VI Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2014

ВВЕДЕНИЕ

В настоящее время в связи с загрязнением окружающей среды и ростом экологически обусловленных заболеваний особую актуальность приобретает создание лекарственных средств антитоксического действия.

Интерес представляет поиск детоксицирующих лекарственных средств природного происхождения, которые не вызывают многочисленные побочные действия по сравнению с химическими препаратами [21].

К природному эффективному средству детоксикации относятся пектины.

Пектины это природные полисахариды, которые содержатся почти во всех растениях. Как вещество, пектин был открыт более 200 лет назад и впервые получен из корнеплода топинамбура (земляной груши) [16].

Наиболее распространенным в нашей стране пектинсодержащим сырьем являются яблоки, сахарная свекла, цитрусовые, подсолнечник, клубни топинамбура и др [5,17].

Пектин способен сорбировать и выводить из организма микроорганизмы и выделяемые ими токсины, биогенные токсины, анаболики, ксенобиотики, продукты метаболизма, а также биологически вредные вещества, способные накапливаться в организме: холестерин, желчные кислоты, мочевину, билирубин, серотонин, гистамин, продукты тучных клеток [11]. В процессе усвоения пищи деметоксилизация пектина способствует превращению его в полигалактуроновую кислоту, которая соединяется с определенными тяжелыми металлами и радионуклидами, в результате чего образуются нерастворимые соли, не всасывающиеся через слизистую желудочно-кишечного тракта и выделяющиеся из организма вместе с калом [21].

Пектин входит в состав многочисленных БАДов, применяемых в качестве детоксицирующих средств («Полисорбовит», «Пекто» и др) [19].

Для оценки детоксицирующих свойств пектина имеют значение такие показатели как: молярная масса, уронидная составляющая, степень этерификации, содержание свободных карбоксильных групп, связывающая способность, сорбционная способность, полная статистическая обменная емкость и др [1,8]. Данные качественные показатели пектина зависят от растительного источника и способа его получения.

Цель исследования – сравнительное изучение пектинов различного растительного сырья.

Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

• Выбрать объекты сравнительного анализа.

• Определить качественные показатели пектина, характеризующие его детоксицирующую активность.

• Провести сравнительный анализ молярной массы пектинов.

• Провести сравнительный анализ уронидной составляющей пектинов.

• Провести сравнительный анализ степени этерификации пектинов.

• Провести сравнительный анализ содержания свободных карбоксильных групп пектинов.

• Провести сравнительный анализ связывающей способности пектинов.

• Провести сравнительный анализ сорбционной способности пектинов.

• Провести сравнительный анализ полной статистической обменной емкости пектинов.

• Провести сравнительный анализ общей золы пектинов.

• Провести сравнительный анализ рН пектинов.

• Провести сравнительный анализ растворимости пектинов.

Раннее работы в данном направлении ограничивались изучением качественных показателей пектина одного или нескольких видов растительного сырья (не более трех) [17]. Кроме того, анализ проводился не по всем показателям, характеризующим детоксицирующую активность пектина (в основном, исследовали молярную массу, степень этерификации, связывающую способность) [2].

Впервые проведены исследования физико-химических свойств пектинов пяти наиболее распространенных видов растительного сырья по всем качественным показателям, характеризующим детоксицирующую активность пектина.

Структура работы. Дипломная работа изложена на 42 страницах текста компьютерного набора, состоит из введения, обзора литературы, 1 главы собственных исследований, заключения, списка используемой литературы. Работа иллюстрирована 8 таблицами и 7 рисунками. Библиография включает 26 источников.

Глава 1 Структура, физико-химические свойства, способы получения, методы анализа и растительное сырье, содержащее пектины (Литературный обзор)

1.1 Структура пектинов

Пектины представляют собой полисахариды клеточных стенок. Основным компонентом пектиновых полисахаридов являются полиуроновые кислоты [18]. У высших растений они состоят из остатков D-галактуроновой кислоты, связанных С-1С-4-связями, на долю которой в зависимости от источника происхождения пектиновых веществ приходится от 83 до 90 % [18].

Карбоксильная группа каждого остатка D-галактуроновой кислоты может существовать в разных состояниях: образовывать соли с ионами определенных металлов, чаще всего кальция (пектат), причем атомы двух- и трехвалентных металлов могут связывать несколько цепей полигалактуроновой кислоты; соль может быть одновременно и метоксилирована (пектинат), или оставаться немодифицированной (пектовая кислота  основа всех видов пектиновых веществ), или быть частично метоксилированной (эту форму обычно называют пектином) (рис.1) [1]:

Рисунок 1 – Структура галактуроновой кислоты

R

Пектовая кислота Н

Пектат Ме⁺

Пектин Н и СН₃

Пектинат Ме⁺ и СН₃

Незначительную часть в составе пектиновых веществ составляют нейтральные полисахариды  арабинаны и галактаны, что и обусловливает гетерополисахаридный характер пектина [18]. Арабинаны представляют собой разветвленные полимеры, состоящие из остатков L-арабофуранозы, соединенные между собой α-С-1С-5-связями. Галактаны  неразветвленные цепи, образованные из остатков D-галактопиранозы, соединенных -С-1С-4-связями. При этом возможно, что часть карбоксильных групп галактуроновой кислоты этерифицирована указанными нейтральными полисахаридами. Молекулярная масса пектиновых веществ достигает 200000.

Согласно современным представлениям пектин имеет линейную структуру, в которой остатки D-галактуроновой кислоты имеют пиранозную конфигурацию (рисунок 2 а) [7].

Используют и другой способ изображения молекулы пектина, в котором отдельные кольца повернуты относительно друг друга и лежат в различных плоскостях (рисунок 2 б) [7].

