат - участвует в синтезе сфингозина - структурного элемента мембран нервных волокон. На этапе «позднего гликозилирования» активный метаболит В6пиридоксамин способен эффективно ингибировать образование КПГ и препятствовать тем самым разрушению белков и липидов [26].

Пиридоксин всасывается в тощей кишке с помощью механизма пассивной диффузии, который не имеет эффекта насыщения, в связи с чем поступление пиридоксина в кровь зависит от его концентрации в просвете кишки [13].

Оптимизация пиридоксином деятельности нервной системы дополнительно обеспечивается его участием в синтезе различных медиаторов: катехоламинов, гистамина и тормозного медиатора ЦНС (γ -аминомаслянной кислоты (ГАМК) [3].

Потребность взрослого человека в витамине B6 составляет 2-2,5 мг в сутки. Длительный прием высоких доз пиридоксина (более 200 мг/сутки) может вызвать побочные эффекты - невропатию, зависимость [3].

 

Таблица 1

Основные функции пиридоксина

Обменные процессы

Нейротропное действие

Другие эффекты

  • Дез- и переаминирование аминокислот
  • Декарбоксилирование аминокислот
  • Фосфорилирование гликогена
  • Участие в обмене фолиевой кислоты
  • Обеспечение синаптической передачи: участие в синтезе катехоламинов, гистамина
  • Обеспечение процессов торможения в ЦНС: участие в синтезе ГАМК
  • Антиагрегантный
  • Улучшение абсорбции магния из ЖКТ и его накопления в клетке
  • Поддержание процессов кроветворения

 

1.4 Методы анализа естественных метаболитов

1.4.1 Методы анализа таурина

Taurine

Таурин

2 - аминоэтансульфоновая кислота

 

Молекулярная масса 125,15 г/моль

Таурин представляет собой белый кристаллический порошок без запаха.

ИК - спектроскопия

Таурин идентифицируют с помощью ИК - спектров по совпадению полос поглощения в области 4000-400 см-1 с прилагаемыми к ФС рисунками спектров [27].

Нингидриновая реакция

Таурин при нагревании с нингидрином дает синее или фиолетовое окрашивание. В этой реакции таурин окисляется нингидрином и подвергается окислительному дезаминированию, декарбоксилированию с образованием аммиака, альдегида и СО2. Нингидрин восстанавливается и связывается со второй молекулой нингидрина посредством молекулы аммиака, образуя продукты конденсации, окрашенные в синий, фиолетовый цвет [28].

Реакция на аминогруппу

Если водный раствор таурина нейтрализовать 0,1 М раствором натрия гидроксида по фенолфталеину до розового окрашивания, а затем добавить нейтрализованный (по тому же индикатору) раствор формальдегида, то полученная смесь обесцветится. Испытание основано на связывании аминогруппы формальдегидом до образования N - метиленового производного (азометина) и демаскировании кислотных свойств аминокислоты [28].

Реакция на сульфаты

Субстанцию таурина  помещают в тигель, растворяют в окислительной смеси и озоляют сначала на электрической плитке до прекращения выделения паров, затем в муфельной печи до получения белого остатка. К остатку прибавляют воду. Содержимое тигля дает характерную реакцию на сульфаты. К 2 мл полученного раствора прибавляют 0,5 мл раствора хлорида бария, образуется белый осадок нерастворимый в минеральных кислотах [27].

Определение рН

pH 4% раствора субстанции от 4,8 до 5,8. Определяют рН потенциометрически [27].

Потеря в массе при высушивании

Около 1 г субстанции (точная навеска) сушат при температуре 100-1050С до постоянной массы. Первое взвешивание после сушки в течение 2ч. Последующие взвешивания проводят после каждого часа дальнейшего высушивания [27].

Сульфатная зола

Субстанцию таурина помещают в предварительно прокаленный о точно взвешенный фарфоровый тигель, смачивают 1 мл концентрированной серной кислоты и осторожно нагревают на сетке или песчаной бане до удаления паров серной кислоты. Затем прокаливают при слабом калении (около 500°С) до постоянной массы, избегая сплавления золы и спекания ее со стенками тигля. По окончании прокаливания тигель охлаждают в эксикаторе и взвешивают [27].

Определение азота в органических соединениях (метод Кьельдаля)

Метод основан на предварительной минерализации азотсодержащего органического соединения до гидросульфата аммония. Определение выполняют с помощью прибора, состоящего из колбы Кьельдаля, парообразователя, холодильника, приемника. Оно состоит из нескольких стадий.

1. Минерализация (нагревание с концентрированной H2SO4).

2.Разложение (NH4)HSO4 гидроксидом натрия и отгонка образующегося аммиака в приемник.

3.Взаимодействие NН3 в приемнике с кислотой борной с образованием аммония тетрагидроксибората.

4. Титрование отгона раствором кислоты хлористоводородной.

Параллельно выполняют контрольный опыт (без анализируемого вещества) для повышения точности результатов анализа.

Формольное титрование

Таурин взаимодействуя с раствором формальдегида, образует азометины. При этом происходит усиление кислотных свойств аминокислоты и ее титруют  раствором натрия гидроксида с индикатором фенолфталеином до появления слабо розового окрашивания, не исчезающего в течение 30 секунд [27].

 

1.4.2 Методы анализа пиридоксина гидрохлорида

Pyridoxinumhydrochloride

Пиридоксина гидрохлорид

4,5 - бис (гидроксиметил) - 2 - метилпиридин - 3 - ола гидрохлорид

 

Молекулярная масса 205,64 г/моль

Пиридоксина гидрохлорид представляет собой белый или почти белый кристаллический порошок [29].