Рисунок 2  Структурная формула пектина

В течение длительного времени не существовало четко сформулированной номенклатуры пектиновых веществ. В литературе применялось около 50 различных терминов [17]. В настоящее время утвердилась следующая номенклатура пектиновых веществ, разработанная Комитетом Американского химического общества и официально принятая в 1944 г.:

 пектин (pectin) – водорастворимое вещество, свободное от целлюлозы и состоящее из частично или полностью метоксилированных остатков полигалактуроновой кислоты. В зависимости от количества метоксильных групп и степени полимеризации существуют различные пектины. Н-пектин (H-pectin) – высокоэтерифицированный пектин. Имеет степень этерификации, т. е. отношение числа этерифицированных карбоксильных групп на каждые 100 карбоксильных групп пектиновой кислоты, более 50 %; L-пектин (L-pectin) – низкоэтерифицированный пектин. Имеет степень этерификации менее 50 %;

 пектиновые вещества (pectic substances) – физические смеси пектинов с сопутствующими веществами (например, пентозанами и гексозанами);

 пектиновые кислоты (pectin acid) – высокомолекулярные полигалактуроновые кислоты, небольшая часть карбоксильных групп которых этерифицирована метиловым спиртом. Соли пектиновых кислот называются нормальными или кислыми пектинатами (pectinates);

 пектовые кислоты (pectic acid) – полностью деметоксилированные пектины с нетронутой цепью. Соли пектовых кислот называются нормальными или кислыми пектатами (pectates);

 протопектин (protopectin) – нерастворимый в воде природный пектин растений, состоящий в основном из сети пектиновых цепей, образованных в результате соединения многовалентных ионов металла с неэтерифицированными группами COOH (образование ионных мостиковых связей), и в незначительном количестве при помощи эфирных мостиков с H₃PO₄;

 производные пектина – пектины с различными группами, связанными по главным валентностям, например ацетилпектин.

Рисунок 3  Пространственная структура молекулы пектина

Структура и химический состав пектиновых веществ определяют пространственную форму их молекул и характер взаимодействия с другими соединениями. Установлено, что пектиновые вещества обладают структурой с ограниченной гибкостью, стабилизируемой водородными и гидрофобными связями (рис. 3) [12].

1.2 Физико-химические свойства пектинов

Пектин – полисахарид с длинной спиралевидно-скрученной цепью повторяющихся единиц и высоким молекулярным весом – обладает свойствами лиофильного коллоида [4]. В отличие от других природных коллоидов (желатин, агар-агар) золи пектина переходят в гель только в присутствии сахара и кислоты или поливалентных металлов. Пектин, выделенный из растений, в высушенном виде представляет собой порошок от белого до серо-коричневого цвета в зависимости от источника получения и степени очистки. Он не обладает запахом, слизистый при пробе на язык. Пектин растворяется в воде, особенно при нагревании, осаждается спиртом и другими органическими растворителями. При повышении температуры выше 100⁰С пектин разлагается. Быстрое разложение наступает в присутствии ионов хлора [4].

Пектиновые растворы оптически активные, правовращающие, удельное вращение постоянно при значении рН около от 3,0 до 6,5 [6].

Характерными показателями пектина являются: молекулярный вес, метоксильное число, ацетильное число, растворимость в воде, вязкость золя, желеобразующая способность [4].

Ввиду того, что каждый пектин представляет собой смесь молекул с разной длиной цепи, может быть установлен только средний молекулярный вес. Различия в молекулярном весе пектинов зависят не только от его источника, но и от способа получения, вызывающего различную степень деградации молекулы [7].

Содержание метоксильных групп является важным показателем пектиновых веществ. Степень этерификации полигалактуроновой кислоты меняется в широких пределах в зависимости от источника получения и способа извлечения – от полностью лишенной метоксильных групп (пектовой кислоты) до полностью замещенных всех карбоксильных остатков полигалактуроновой кислоты [7].

Пектины, полученные из разных растений, значительно различаются по степени этерификации [1].

Метоксильное число имеет большое значение для желирующих свойств пектина. Для желеобразующего пектина установлена норма содержания метоксильных групп не ниже 7 %.

Значительно в меньшем количестве содержатся в пектине ацетильные группы. Ацетильное число колеблется в широких пределах: от сотых долей процента до 2,5 %. Ацетильные группы оказывают отрицательное влияние на желирование. Установлены допустимые пределы содержания ацетильных групп для студнеобразующего пектина – не более 1 %.

Наилучшим растворителем пектиновых веществ является вода. Растворяются они также в 84%-ной фосфорной кислоте и жидком аммиаке; в глицерине и формамиде – набухают. В остальных органических и неорганических растворителях они практически нерастворимы [10].

Растворимость пектина в воде возрастает с увеличением степени этерификации и с уменьшением степени полимеризации. Из двух пектинов с одинаковой длиной цепи легче растворим тот, у которого выше метоксильное число; из двух пектинов одинаковой степени этерификации легче растворим обладающий меньшим молекулярным весом [13].

Характерной особенностью пектинового золя как лиофильного коллоида является непропорционально высокое возрастание вязкости при увеличении его концентрации [6]. Вязкость золя пектина зависит от молекулярного веса и форм молекулы пектина, вокруг которой образуется жидкостный слой (сольватация). Раствор приобретает новые механические свойства, возникает внутренняя структура золя. Возникновение коллоидной «сетки» золя обусловливает структурную вязкость, изменяющуюся при изменении давления. При повышении давления у структурированного золя вязкость быстро снижается вследствие нарушения эластичной структуры.

Характерным и важным свойством пектина является его способность давать студни в присутствии сахара и кислот, отсюда и их название (от греческого слова «пектос» – соединяющий) [18].

Желирующая способность пектина растительного, широко используемая пищевой промышленностью, у разных растений далеко не одинакова и зависит от относительной молекулярной массы пектина, от степени метоксилирования остатков галактуроновой кислоты и количества сопутствующих балластных веществ, концентрации сахара в растворе, температуры и рН среды [6].

В водных растворах молекула пектина имеет форму спирали, карбоксильные группы которой расположены друг под другом. Изменения в форме молекулы пектина связаны с диссоциацией свободных и нейтрализованных карбоксильных групп. При электролитической диссоциации карбоксильные группы получают отрицательный заряд, вследствие чего между ними возникают силы отталкивания. Эти силы отталкивания выпрямляют спиральную молекулу и увеличивают ее линейные размеры и вязкость. Высокая вязкость плодово-ягодных соков обусловливается в основном присутствием в них пектиновых веществ [10].

Пектин обладает способностью образовывать различные виды гелей. Основные два типа гелей образуются в присутствии сахара и кислоты или при взаимодействии с поливалентными металлами [10].

В гелях первого типа при добавлении кислоты диссоциация карбоксильных групп подавляется, чем уменьшаются силы отталкивания. Добавление сахара как дегидратирующего вещества нарушает сольватацию, наступает взаимное сближение частичек пектина  золь переходит в гель, при этом образуется сетка пектиновых молекул, в которой блокируется сахарный раствор [3].

Между карбоксильными и гидроксильными группами цепей пектиновой кислоты возникают водородные связи. Возможно, что водородные связи образуются также между карбоксильными и гидроксильными группами пектиновых молекул и полярными группами сахара (рис. 4) [15].

Рисунок 4 – Гели пектина первого типа

Гели второго типа возникают при взаимодействии раствора низкометоксилированного пектина с ионами поливалентных металлов [2]. Известно, что пектовая кислота и частично метоксилированная пектиновая образуют соли с металлами – пектаты и пектинаты. Соли щелочных металлов растворимы в воде, соли поливалентных металлов практически нерастворимы.

Двухвалентный кальций образует мостики между молекулами пектина через карбоксильные группы (ковалентные связи). При этом создается трехмерная структура геля, в которой удерживается блокированная жидкость (рис. 5) [3].

Рисунок 5 – Гели пектина второго типа

При повышении температуры пектины разрушаются [6]. Этот процесс сопровождается уменьшением вязкости и желирующей способности. Понижение вязкости и желирующей способности вызывается разрушением суперструктуры пектиновых веществ. Оптимальной для сушки пектиновых веществ является температура, приблизительно равная 80С. При сушке выше этой температуры желеобразование пектина ухудшается в связи с происходящей деградацией.

Под действием кислот молекулы растворимых пектиновых веществ могут претерпевать одновременно два существенных изменения [2]:

а) омыление этерифицированных карбоксильных групп;

б) разрушение молекулы вследствие разрыва гликозидной связи между остатками D-галактуроновой кислоты.

При действии сильной минеральной кислоты на высокоэтерифицированную пектиновую даже при комнатной температуре через несколько недель происходит ее омыление до нерастворимой полигалактуроновой кислоты, выпадающей в осадок. Одновременно с метоксильными омыляются и ацетильные группы пектиновой молекулы. При повышении температуры кислотное омыление происходит быстрее. При дальнейшем же повышении температуры скорость этого процесса еще более возрастает, но вместе с тем начавшийся распад макромолекул по главным валентностям увеличивается настолько, что деградация начинает преобладать над омылением [7].

Деградация и омыление пектиновой кислоты  два полностью независимых друг от друга процесса. Понижение значения рН способствует омылению эфирных групп, повышение температуры  разрыву гликозидных связей. Так, при температуре около 50°С может происходить омыление, которое не сопровождается значительной деградацией макромолекулы. Продолжительный кислотный гидролиз ведет к полной деградации пектиновой молекулы вплоть до галактуроновой кислоты [6].

При концентрации кислоты от 12 до 19 % и температуре реакции до 119…145°С происходит докарбоксилирование входящей в состав пектиновых веществ D-галактуроновой кислоты [7].

Под воздействием 12%-ной соляной кислоты и температуре 140…150С полиуроновые кислоты, из которых построен пектин, способны образовывать фурфурол. Процесс образования фурфурола складывается из трех последовательно протекающих реакций [2]:

а) гидролиза полиуроновсй кислоты;

б) декарбоксилирования уроновой кислоты с образованием соответствующей пентозы;

в) дегидратации пентозы с образованием фурфурола.

Под действием избытка щелочи протопектин разлагается. Пектиновые кислоты при этих условиях целиком деметилируются. Омыление щелочью идет даже при комнатной температуре. Щелочное омыление протекает гораздо быстрее, чем кислотное; при достаточном количестве основания оно совершается за несколько часов. Одновременно с метоксильными омыляются и ацетильные группы [2].

Щелочь не только вызывает омыление, но может при известных условиях разрушать связи в цепи макромолекулы пектиновых веществ и изменять коллоидные свойства растворов в сторону возникновения более высокодисперсных коллоидных систем. При комнатной температуре гликозидные связи в цепи макромолекул разрушаются незначительно. При нагревании пектиновых растворов с разбавленными щелочами это разрушение происходит интенсивно [4].

При осторожном добавлении гидроокиси калия или натрия к разбавленным растворам пектиновых кислот образуются сначала кислые, а затем нейтральные пектинаты. Гидроокиси щелочноземельных металлов дают с пектиновыми веществами труднорастворимые осадки [4].

При действии окислителей пектиновые вещества разрушаются. Перекисьводорода, аскорбиновая кислота, смесь перекиси водорода и аскорбиновой кислоты, хлор, иодная кислота, молекулярный кислород, метапериодат натрия вызывают разложение пектиновой молекулы [6].

Перекись водорода оказывает значительное деградирующее действие даже в малой концентрации. Продуктами окисления в этом случае будут двуокись углерода, муравьиная кислота и формальдегид. Катализаторами процесса являются ферросоли, гидразин, фенилгидразин и др [4].

Аскорбиновая кислота разрушает пектиновые вещества в присутствии кислорода. Окислительное действие аскорбиновой кислоты усиливается от прибавления метиленовой сини и перекиси водорода. В результате окисления аскорбиновой кислотой происходит разрушение суперструктуры пектиновых веществ, которое сопровождается уменьшением вязкости растворов [14].

Метапериодат натрия окисляет второй и третий углеродные атомы галактуроновой кислоты, образуя новые функциональные группы. При этом нарушается устойчивость гликозидной связи в щелочной среде и облегчается распад пектиновых молекул [9].

В присутствии сахарозы окислительный распад пектиновых веществ подавляется, т.е. сахароза является ингибитором окисления пектиновых веществ [6].

Отношение пектинатов к различным окислителям является важной их характеристикой, определяющей способы переработки и выделения пектинов из растительного сырья [16].

Карбоксильные и гидроксильные группы пектиновой или пектовой кислот могут вступать в химические реакции; полученные при этом соединения рассматриваются как соответствующие производные двух видов [21].

При взаимодействии пектиновых веществ с кислотами реагируют гидроксильные группы. Существуют азотнокислые, муравьинокислые эфиры пектинов, ацетилпектины, нитропектины и т.д. Гидроксильные группы пектиновых веществ могут также алкилироваться; при этом получаются соответствующие простые эфиры [22].