ИК - спектроскопия

Инфракрасный спектр субстанции, снятый на диске с калия бромидом, в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать рисунку спектра пиридоксина гидрохлорида [29].

УФ - спектроскопия

2,5 г субстанции растворяют в 50 мл воды. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки и перемешивают (раствор А). 1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки и перемешивают (раствор Б). Ультрафиолетовый спектр поглощения раствора Б в области от 250 до 350 нм должен иметь максимум при 290 нм [29].

1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора фосфатным буферным раствором с рН 7,4 до метки и перемешивают (раствор В). Ультрафиолетовый спектр поглощения раствора Вв области от 220 до 350 нм должен иметь максимумы при 252 нм и 323 нм [29].

Реакция с железа(III) хлоридом

Фенольный гидроксил обнаруживают с помощью иона железа(III), появляется красное окрашивание исчезающее при добавлении кислоты серной разведенной [28].

Образование металлокомплекса пиридоксина с азокрасителем

Наличие фенольного гидроксила в молекуле пиридоксина и в α-положении пиридинового цикла незамещенного атома водорода создает возможности для получения азокрасителей с различными диазосоединениями. А.М. Алиевым предложен способ идентификации и фотоколориметрического определения пиридоксина с помощью этой реакции. Для повышения стойкости образующихся окрашенных азосоединений им разработан способ, основанный на получении металлокомплекса пиридоксина с азокрасителем. В качестве реактива использована стабилизированная хлоридом цинка соль диазония. Пиридоксина гидрохлорид образует стойкое красно-фиолетовое окрашивание [28].

Образование индофенольного красителя

Идентифицировать пиридоксин можно по образованию индофенольного красителя с 2,6-дихлорхинонхлоримидином. Образующийся окрашенный в голубой цвет продукт извлекают бутиловым спиртом [28].

В присутствии борной кислоты образование индофенольного красителя не происходит, так как пиридоксин связывается в боратный комплекс [28].

Отсутствие положительной реакции в этих условиях служит подтверждением подлинности пиридоксина гидрохлорида [28].

Определение хлорид иона

К испытуемому раствору прибавляют раствор азотной кислоты и 2%-ый раствор нитрата серебра, перемешивают и через 5 минут сравнивают с эталоном, состоящим из 10 мл эталонного раствора Б и такого же количества реактивов, какое прибавлено к испытуемому раствору. Опалесценция, появившаяся в испытуемом растворе, не должна превышать эталон [29].

Определение рН

pH 5% раствора субстанции от 2,4 до 3,2. Определяют рН потенциометрически.

Потеря в массе при высушивании

Около 1 г субстанции (точная навеска) сушат при температуре 100-105°С до постоянной массы. Первое взвешивание после сушки в течение 2ч. Последующие взвешивания проводят после каждого часа дальнейшего высушивания [29].

Рассчитывают потерю в массе при высушивании согласно формуле:

Сульфатная зола

Субстанцию пиридоксина помещают в предварительно прокаленный и точно взвешенный фарфоровый тигель, смачивают 1 мл концентрированной серной кислоты и осторожно нагревают на сетке или песчаной бане до удаления паров серной кислоты. Затем прокаливают при слабом калении (около 500°С) до постоянной массы, избегая сплавления золы и спекания ее со стенками тигля. По окончании прокаливания тигель охлаждают в эксикаторе и взвешивают [29].

Неводное титрование

Субстанцию пиридоксина растворяют в растворе муравьиной кислоты безводной, прибавляют раствор уксусного ангидрида и титруют при интенсивном перемешивании 0,1 М раствором хлорной кислоты до появления изумрудно-зеленого окрашивания (индикатор - кристаллический фиолетовый) [29].

Алкалиметрия

Второй способ количественного определения пиридоксина гидрохлорида заключается в нейтрализации связанной хлороводородной кислоты 0,1 М раствором гидроксида натрия (индикатор бромтимоловый синий) [28].

 

1.5 Перспективность создания комбинированного гипогликемического лекарственного средства

Создание комбинированного ЛС, для применения при СД 2 типа, на основе таурина и пиридоксина гидрохлорида привлекает внимание, главным образом своим гипогликемическим, антиоксидантным и нейротропным действием.

Сахороснижающий эффект таурина связывают с потенциирующим влиянием на продукцию инсулина и активность фосфолипазы и глюкогенсинтетазы [30,31]. Также таурин влияет непосредственно на антиоксидантную систему клетки и способствует удалению супероксидных радикалов, и в связи с этим действие таурин применяется для лечения диабетических ретинопатий [32].

В комплексной терапии больных СД немаловажным является коррекция диабетических осложнений, которые являются причинами инвалидизации и смертности. Патогенетически обоснованным при лечении диабетической нейропатии является, таким образом, применение витаминов группы В, благодаря их специфическому нейротропному действию [5].

Витамин B6 - пиридоксин - является кофактором более чем для 100 ферментов, влияет на структуру и функцию нервной ткани, в первую очередь благодаря способности регулировать метаболизм аминокислот, обеспечивая, таким образом, нормализацию белкового обмена и препятствуя накоплению избыточных количеств нейротоксичного аммиака. Оптимизация деятельности нервной системы дополнительно обеспечивается участием пиридоксина в синтезе катехоламинов, гистамина и тормозящего медиатора ЦНС - гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК). Кроме того, пиридоксин увеличивает внутриклеточные запасы магния, играющего важную роль в обменных процессах и в деятельности нервной системы[26].

Таким образом, комплекс таурина с пиридоксина гидрохлоридом позволит достичь более эффективного фармакологического действия при терапии СД 2 типа и его осложнений.

Предлагаемое сочетание позволит усилить антиоксидантное действие таурина и, кроме того, оказывать нейротропное действие за счет включения пиридоксина гидрохлорида.

 

 


Выводы по обзору литературы

В настоящее время актуальность и практическая значимость поиска новых высокоэффективных гипогликемических лекарственных средств не вызывает сомнений.

При нарушениях, приводящих к уменьшению качества жизни пациентов, наряду с базовыми антидиабетическими препаратами, рекомендуют применять также специальное лечение при поражении нервных волокон и микрососудов. Типичным поражением периферических нервов при СД является диабетическая полинейропатия.

Препараты, применяемые для лечения СД 2 в настоящее время, разделяют на несколько классов: инсулины, производные сульфонилмочевины, бигуаниды, ингибиторы альфа-глюкозидаз, тиазолидиндионы, меглитиниды (глиниды, прандиальные регуляторы гликемии), аналоги глюкагоноподобного пептида, глиптины, аналоги амилина, комбинированные препараты.

Однако, данные синтетические лекарственные препараты оказывают лишь гипогликемическое действие, не влияя на развитие и прогрессирование различных диабетических осложнений и, кроме того, оказывают многочисленные побочные действия.

Предлагаемая композиция таурина и пиридоксина гидрохлорида представляет интерес, так как не обладает побочными действиями ввиду того, что являются естественными метаболитами и позволит корректировать не только уровень глюкозы в крови, но и макро-, микроангиопатии, полинейропатий.

Таким образом, создание комбинированного гипогликемического лекарственного средства на основе таурина и пиридоксина гидрохлорида является целью проведения следующих экспериментальных исследований, что предполагает обоснование состава, методик анализа, норм качества.


ГЛАВА 2 Разработка комбинированного гипогликемического лекарственного средства, включающего таурин и пиридоксина гидрохлорида (экспериментальная часть)

 

2.1 Обоснование состава комбинированного гипогликемического ЛС «ТауВит»

По результатам анализа литературных данных, был обоснован состав комбинированного гипогликемического ЛС «ТауВит» [33]:

таурина - 1,0 г в сутки;

пиридоксина - 300 мг в сутки.

Создание комбинированного ЛС, для применения при СД 2 типа, на основе таурина и пиридоксина привлекает внимание, главным образом, своим гипогликемическим, антиоксидантным и нейротропным действием.

 

2.2 Анализ комбинированного ЛС «ТауВит»

Для качественного и количественного анализа ЛС «ТауВит» была поставлена задача - подобрать селективные методики анализа.

Для изучения селективности указанных методик были приготовлены две модельные смеси. Первая модельная смесь содержала все ингредиенты (таурин и пиридоксина гидрохлорид), а вторая - «плацебо» (модельная смесь без определяемого ингредиента).

 

2.2.1 Идентификация таурина в ЛС «ТауВит»

Для обнаружения таурина использовалась цветная реакция с нингидрином [29]. Чувствительность реакции 5 мкг (в пробе).

Идентификацию таурина проводили также с кислотой хлористоводородной разведенной и бария хлоридом (качественная реакция на сульфо-группу) [29,34]. Чувствительность реакции 10 мкг (в пробе).

Фармакопейный метод качественного определения таурина - реакция с формалином и гидроксидом натрия - оказался неселективным, ввиду наличия в композиции пиридоксина гидрохлорида.

Методика 1: 0,013 г каждой модельной смеси помещали в колбу коническую вместимостью 50 мл и растворяли в 30 мл воды очищенной теплой, доводили до метки тем же растворителем (раствор А). К 10 мл раствора А приливали 5 - 6 капель раствора нингидрина спиртового 1% и нагревали.

В растворе первой модельной смеси появлялось сине-фиолетовое окрашивание, что говорит о том, что данная модельная смесь содержит таурин. В растворе второй модельной смеси «плацебо» окрашивания не наблюдалось.

Методика 2: 0,065 г каждой модельной смеси помещают в тигель, растворяют в 1 мл окислительной смеси и озоляют сначала на электрической плитке до прекращения выделения паров, затем в муфельной печи до получения белого остатка. К остатку прибавляют 2 мл воды. К 2 мл полученного раствора прибавляют 0,5 мл раствора хлорида бария.

*Приготовление окислительной смеси. 0,5 г калия нитрата растворяют в 25 мл кислоты азотной концентрированной. Срок годности 1 месяц.

В растворе первой модельной смеси образовался белый осадок. В растворе второй модельной смеси «плацебо» выпадение осадка не наблюдалось.

Таким образом, предложенные методики позволяют установить подлинность таурина в составе ЛС «ТауВит» при совместном присутствии ингредиентов.

 

 

 

2.2.2 Идентификация пиридоксина гидрохлорида в ЛС «ТауВит»

Идентификацию пиридоксина гидрохлорида проводили, используя фармакопейные методы: спектрофотометрию и реакцию с серебра нитратом (на хлорид-ион) [29]. Чувствительность реакций 10 и 20 мкг (в пробе), соответственно.

Методика 1: 2,16 г модельной смеси растворяют в 10 мл воды очищенной. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки и перемешивают (раствор А). 1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки и перемешивают (раствор Б). Ультрафиолетовый спектр поглощения раствора Б в области от 250 до 350 нм должен иметь максимум при 290 нм.

1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора фосфатным буферным раствором с рН 7,4 до метки и перемешивают (раствор В). Ультрафиолетовый спектр поглощения раствора В в области от 220 до 350 нм должен иметь максимумы при 252 нм и 323 нм.