При взаимодействии пектиновых веществ с метилиодидом, диметилсульфатом, диазометаном в реакцию вступают карбоксильные группы пектиновых веществ. При обработке метиловых эфиров полигалактуроновой кислоты различной степени этерификации жидким аммиаком в атмосфере азота эфиры переводятся в соответствующие амиды. При взаимодействии метилового эфира пектиновой кислоты с гидразином получается пектиновый гидразид. При нейтрализации этого гидразида хлорной кислотой получаются перхлораты [7].

Известны также силильные производные пектина, в которых активные атомы водорода замещены кремниевой кислотой или силильными группами [19].

Карбоксильные группы пектина могут восстанавливаться до первичных спиртовых групп с помощью алюмогидрида лития или боргидрида натрия. Довольно легко происходит сшивка пектиновых веществ формальдегидом в присутствии соляной кислоты как катализатора, в результате чего образуется метилольный полуацеталь пектина [3].

При взаимодействии пектиновых веществ с полифункциональными соединениями образуются пространственные трехмерные структуры. В качестве связующих агентов используют диметилдихлорсилан, глиоксаль, дихлорэтилсульфамид и др [14].

1.3 Способы получения пектина из растительного сырья

Существуют два метода получения пектинов из растительных материалов [8]:

1) фракционное извлечение пектиновых веществ;

2) быстрое получение всего экстракта.

По первому методу подлежащий анализу хорошо измельченный растительный материал экстрагируется на водяной бане десятикратным количеством 95%-ного этилового спирта для удаления сахаров, смолы, воска и т. д. Нерастворившийся осадок отфильтровывается, промывается 95%-ным спиртом, затем смесью спирта и эфира, снова эфиром и сушится при 85°С. Обработанный таким образом материал экстрагируется в приборе, который удобен для многократных последовательных обработок (рис. 6) [11].

Материал помещается в сосуд А, снабженный фильтром из пористого стекла, и заливается предварительно нагретой до необходимой температуры экстракционной жидкостью. Требуемая для этого температура поддерживается при помощи водяной бани Б.

После завершения процесса жидкость при помощи водяного насоса отсасывается через трубку В в приемник. Если необходимо, проводят несколько экстракций одной и той же пробы одной или несколькими жидкостями. При этом можно собирать либо весь экстракт сразу, либо по фракциям.

При достаточном количестве раствора (около 50 мл на 1 гэкстрагируемого материала) и хорошем размешивания можно извлечь 99 % пектиновых веществ за 4, 5 последовательных обработок.

Экстрагирующая жидкость выбирается в зависимости от того, в какой форме пектиновые вещества находятся в объекте исследования. Чаще всего в качестве ее применяют воду или 0,1 Н соляную кислоту.

Рисунок 6  Экстрактор Вейх-Филипса

Но если объект исследования содержит нерастворимые в воде пектинаты и пектаты, экстрагирующей жидкостью должен быть очень слабый раствор щелочи, так как при действии соляной кислоты получились бы нерастворимые низкометоксилированные пектиновые и пектовые кислоты [1].

По второму методу в трехлитровую колбу помещают 100 г хорошо измельченного испытуемого материала и заливают таким количеством горячей воды, чтобы при добавлении необходимого количества реактивов общий объем не превышал двух литров . Содержимое колбы нагревается на водяной бане до 88…90°С, после чего прибавляется сернистая кислота из расчета, чтобы конечная концентрация ее была 0,4…0,6 %. Экстракция длится 60 мин.при 88…90°С. После этого колба вынимается из водяной бани и быстро охлаждается струей холодной воды. Затем в нее доливается дистиллированная вода до метки 2 л, содержимое размешивается и отстаивается в полном покое. Из отстоявшегося экстракта отбирается необходимое для проведения анализа количество жидкости.

Содержание пектиновых веществ в растительных материалах колеблется в широких пределах: от 0,1…0,5 до 50 %. Наибольшее содержание пектина в лимонных выжимках (30…35 %), в апельсиновых и мандариновых отжимах (25…30 %), околоплодниках подсолнечника (около 25 %), свекловичном жоме (20…25 %), яблочных выжимках (5…15 %). Локализованы пектиновые вещества в различных частях растений неравномерно. Так, в цитрусовых плодах основное количество пектинов сосредоточено в альбедо, в яблоках – в эпидермисе, колленхиме и прилегающих тканях, в сахарной свекле – в мякоти.

Для получения пектина используют свежее, сульфитированное и сушеное сырье. Сушка и сульфитирование пектиносодержащего сырья вызваны необходимостью удлинения сроков его хранения перед переработкой [1].

В сушеном сырье замедляются микробиологические и физико-химические процессы, в результате чего количество и качество пектиновых веществ в процессе хранения изменяются незначительно. В сульфитированном сырье в процессе хранения качество пектина ухудшается, студнеообразующая способность снижается в среднем на 18…19 %.

Сушеное растительное сырье представляет собой капиллярно-пористую систему, имеющую капилляры различных длин и диаметров. Процесс пропитки сырья происходит через поры пектоцеллюлозной оболочки клетки под влиянием капиллярных сил.

При набухании изменяются геометрические параметры сырья, оно увеличивается в размерах. Скорость набухания сырья определяет скорость поглощения экстракта сырьем, что оказывает влияние на константы массопередачи в начальный период экстрагирования. Чтобы интенсифицировать процесс экстрагирования пектина и максимально извлечь его, растительная ткань перед гидролизом должна быть в набухшем состоянии, т.е. процессу гидролиза-экстрагирования пектиновых веществ из растительного сырья должен предшествовать процесс набухания сушеной растительной ткани [11].

По качественным показателям наиболее ценным пектинсодержащим сырьем является свежее сырье.

1.4 Методы анализа пектинов

1.4.1 Методы качественного определения пектинов

Методы анализа пектинов основаны на их физико-химических свойствах и особенностях структуры.

Пектины являются полисахаридными фракциями растительного происхождения, состав и свойства которых зависят от источника получения, особенностей технологического процесса и условий очистки [13].

Для характеристики пектина имеют значение такие показатели как: содержание золы общей, молярная масса, уронидная составляющая, степень этерификации, содержание свободных карбоксильных групп, связывающая способность и др. .

Молярная масса является одним из основных показателей, характеризующих солюбилизирующие свойства пектина [12]. Поскольку в процессе получения образуются смеси пектинов с различными длинами цепей, а, следовательно, и с различной молярной массой говорят о некоторой средней молярной массе. Чем выше молярная масса, тем более высокая желирующая способность пектина [12]. Проведены исследования, которые позволили установить зависимость гепатопротекторных свойств пектина от его молярной массы: чем меньше молекулярная масса, тем выше гепатопротекторные свойства . Молярную массу пектина определяют вискозиметрическим методом, используя для расчета уравнение Марка-Куна-Хаувинка [7].

Уронидная составляющая отражает содержание пектина в пересчете на галактуроновую кислоту и характеризует степень чистоты препарата пектина. Определение уронидной составляющей основано на измерении оптической плотности окрашенных продуктов взаимодействия пектинового гидролизата с карбазолом при длине волны 530 нм [7].

Степень этерификации представляет собой отношение числа этерифицированных карбоксильных групп к общему содержанию карбоксильных групп в пектине (этерифицированных и неэтерифицированных). Чем меньше степень этерификации пектина (больше свободных карбоксильных групп), тем выше его детоксицирующая активность. Определение степени этерификации проводят титриметрическим методом [13].

Для предварительной оценки способности пектина к связыванию тяжелых металлов важно определение содержания свободных карбоксильных групп [14].

Свойство пектина взаимодействовать с ионами металлов, связывая их в нерастворимые комплексы, отражает показатель связывающей способности, который необходим для оценки его детоксицирующих свойств [10].

Идентификацию пектина проводят карбазольным методом и по реакции осаждения при использовании раствора свинца(II) ацетата основного [10].

1.4.2 Методы количественного определения пектинов

Наиболее распространенными методами количественного определения пектина являются следующие: гравиметрический (кальций-пектатный) , спектрофотометрический - карбазольный [16].

Спектрофотометрический метод основан на реакциях взаимодействия карбоксильных групп кислоты полигалактуроновой с различными реагентами [13], в частности, с карбазолом [13] в присутствии кислоты серной.

Фармакопейным методом количественного определения пектина является гравиметрический кальций-пектатный [10], характеризующийся простотой, доступностью и воспроизводимостью результатов.

1.5 Растительное сырье, содержащее пектины

Пектиновые вещества являются составным комплексом растительного сырья. Они содержатся практически во всех его видах. Наибольшее количество пектиновых веществ находится в плодах и корнеплодах. Наиболее распространенным в нашей стране пектинсодержащим сырьем являются семечковые плоды (яблоки), корнеплоды (сахарная и столовая свекла), субтропические цитрусовые, стебли и соцветия подсолнечника, клубни топинамбура и др [9]. Содержание пектиновых веществ (на сухую массу) в растительном сырье варьирует: в яблоке – 3,3-19,9%; в свекле – 6,4-30,0%; в цитрусовых – 9,0-14,0%; в подсолнечнике – 12,0-24,0%; в топинамбуре – 5,7-11,7% [20].

Пектины, полученные из яблок, цитрусовых, жома сахарной свеклы рекомендуют применять в виде киселя, хлеба из пшеничной муки с добавлением 10% яблочного порошка, обогащенного низкометоксилированным пектином. В настоящее время ассортимент продуктов лечебно-профилактического назначения расширяется за счет использования пектиносодержащих порошков из топинамбура [20,23].

1.6. Применение пектинов

Объединенный комитет экспертов ФАО/ВОЗ по пищевым добавкам рекомендует пектин как безопасную добавку без ограничения приемлемой дозы ежедневного потребления [21]. Одно из направлений применения пектинов связано с их использованием в фармацевтических технологиях. Вместе с тем большой интерес вызывают результаты экспериментальных и клинических исследований, свидетельствующие о том, что пектины способны проявлять лечебные и профилактические свойства при ряде заболеваний, не уступая по эффективности некоторым лекарственным препаратам.

В медицине пектин используется при лечении желудочно-кишечного тракта, для профилактики сахарного диабета, онкозаболеваний [22]. Пектин способствует снижению кровяного давления, выведению из организма холестерина, нормализации обменных процессов, улучшает периферическое кровообращение, перистальтику кишечника, рекомендуется для диетического питания [22].Установлено, что пектиновые вещества тормозят процессы гниения в кишечнике больше, чем искусственно введенные дезинфицирующие вещества [20].

Пектин обладает способностью очищать организм от вредных веществ, не нарушая при этом бактериологический баланс организма. Благодаря способности пектиновых веществ не расщепляться под действием ферментов желудка, а также взаимодействовать с ионами различных металлов, они используются как профилактическое средство при интоксикации организма тяжелыми металлами [10].

Наличие в составе пектиновых веществ уроновых кислот повышает сопротивляемость организма [7].

Пектины являются вспомогательным средством при приготовлении многих лекарственных форм, служат основой для получения пастилок, суппозиториев, являются исходным сырьем в приготовлении гидрогелей, таблеток, мягких желатиновых и ректальных капсул, свечей. Используется их пролонгированное действие в таблетках, микстурах с разными лекарственными препаратам [12].

Выводы по литературному обзору

Одним из путей решения проблем экологической медицины, обусловленных загрязнением окружающей среды и поступлением в организм человека избыточных количеств тяжелых металлов и радионуклидов является создание препаратов детоксицирующего действия.

Химические препараты, применявшиеся ранее для выведения из организма тяжелых металлов и радионуклидов, недостаточно эффективны и вызывают обеднение организма микроэлементами [19]. Пектин не вызывает этих побочных действий и является эффективным антидотом для профилактики отравлений тяжелыми металлами. Пектины оказывают благоприятное действие не только в условиях острого и подострого воздействия металлов, но и при длительном поступлении их в организм [10].

Наличие в молекуле полимера свободных карбоксильных и гидроксильных групп галактуроновой кислоты обуславливает его свойство связывать в желудочно-кишечном тракте ионы токсичных металлов с последующим образованием нерастворимых комплексов (пектаты, пектинаты), которые не всасываются и выводятся из организма [24].