В растворе Б первой модельной смеси наблюдался максимум при 290 нм, а в растворе В - максимумы при 252 нм и 323 нм. В растворах Б и В второй модельной смеси «плацебо» максимумы при соответствующих длинах волн не наблюдались.

Методика 2: 2,16 г модельной смеси растворяют в 10 мл воды очищенной. К полученному раствору прибавляют 0,5 мл кислоты азотной, 0,5 мл 2% раствора серебра нитрата, перемешивают [29].

В растворе первой модельной смеси образовался белый осадок. В растворе второй модельной смеси «плацебо» выпадение осадка не наблюдалось.

Таким образом, предложенные методики позволяют установить подлинность пиридоксина гидрохлорида в составе ЛС «ТауВит» при совместном присутствии ингредиентов.

 

2.2.3 Количественное определение таурина в ЛС «ТауВит»

В количественном анализе таурина используется фармакопейная методика формольного титрования [34]. Однако, проведенные исследования показали, что присутствие пиридоксина гидрохлорида мешает проведению данной методики количественного определения таурина в ЛС «ТауВит». Кроме того, методика имеет недостатки - использование токсичного реагента (формалина), невысокая точность.

Для определения таурина в ЛС «ТауВит» предложен спектрофотометрический метод [35,36], основанный на определении оптической плотности продукта реакции таурин-нингидрин при длине волны 568 нм. Методика проста в выполнении, высокочувствительна и точна.

Количественное определение таурина в обеих модельных смесях проводили по следующей методике.

Методика. Около 1,3 г каждой модельной смеси (точная навеска) растворяли в воде очищенной в колбе мерной вместимостью 250 мл, доводили объем раствора до метки тем же растворителем (раствор А). 1 мл раствора А помещали в колбу мерную вместимостью 100 мл, прибавляли 4 мл воды очищенной, 4 мл фосфатного буферного раствора (рН=7,2), 2 мл раствора нингидрина спиртового 1% и 2 мл раствора кислоты аскорбиновой водного 0,05%. Реакционную массу нагревали на бане водяной кипящей в течение 25 минут, быстро охлаждали, доводили объем раствора водой очищенной до метки и перемешивали. Параллельно проводили опыт с раствором рабочего стандартного образца таурина и контролем. Оптическую плотность окрашенных растворов измеряли на фоне контроля с помощью спектрофотометра при 568 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

Содержание таурина (Х, %) вычисляли по формуле:

 

Х ,                                                   (1)

 

где А - оптическая плотность анализируемого раствора; А0 - оптическая плотность стандартного раствора; а0 - масса навески рабочего стандартного образца таурина, г; а - масса навески анализируемой пробы, г.

**Приготовление водного раствора кислоты аскорбиновой 0,05%. 0,05 г кислоты аскорбиновой растворяют в 50 мл воды очищенной и доводят объем раствора тем же растворителем до 100 мл.

***Приготовление раствора рабочего стандартного образца таурина. Около 0,05 г таурина (ФС 42-0033-0044-00) помещают в колбу мерную вместимостью 250 мл, растворяют в 100 мл воды очищенной, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.

Результаты количественного определения таурина представлены в таблице 2.

При измерении оптической плотности раствора модельной смеси «плацебо» она не дала максимума при длине волны 568 нм.

Таким образом, сопутствующие ингредиенты не мешают определению таурина и используемая методика является селективной.

Из таблицы 2 следует, что спектрофотометрическая методика позволяет проводить количественное определение таурина в ЛС «ТауВит» при совместном присутствии ингредиентов. Относительная ошибка определения составляет ±1,16%. Содержание таурина в порошках от 76,75% до 78,95%, считая на среднюю массу одного порошка (ГФ XI, вып.2, с. 156).

Таблица 2

Результаты спектрофотометрического определения таурина в ЛС «ТауВит»

Масса порошка, г

Оптическая плотность, А

Содержание таурина, %

Метрологические характеристики

1,3102

0,479

76,75

 = 78,25

S = 0,8615

 = 0,3517

Δ* = 0,90

78,25±0,90

, % = ±1,16

1,3128

0,475

78,53

1,2956

0,473

79,15

1,3234

0,479

78,15

1,3177

0,473

77,98

1,2945

0,477

78,95

 

2.2.3.1 Валидация методики количественного определения таурина

Для валидационной оценки спектрофотометрической методики количественного определения таурина в ЛС «ТауВит» необходимо установить линейность, правильность и прецизионность.

Проверку правильности методики проводили на пятиуровневом эксперименте по 15 последовательным определениям точно известной концентрации таурина, находящейся в пределах аналитической зоны от 80 до 120%. Для этого были приготовлены растворы модельных смесей порошков с концентрацией таурина соответственно 0,8; 0,9; 1,0; 1,1; 1,2 г, что в пределах аналитической зоны (навеска модельных смесей 1,3 г). Далее определение проводили в условиях, указанных выше. Результаты определения, а также метрологические характеристики представлены в таблице 3.