Наиболее распространенными источниками полисахарида являются яблоко, свекла, цитрусовые, подсолнечник, топинамбур [1]. Детоксицирующую активность пектинов данного растительного сырья характеризуют следующие показатели: молярная масса, уронидная составляющая, степень этерификации, содержание свободных карбоксильных групп, связывающая способность ионов свинца, сорбционная способность [3].

Поэтому сравнительный анализ необходимо проводить по указанным выше показателям, используя пектины наиболее распространенных растительных источников.

Глава 2 Сравнительное изучение пектинов различного вида растительного сырья (Экспериментальная часть)

2.1 Определение молярной массы пектинов

Определение молярных масс пектинов различного растительного сырья проводилось вискозиметрическим методом с помощью капиллярного вискозиметра Оствальда [12].

Для определения средней молярной массы пектина готовилась серия растворов с различной концентрацией пектина и по времени истечения рассчитывались относительная, удельная, приведенная вязкости. Далее находилась характеристическая вязкость – исходя из графической зависимости приведенной вязкости от концентрации исследуемых растворов и экстраполирования на нулевую концентрацию. Отрезок, отсекаемый при этом от оси ординат, равен вискозиметрической вязкости пектина.

Для расчета молярной массы пектина использовалось уравнение Марка – Хаувинка - Куна:

[η]= К·М^α, (1)

где [η] – характеристическая вязкость пектина; М – средняя молярная масса пектина, г/моль; К, α – константы (К = 1,110^-5, = 1,22 ).

Также рассчитывалась вискозиметрическая константа Хаггинса [3,72]. Константа Хаггинса находилась, как тангенс угла наклона прямой, полученной по зависимости - С : tgα = .

Коэффициент Хаггинса служит характеристикой «сродства» полимера с растворителем, так как он характеризует взаимодействие молекул полимера в системе полимер-растворитель.

Чем больше величина константы Хаггинса, тем, в термодинамическом смысле, хуже для него растворитель. При малой величине константы Хаггинса вероятность сцепления молекул и образования ассоциатов в растворе снижается, растворитель в этом случае является более «хорошим» с термодинамической точки зрения.

Результаты определения молярной массы, вискозиметрической константы Хаггинса растворов пектинов различного растительного сырья представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Определение молярной массы и вискозиметрической константы Хаггинса пектинов

Пектины	[]	М, г /моль	Кх
Пектин топинамбура	0,38	5248	0,13
Свекловичный	1,12	10520	0,42
Яблочный	0,52	6724	0,28
Цитрусовый	0,63	6799	0,31
Подсолнечный	0,75	7800	0,39

Из полученных данных следует что, молярная масса пектина топинамбура (5248 г/моль) меньше молярной массы пектинов другого растительного сырья.

С учетом молярной массы пектинов и молярной массы мономера пектина – галактуроновой кислоты (176 г/моль) были рассчитаны средняя степень полимеризации пектинов различного растительного сырья:

пектина топинамбура – 29;

свекловичного пектина – 59;

яблочного пектина – 38;

цитрусового пектина – 38;

подсолнечного пектина – 44.

Учитывая обратно пропорциональную зависимость гепатопротекторной активности пектина от его молярной массы [4], можно предположить более выраженное гепатопротекторное действие пектина топинамбура. Константа Хаггинса пектина топинамбура (0,13) меньше аналогичного показателя пектинов другого растительного сырья. Следовательно, вода для пектина топинамбура является более благоприятным растворителем, чем для других представленных пектинов.

2.2 Определение уронидной составляющей пектинов

Для пектинов любой природы основной структурной особенностью является наличие мономера кислоты D-галактуроновой. Специфической реакцией ее обнаружения является реакция с карбазолом в сернокислой среде [7]. Продукты декарбоксилирования уроновых кислот реагируют с карбазолом с образованием окрашенных соединений типа оснований Шиффа, которые определяют спектрофотометрически при длине волны 530 нм.

Результаты определения уронидной составляющей пектинов различного растительного сырья приведены в таблице 2.

Таблица 2 – Определение уронидной составляющей (%) пектинов (а = 0,002 г)

Пектины	Оптическая плотность	Уронидная составляющая, %
Пектин топинамбура	0,363	85,3±1,13
Свекловичный	0,303	68,9±0,98
Яблочный	0,285	61,9±0,95
Цитрусовый	0,280	61,4±0,87
Подсолнечный	0,321	73,8±1,03

Как следует из таблицы 2, пектин топинамбура имеет большее значение уронидной составляющей (85,3%), чем пектины другого растительного сырья. Высокое значение уронидной составляющей пектина топинамбура свидетельствует о высоком содержании кислоты галактуроновой, а, следовательно, и о выраженной детоксицирующей активности пектина топинамбура.

2.3 Определение степени этерификации пектинов

Степень этерификации является важным качественным показателем пектина, рассчитывается как отношение числа этерифицированных карбоксильных групп к общему содержанию карбоксильных групп в пектине и определяется титриметрическим методом [15].

Результаты определения степени этерификации пектинов различного растительного сырья представлены в таблице 3.

Таблица 3 – Определение степени этерификации пектинов

Пектины	Объем титранта, мл		Степень этерификации, %
	V1	V2
Пектин топинамбура	24,6	1,9	7,2±0,3
Свекловичный	25,3	11,5	45,2±0,8
Яблочный	23,1	19,7	73,9±1,1
Цитрусовый	22,8	18,6	68,2±0,9
Подсолнечный	21,7	9,7	35,5±0,7

Из приведенных данных следует, что пектин топинамбура обладает низкой степенью этерификации, равной 7,2%, что меньше, чем степень этерификации пектинов другого растительного сырья. Так как детоксицирующая активность пектина обратно пропорциональна его степени этерификации, то можно говорить о более высоком детоксицирующем действии пектина топинамбура.

2.4 Определение содержания свободных карбоксильных групп пектинов

Определение содержания свободных карбоксильных групп пектинов проводилось по соответствующей методике [15]. Чем больше свободных карбоксильных групп, тем выше связывающая способность пектина.

Результаты определения содержания свободных карбоксильных групп пектинов различного растительного сырья приведены в таблице 4.