 

Таблица 3

Установление правильности методики количественного определения таурина (Р = 95%, t(Р,ƒ) = 2,14)

Уровень

Масса таурина в модельной смеси, г

Оптическая плотность

Найдено таурина

Открываемость R, %

Метрологические характеристики

%

г

 

1

 

0,8

0,421

61,89

0,8191

101,25

 

 

, % = 100,56

 

SD = 1,1524

 

RSD, % = 1,1459

 

tвыч = 1,90

 

tтабл  = 2,14

0,422

61,54

0,8192

101,33

0,426

61,43

0,7935

98,75

 

2

 

0,9

0,451

69,48

0,9081

101,92

0,452

69,23

0,8995

98,17

0,450

69,47

0,9174

101,57

 

3

 

1,0

0,478

77,13

1,0154

101,69

0,470

76,92

0,9973

98,86

0,474

77,01

1,0013

100,32

 

4

 

1,1

0,496

84,82

1,1023

101,76

0,497

84,61

1,0924

98,91

0,491

84,77

1,1007

100,03

 

5

 

1,2

0,514

92,97

0,0330

101,94

0,512

92,31

0,0318

98,25

0,517

93,10

0,0330

101,97

Полученные результаты определения таурина в модельных смесях позволяют говорить о том, что данная методика не отягощена систематической ошибкой, т.к. соблюдается неравенство tвыч<tтабл(Р,f) (таблица 3).

По усредненным полученным данным построили зависимость оптической плотности от концентрации таурина (рисунок 1).

По данным графика рассчитывали уравнение линейной зависимости и коэффициент корреляции, который оказался равен 0,999, т.е. линейность методики наблюдается в области исследуемых концентраций от 2 до 6 мг/мл (рисунок 1).

 

Рисунок 1 - Градуировочный график зависимости оптической плотности от содержания таурина

Прецизионность методики количественного определения таурина установлена на 6 параллельных определениях. Результаты приведены в таблице 4.

Таблица 4

Установление прецизионности методики количественного определения таурина

Масса порошка, г

Оптическая плотность, А

Найдено таурина, %

Метрологические

характеристики

1,3107

0,476

78,12

 = 77,28

SD = 0,7284

RSD, % = 0,9427

Δ* = 0,76

77,28±0,76

1,3092

0,476

76,61

1,3125

0,467

77,43

1,2994

0,483

76,81

1,3173

0,468

76,55

1,3121

0,475

78,13

Как следует из представленных результатов, методика прецизиона, так как относительное стандартное отклонение RSD равно 0,94%.

Таким образом, в ходе проведенных исследований показана возможность применения спектрофотометрического определения содержания таурина в ЛС «ТауВит».

Предлагаемые методики количественного определения ингредиентов ЛС «ТауВит» валидны по основным критериям: специфичность, правильность, линейность, прецизионность.

 

2.2.4 Количественное определение пиридоксина гидрохлорида в ЛС «ТауВит»

Количественное определение пиридоксина гидрохлорида проводили спектрофотометрически, определяя оптическую плотность при длине волны 291 нм [37]. Фармакопейные титриметрические методы анализа имеют недостатки (использование токсичных реагентов), поэтому не использовались в анализе.

Методика: 2,16 г модельной смеси растворяют в 10 мл воды очищенной. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки и перемешивают. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки и перемешивают. Оптическую плотность измеряли на фоне контроля с помощью спектрофотометра при 291 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

Содержание пиридоксина гидрохлорида (Х, %) вычисляли по формуле:

Х ,                                                   (2)

 

где А - оптическая плотность анализируемого раствора; А0 - оптическая плотность стандартного раствора; а0 - масса навески рабочего стандартного образца пиридоксина гидрохлорида, г; а - масса навески анализируемой пробы, г.

****Приготовление раствора рабочего стандартного образца пиридоксина гидрохлорида. Около 0,05 г пиридоксина гидрохлорида (ФС 42-0027-0007) помещают в колбу мерную вместимостью 250 мл, растворяют в 100 мл воды очищенной, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают.

Результаты количественного определения пиридоксина гидрохлорида представлены в таблице 5.

Таблица 5

Результаты спектрофотометрического определения пиридоксина гидрохлорида в ЛС «ТауВит»

Масса порошка, г

Оптическая плотность, А

Содержание пиридоксина гидрохлорида, %

Метрологические характеристики

2,1602

0,679

22,89

 = 23,15

S = 0,1766

 = 0,0721

Δ = 0,19

23,15±0,19

, % = ±0,80

2,1628

0,675

23,18

2,1596

0,673

22,98

2,1584

0,679

23,29

2,1577

0,673

23,32

2,1605

0,677

23,25

При измерении оптической плотности раствора модельной смеси «плацебо» она не дала максимума при длине волны 291 нм.

Таким образом, сопутствующие ингредиенты не мешают определению пиридоксина гидрохлорида и используемая методика является селективной.

Из таблицы 5 следует, что спектрофотометрическая методика позволяет проводить количественное определение пиридоксина гидрохлорида в ЛС «ТауВит» при совместном присутствии ингредиентов. Относительная ошибка определения составляет ±0,80%. Содержание пиридоксина гидрохлорида в порошках от 22,89% до 23,25%, считая на среднюю массу одного порошка (ГФ XI, вып.2, с. 156).

 

2.2.4.1 Валидация методики количественного определения пиридоксина гидрохлорида

Для валидационной оценки спектрофотометрической методики количественного определения пиридоксина гидрохлорида в ЛС «ТауВит» необходимо установить линейность, правильность и прецизионность.

Проверку правильности методики проводили на пятиуровневом эксперименте по 15 последовательным определениям точно известной концентрации пиридоксина гидрохлорида, находящейся в пределах аналитической зоны от 80 до 120%. Для этого были приготовлены растворы модельных смесей порошков с концентрацией пиридоксина гидрохлорида соответственно 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 г, что в пределах аналитической зоны (навеска модельных смесей 1,3 г). Далее определение проводили в условиях, указанных выше. Результаты определения, а также метрологические характеристики представлены в таблице 6.

Полученные результаты определения пиридоксина гидрохлорида в модельных смесях позволяют говорить о том, что данная методика не отягощена систематической ошибкой, т.к. соблюдается неравенство tвыч<tтабл(Р,f) (таблица 6).

По усредненным полученным данным построили зависимость оптической плотности от концентрации пиридоксина гидрохлорида (рисунок 2).

По данным графика рассчитывали уравнение линейной зависимости и коэффициент корреляции, который оказался равен 0,998, т.е. линейность методики наблюдается в области исследуемых концентраций от 0,4 до 0,8 мг/мл (рисунок 2).

 

Таблица 6

Установление правильности методики количественного определения пиридоксина гидрохлорида (Р = 95%, t(Р,ƒ) = 2,14; А0 =0,271, а0 = 0,0485)

Уровень

Масса пиридоксина гидрохлорида в модельной смеси, г

Оптическая плотность

Найдено пиридоксина гидрохлорида

Открываемость R, %

Метрологические характеристики

%

г

 

1

 

0,1

0,621

7,54

0,1219

98,94

 

 

, % = 100,31

 

SD = 0,7557

 

RSD, % = 0,7533

 

tвыч = 1,61

 

tтабл  = 2,14

0,622

7,69

0,1119

100,66

0,616

7,73

0,0913

99,75

 

2

 

0,2

0,651

15,48

0,2148

100,18

0,642

15,39

0,1989

101,17

0,650

15,47

0,2137

98,82

 

3

 

0,3

0,678

23,05

0,3175

100,69

0,670

23,08

0,2997

101,32

0,674

23,15

0,3071

101,53

 

4

 

0,4

0,686

30,82

0,4092

100,08

0,697

30,77

0,3934

101,21

0,701

30,97

0,4017

101,75

 

5

 

0,5

0,734

38,30

0,5030

100,62

0,722

38,46

0,4978

99,19

0,734

38,70

0,5081

98,99

 

Рисунок 2 - Градуировочный график зависимости оптической плотности от содержания пиридоксина гидрохлорида

Прецизионность методики количественного определения таурина установлена на 6 параллельных определениях. Результаты приведены в таблице 7.

Таблица 7

Установление прецизионности методики количественного определения пиридоксина гидрохлорида

Масса порошка, г

Оптическая плотность, А

Найдено пиридоксина гидрохлорида, %

Метрологические

характеристики

2,1509

0,676

23,11

 = 23,05

SD = 0,2309

RSD, % = 1,0015

Δ = 0,24

23,05±0,24

2,1652

0,676

23,33

2,1585

0,667

22,86

2,1564

0,683

22,71

2,1593

0,668

23,07

2,1621

0,675

23,23

Как следует из представленных результатов, методика прецизиона, так как относительное стандартное отклонение RSD равно 1,00%.

Таким образом, в ходе проведенных исследований показана возможность применения спектрофотометрического определения содержания таурина в ЛС «ТауВит».

Предлагаемые методики количественного определения ингредиентов ЛС «ТауВит» валидны по основным критериям: специфичность, правильность, линейность, прецизионность.

 

2.3 Изучение стабильности и разработка норм качества комбинированного ЛС «ТауВит»

«ТауВит» представляет собой многокомпонентное лекарственное средство. Поэтому на первоначальном этапе исследований необходимо было изучить взаимное влияние ингредиентов (таурина и пиридоксина гидрохлорида). Для этого были взяты навески ингредиентов в количествах, равных их содержанию на разовую дозу, и растворены в 100 мл воды очищенной. Оценку взаимного влияния проводили по изменению интенсивности окраски в присутствии другого ингредиента при хранении в термостате (600С) в течение суток и аналогичными растворами, хранящимися при комнатной температуре в течение суток [38]. Ингредиенты лекарственного средства не оказывали влияния друг на друга.

Проведенные исследования позволили предложить нормы качества комбинированного гипогликемического ЛС «ТауВит» (таблица 8).

Таблица 8

Нормы качества комбинированного гипогликемического ЛС «ТауВит»

Показатель

Метод

Норма

Описание

Визуальный

Белый аморфный порошок без запаха вкуса

Растворимость

ГФ XII, ч.1, с. 92

Растворим в воде, практически нерастворим в спирте этиловом 96%

Подлинность:

 

 

Таурин

Визуальный

(с нингидрином)

Сине-фиолетовое окрашивание раствора

(5 мкг/проба)

 

Визуальный

(с хлоридом бария)

Образование белой мути

(10 мкг/проба)

Пиридоксина гидрохлорид

Спектрофотометрия

Максимумы поглощения при 252, 290 и 323 нм

(10 мкг/проба)

 

Визуальный

(с нитратом серебра)

Белый творожистый осадок

(20 мкг/проба)

Прозрачность раствора

ГФ XII, ч.1, с. 98

4% раствор должен быть прозрачным

 

 

продолжение таблицы 8

Цветность раствора

ГФ XII, ч.1, с. 93

4% раствор должен быть бесцветным

рН раствора 4%

ГФ XII, ч.1, с. 89

От 4,0 до 5,0

Потеря в массе при высушивании, %

ГФ XII, ч.2, с. 143

Не более 0,5%

Количественное определение:

Таурин

Пиридоксина гидрохлорид

 

Спектрофотометрия

Спектрофотометрия

 

От 76,75% до 78,95%

От 22,89% до 23,25%

 

 

 


Выводы по экспериментальной части

1. На основании анализа литературных данных теоретически обоснованы дозы ингредиентов композиции таурина (1,0 г/сутки) и пиридоксина гидрохлорида (0,3 г/сутки).