Таблица 4 – Содержание свободных карбоксильных групп пектинов

Пектины	Содержание свободных карбоксильных групп (W), %
	V титранта, мл	W, %
Пектин топинамбура	9,6	41,4±0,3
Свекловичный	3,3	19,2±0,2
Яблочный	2,4	17,6±0,1
Цитрусовый	2,3	17,1±0,1
Подсолнечный	4,1	20,2±0,3

Из представленных данных следует, что содержание свободных карбоксильных групп пектина топинамбура (41,4%) больше, чем содержание свободных карбоксильных групп пектинов другого растительного сырья.

Полученные результаты позволяют говорить о большей детоксицирующей активности пектина топинамбура.

2.5 Определение связывающей способности свинца(II) ионов пектинами

Титриметрическим методом определялся показатель связывающей способности свинца(II) ионов пектинов различного растительного сырья [3], который необходим для оценки возможности использования пектинов в качестве детоксицирующего средства.

Результаты определения связывающей способности свинца(II) ионов пектинов различного растительного сырья приведены в таблице 5.

Как следует из таблицы 5, связывающая способность свинца(II) ионов пектина топинамбура (310,8 мг/г) больше, чем связывающая способность свинца(II) ионов других пектинов. Следовательно, пектин топинамбура по детоксицирующей активности превосходит другие представленные пектины.

Таблица 5 – Значения связывающей способности свинца(II) ионов пектинами

Пектины	Объем титранта V, мл	, мг/г	Связывающая способность, мг/г
Пектин топинамбура	14,8	168,4	310,8±3,8
Свекловичный	17,3	207,4	191,6±1,3
Яблочный	24,5	240,3	58,5±0,7
Цитрусовый	27,1	265,1	37,9±0,3
Подсолнечный	15,3	219,5	102,7±0,9

2.6 Определение сорбционной способности пектинов

Определение сорбционной емкости (количественной характеристики сорбционной способности) пектинов различного растительного сырья проводилось комплексонометрически с использованием метода изолирования Оствальда [2]. Исследовалось влияние температуры на сорбционную емкость пектинов. Проводились замораживание модельных растворов пектинов при -18⁰С и температурная обработка при 100⁰С в течение 1 часа.

Результаты отражены в таблице 6.

Таблица 6 - Зависимость концентрации свинца(II) ионов в водной фазе растворов от времени сорбции пектинами

Время, мин.	Количество свинца(II) ионов, мг/г	Концентрация свинца(II) ионов в растворе, ммоль/л	Связывание свинца(II) ионов, %	Связывающая способность свинца(II) ионов, мг/г
	Пектин топинамбура
0 (станд. раствор)	86,38	41,69	-----	-----
10	38,60	18,63	55,31	287,83
20	36,76	17,74	57,45	298,92
30	36,76	17,74	57,45	298,92
40	36,76	17,74	57,45	298,92
60	36,76	17,74	57,45	298,92
60 (при t=-180C)	34,92	16,85	59,58	310,00
60 (при t=+1000С)	38,60	18,63	55,31	287,83
Время, мин.	Яблочный пектин
0 (станд. раствор)	86,38	41,69	-----	-----
10	56,21	21,94	13,35	111,55
20	54,31	21,14	13,29	123,03
30	54,34	21,04	15,63	122,79
40	54,34	21,04	15,53	122,79
60	54,34	21,04	15,53	122,79
60 (при t=-180C)	56,21	21,94	13,27	111,52
60 (при t=+1000С)	55,00	22,81	11,27	110,79
Время, мин.	Свекловичный пектин
0 (станд. раствор)	86,38	41,69	-----	-----
10	63,20	31,34	23,46	124,46
20	63,30	31,36	25,48	135,21
30	63,33	31,75	25,52	133,50
40	63,33	31,75	25,62	133,50
60	63,33	31,75	25,62	133,50
60 (при t=-180C)	62,20	32,05	23,36	123,26
60 (при t=+1000С)	64,00	33,82	21,48	121,50
Время, мин.	Цитрусовый пектин
0 (станд. раствор)	86,38	41,69	-----	-----
10	46,20	30,75	21,36	101,66
20	44,30	30,85	20,28	103,11
30	44,33	30,65	20,63	102,30
40	44,33	30,65	20,43	102,30
60	44,33	30,65	20,43	102,30
60 (при t=-180C)	46,20	30,65	20,32	101,56
60 (при t=+1000С)	45,00	30,52	20,28	101,20
Время, мин.	Подсолнечный пектин
0 (станд. раствор)	86,38	41,69	-----	-----
10	66,20	31,95	23,36	121,56
20	64,30	31,15	23,28	133,01
30	64,33	31,05	25,72	132,80
40	64,33	31,05	25,52	132,80
60	64,33	31,05	25,52	132,80
60 (при t=-180C)	66,20	31,95	23,36	121,46
60 (при t=+1000С)	65,00	32,82	21,28	120,80

Из приведенных данных видно, что на пектине топинамбура процесс адсорбции идет интенсивнее и быстрее, равновесие наступает уже через 20 минут. Связывание свинца(II) ионов пектином топинамбура больше, чем связывание свинца(II) ионов другими пектинами. Связывание свинца(II) ионов пектином топинамбура при замораживании увеличилось, а при термическом нагревании уменьшилось. Связывание свинца(II) ионов другими пектинами уменьшилось и при замораживании, и при термическом нагревании.

По литературным данным известно [25,26], что действие отрицательных температур способствует улучшению металлсорбционной способности пектинов, что объясняется разрушающим действием образующихся при замораживании кристаллов льда на молекулы пектина. При этом большее количество ионов металлов связывается при температуре - 18⁰С.

Таким образом, пектин топинамбура обладает более высокой сорбционной емкостью, чем пектины другого растительного сырья.

2.7 Определение полной статистической обменной емкости пектинов

При определении показателя полной статической обменной емкости (ПСОЕ) учитываются все карбоксильные группы пектинов: как свободные, так и замещенные катионами металлов, а также связанные с аминокислотами, полифенолами и др. ПСОЕ определяли по калия гидроксиду и кальция хлориду [15].

Результаты определения полной статистической обменной емкости (ПСОЕ) представлены в таблице 7.