2. Подобраны оптимальные методики качественного и количественного анализа ингредиентов ЛС «ТауВит», позволяющие определить их при совместном присутствии.

3. Для идентификации ингредиентов ЛС «ТауВит» предложены качественные реакции с нингидрином и бария хлоридом (для определения таурина), с серебра нитратом и УФ-спектрофотометрия (для определения пиридоксина гидрохлорида). Показана чувствительность и специфичность всех предложенных методик.

4. Для количественного анализа таурина выбран спектрофотометрический метод, основанный на реакции таурин-нингидрин. Методика селективна. Относительная погрешность методики составляет ±1,16.

5. Количественное определение пиридоксина гидрохлорида проведено спектрофотометрическим методом. Методика селективна. Относительная погрешность методики составляет ±0,80.

6. Методики количественного анализа ингредиентов ЛС «ТауВит» валидны, т.е. чувствительны, линейны, правильны, прецизионны.

7. Изучена стабильность комбинированного ЛС «ТауВит». Ингредиенты лекарственного средства не оказывали влияния друг на друга.

8. Разработаны нормы качества комбинированного ЛС «ТауВит».

 

 

 


ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Поиск и создание лекарственных препаратов гипогликемического действия не теряет актуальности и в настоящее время, несмотря на многочисленный арсенал синтетических препаратов данного фармакологического действия. Представленные на фармацевтическом рынке лекарственные препараты являются, в основном, монокомпонентными препаратами и действуют непосредственно на один из механизмов развития сахарного диабета 2 типа, не влияя на многочисленные диабетические осложнения, которые снижают качество жизни больных, приводят к инвалидизации и повышают смертность.

Синтетические гипогликемические препараты, кроме того, обладают различными побочными действиями. В связи с чем, особое значение придается препаратам из группы естественных метаболитов.

С этой точки зрения, представляет интерес таурин и пиридоксина гидрохлорида.

Разработанное лекарственное средство «ТауВит» позволит корректировать не только уровень глюкозы в крови, но и макро-, микроангиопатии, полинейропатий.

По результатам исследований обоснован состав, методики анализа и нормы качества ЛС «ТауВит», включающего таурина 1,0 г и пиридоксина гидрохлорида 0,3 г в сутки.

Для идентификации ингредиентов ЛС «ТауВит» предложены качественные реакции с нингидрином и бария хлоридом (для определения таурина), с серебра нитратом и УФ-спектрофотометрия (для определения пиридоксина гидрохлорида).

Методики качественного анализа ингредиентов чувствительны и специфичны.

Количественное определение таурина и пиридоксина гидрохлорида  в составе комбинированного ЛС «ТауВит» проводилось спектрофотометрическими методами.

Методики количественного анализа ингредиентов валидированы (чувствительны, правильны, линейны, прецизионны).

Изучена стабильность и разработаны нормы качества комбинированного ЛС «ТауВит».


СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1.  Трусов, В.В. Современные аспекты терапии сахарного диабета 2 -го типа / В.В. Трусов // Ремедиум Приволжье. - 2008. № 3. - С. 1-3.

2.  Строков, И.А. От тиамина к бенфотиамину: современные подходы в лечении диабетической полиневропатии / И.А. Строков, К.И. Строков, Т.В. Солуянова // Фарматека. - 2006. - №7.- С. 122.

3.  Гарадецкий, В.В. Лечение диабетической полиневропатии и других дистрофически-дегенеративных и воспалительных заболеваний периферической нервной системы метаболическими препаратами: методические рекомендации / В.В. Городецкий.- Москва. - 2004.-240 с.

4. Майоров, А.Ю. Состояние инсулинорезистентности в эволюции сахарного диабета 2 типа: дис. ... док. мед. наук: 14.00.03 / Майоров Александр Юрьевич. - Москва, 2009. - 217с.

5. Типы сахарного диабета [Электронный ресурс].- Электрон. дан. (1 файл). - Режим доступа: http://www.diabet.md/index.php?h =article&id=50&Itemid=59 - Загл. с экрана.

6. Трахтенберг, Ю.А. Комплексная терапия диабетической ретинопатии у пациентов с сахарным диабетом 2 - го типа: дис. ...канд. Мед. Наук: 14.00.03 / Трахтенберг Юлия Александрова. - Москва, 2006. - 0с.

7. Балаболки, М.И. Лечение сахарного диабета и его осложнений: руководство для врачей / М.И. Балаболкин и [др.].- М.: Медицина. - 2005 - С. 81-95.

8. Балашевич, Л.И. Глазные проявления диабета / Л.И. Балашевич, В.В. Брежский. -  СпбМАПО, 2004 - С. 123-199.

9. Дедов И.И., Шестакова М.В. Сахарный диабет // Универсум Паблишинг 2003 - С.75-92.

10. Prasad A, Husain S, Mincemoyer R, Pansa A, Cannon RO, Quyyumi AA. Coronary endothelial dysfunction in humans improves with angiotensin converting enzyme inhibition // Circulation. 1996. - Vol. 94 (Suppl 8). -P. 1-61. Abstr. 348.

11. Краснов, М.Л. О классификации изменений глазного дна при сахарном диабете /М.Л. Краснов, М.Г. Марголис // Офтальмолог журнал. - 1980 - №7. - С .42-45.

12. Миленькая, Т.М. Диабетическая ретинопатия и антиоксиданты /Т.М. Миленькая/ Сахарный диабет 2003 - Т. 19 - №2 - С.27-29.

13. Лечение диабетической полинейропатии [Электронный ресурс]: науч. журн. - Электронные данные. - «Трудный пациент». - Режим доступа: http://www.t-pacient.ru/archive/tp8-9-09/tp8-9-09_590.html

14. DCCT (The Diabetes Control and Complications Trial Research Group). The effect of intensive treatment of diabetes on the development and progression of long-term complications in insulin-dependent diabetes mellitus // N Engl J Med. 1993; 329: 977-986.

15. Аляутдин, Р.Н. Фармакология: учебник / под ред. Р.Н. Аляутдина. - 3-е изд., испр. - И.: ГЭОТАР-Медия, 2007. - 597с.

16. Пероральная сахароснижающаая терапия: Препараты сульфонилмочевины  [Электронный ресурс]. /Ванюкова Д.А./. - Режим доступа: http://www.spruce.ru/internal/endocrinology/diabetes/tablets_03.html

17. Инсулинорезистентность: патофизиология, клинические проявления, подходы к лечению [Электронный ресурс]. /Шестакова М.В./- Режим доступа: http://old.consilium-medicum.com/media/consilium/02_10/523.shtml

18. Бигуаниды: антигипергликемическое и вазопротективное действия [Электронный ресурс]./Балаболкина М.И., Креминская В.М./ - Режим доступа: http://old.consilium-medicum.com/media/consilium/03_09/487.shtml

19. Пероральные сахароснижающие препараты в лечении сахарного диабета типа 2 [Электронный ресурс] /Анфицеров М.Б., Волкова А.К./ - Режим доступа: http://www.remedium.ru/section/detail.php?ID=16879

20. Шкрабало,З Развитие диабетологии - применение новых знаний на практике. Пробл. эндокринол./Шкрабало З./ - М.: Медицина, 1991. - С.1-4.

21. Ефимов, А.С. Некоторые проблемы клинической диабетологии. Пробл. эндокринол./Ефимов А.С./ М.: Медицна, 1990. - С.52-55.

22. Лукьянченков, В.С. Спорные вопросы этиологии, патогенеза и лечения диабетической микроангиопатии. Кардиология/Лукьянченков В.С./. М.:Медицина, 1991.- С.88-91.

23. Таурин в лечении сахарного диабета [Электронный ресурс] /Кахновский И.М., Королева Т.В., Захарченко В.Н./ - Режим доступа: http://www.e-apteka.ru/preparats/atik/3-letters5.htm

24. Нефедов, Л.И. Таурин (биохимия, фармакология и медицинское применение)./Т.А. Нефедов/ - Ми.: Гордно, 1999. - 145с.

25. Новые возможности метаболической терапии у пациентов с сахарным диабетом 1 и 2 типа [Электронный ресурс]./Пецева Т.А., Перцева Н.О., Мищенко Н.А./ - Режим доступа: http://www.dibikor.ru/pdf/ukraina.pdf

26. Значение нейротропной терапии в предотвращении развития трофических язв при диабетической полинейропатии [Электронный ресурс].- Электрон. дан. (2 файла).- Режим доступа: http://medi.ru/Doc/170513.htm.- Загл. с экрана.

27. Субстанция-порошок таурин. Фармакоп. ст. 42-8367. - Введ. 2007.- 20.05.-М.,2007 - 11с.

28. Беликов, В.Г. Фармацевтическая химия: учеб. пособие: в 2ч. / В.Г. Беликов. - 3-е изд. - М.: МЕДпресс-информ, 2009. - 616с.

29. Государственная фармакопея РФ.- 12-е изд.- М.: Науч. центр экспертизы средств мед. применения, 2007.- Ч. 1.- 704 с.

30. Huxtable RJ. Physiological actions of taurine. Physiol Rev. 1992 Jan;72(1):101-63.

31. Lampson WG, Kramer JH, Schaffer SW. Potentiation of the actions of insulin by taurine. Can J Physiol Pharmacol. 1983 May;61(5):457-63.

32. Michalk DV, Wingenfeld P, Licht CH. Protection against cell damage due to hypoxia and reoxygenation: the role of taurine and the involved mechanisms. Amino Acids 1997; 13:337-46.

33. Витамин В6 (пиридоксин) [Электронный ресурс]./Гаев С.В./ - Режим доступа: http://vitamini.by/vitamin-b6.htm

34. Раствор тауфона 4% (глазные капли). Фармакоп. ст. 42-2852-97. - Введ. 1997.- 20.05.- М., 1997.- 6 с.

35. Пат. 2167410 Российская Федерация, МКП G01 N21/78. Способ количественного определения алифатических аминокислот / Т.И. Ярыгина, А.В. Захаров, В.А. Дубовик (РФ).- № 99116880/28; заявл. 03.08.1999; опубл. 20.05.2001. [Электронный ресурс].- Режим доступа: http://www.fips.ru/ html.- Загл. с экрана.

36. Ярыгина, Т.И. Разработка методики количественного определения тауфона (таурина) / Т.И. Ярыгина // Вестн. РУДН: Серия Медицина.- 2010.- № 4.- С. 522-524.

37. Использование УФ-спектрофотометрии для количественного определения водорастворимых витаминов в лекарственных препаратах [Электронный ресурс]: науч. Журн. - Электронные данные. - «Фармация». - Режим доступа: http://www.rusvrach.ru/pharm/archive/1676-qq-7-2010-4.html

38. Порядок определения первоначального срока лекарственного растительного сырья, продуктов его переработки, сборов: сб. мет. рекомен. по стандартизации лекарственных средств / В.А. Багирова [и др.].- М.: Первая Образцовая типография, 2006.- С. 224-226.

 

Просмотров работы: 6918