Таблица 7 – Определение полной статистической обменной емкости пектинов

Пектины	ПСОЕ, мг-экв/г
	КОН	СаCl2
Пектин топинамбура	9,8±1,3	40,4±1,1
Свекловичный	5,6±0,7	35,9±0,9
Яблочный	5,8±0,6	32,8±0,7
Цитрусовый	4,7±0,5	27,4±0,6
Подсолнечный	6,1±0,9	37,8±0,3

Как видно из таблицы 7, пектин топинамбура обладает наибольшими значениями ПСОЕ по калия гидроксиду и кальция хлориду (9,8 мг-экв/г и 40,4 мг-экв/г соответственно), чем другие пектины, что говорит о наибольшей способности данного пектина к обмену на токсичные металлы.

2.8 Определение золы общей, растворимости и рН водных растворов пектинов

Зола общая пектинов различного растительного сырья определялась согласно ГФ ХII [6]. рН водных растворов пектинов 2% определялась потенциометрически [6].

Полученные результаты приведены в таблице 8.

Из приведенных данных следует, пектины различного растительного сырья имеют аналогичные показатели золы общей, рН и растворимости, которые соответствуют требованиям нормативной документации (ВФС 42-3334-99).

Таблица 8 – Зола общая, растворимость и рН пектинов

Пектины	Общая зола, %	рН	Растворимость
Пектин топинамбура	2,5±0,05	3,8±0,3	Умеренно растворим в воде, практически нерастворим в спирте этиловом 96%
Свекловичный	2,3±0,02	4,0±0,4
Яблочный	2,3±0,04	3,9±0,2
Цитрусовый	2,2±0,04	3,4±0,2
Подсолнечный	2,4±0,03	4,0±0,3

Выводы по экспериментальной части

1. Вискозиметрическим методом установлена молярная масса пектина топинамбура (5248 г/моль), которая меньше молярной массы пектинов другого растительного сырья, что говорит о наибольшей гепатопротекторной активности первого.

2. Определена уронидная составляющая пектинов различного растительного сырья. Полученные данные уронидной составляющей пектина топинамбура (85,3%) превышают аналогичные показатели пектинов другого растительного сырья и свидетельствуют о большем содержании кислоты галактуроновой в первом.

3. Установлена степень этерификации пектинов различного растительного сырья. Пектин топинамбура обладает низкой степенью этерификации (7,2%) и содержит больше свободных карбоксильных групп (41,4%), чем пектины другого растительного сырья.

4. Установлена связывающая способность свинца(II) ионов пектина топинамбура (310,8 мг/г), которая выше связывающей способности свинца(II) ионов пектинов другого растительного сырья.

5. Изучена сорбционная емкость пектинов топинамбура. Связывание свинца(II) ионов пектином топинамбура составило 57,45%, что выше аналогичных показателей пектинов другого растительного сырья. Сорбционные свойства пектинов при нагревании и замораживании мало изменялись.

6. Изучена полная статистическая обменная емкость пектинов различного растительного сырья по КОН и СаСl₂. По данному показателю превосходит пектин топинамбура (9,8 и 40,4 мг-экв/г соответственно).

7. Полученные результаты физико-химических показателей пектинов различного растительного сырья позволяют говорить о более выраженной детоксицирующей активности пектина топинамбура.

Заключение

Одним из путей решения проблем экологической медицины, обусловленных загрязнением окружающей среды и поступлением в организм человека избыточных количеств тяжелых металлов и радионуклидов, является создание препаратов детоксицирующего действия.

Эффективным антидотом для профилактики отравлений соединениями свинца, ртути, кадмия и других металлов является пектин, который оказывает благоприятное действие не только в условиях острого и подострого воздействия металлов, но и при длительном поступлении их в организм.

Следует особо подчеркнуть, что пектины являются природными продуктами и не оказывают токсического действия на организм человека.

Пектины содержатся практически во всех видах растительного сырья, но наиболее распространенным пектинсодержащим сырьем являются яблоки, свекла, цитрусовые, подсолнечник и топинамбур.

Детоксицирующая активность пектина обусловлена значениями таких показатели как: молярная масса, уронидная составляющая, степень этерификации, содержание свободных карбоксильных групп, связывающая способность, сорбционная способность, полная статистическая обменная емкость и др [7]. Данные качественные показатели пектина использовали для сравнительного анализа пектинов различного растительного сырья: пектина топинамбура, свекловичного, яблочного, цитрусового, подсолнечного.

Результаты проведенных исследований позволяют говорить о более высокой детоксицирующей активности пектина топинамбура. Данный пектин обладает низкой молярной массой (5248 г/моль), высокой уронидной составляющей (85,3%), низкой степенью этерификации (7,2%), высоким содержанием свободных карбоксильных групп (41,4%), высокой связывающей способностью (310,8 мг/г), высокой сорбционной способностью (57,45%), большой полной статистической обменной емкостью по КОН и СаСl₂ (9,8 мг-экв/г и 40,4 мг-экв/г, соответственно).

Показатели «Зола общая», «рН», «Растворимость» пектина топинамбура соответствуют требованиям нормативной документации.

Полученные по итогам проведенных исследований позволяют рекомендовать пектин топинамбура в качестве более эффективного детоксицирующего средства.

Список используемой литература

1. Арасимович, В.В. Методы анализа пектиновых веществ, гемицеллюлоз и пектолитических ферментов в плодах / В.В. Арасимович, С.В. Балтага, Н.П. Пономарева.- Кишинев: АН Молд. ССР, 1970.- 84 с.

2. Бек, М.М. Химия реакций комплексообразования / М.М. Бек.- М.: Мир, 1973.- 279 с.

3. Березин, И.В. Практический курс химической и ферментативной кинетики / И.В. Березин.- М.: Изд-во МГУ, 1976.- 320 с.

4. Василенко, Ю.К. Получение и изучение физико-химических и гепатопротекторных свойств пектиновых веществ / Ю.К. Василенко, С.В. Москаленко, Н.Ш. Кайшева // Хим.- фармац. журн.- 1997.- Т.31, № 6.- С. 28-29.

5. Выбор условий извлечения пектина из клубней топинамбура (Helianthus tuberosus L.) с использованием ферментного препарата Максазим NNPK / М.Т. Кисиева [и др.] // Вестн. РУДН: Серия Медицина.- 2010.- № 4.- С. 237-241.

6. Государственная фармакопея РФ.- 12-е изд.- М.: Науч. центр экспертизы средств мед. применения, 2007.- Ч. 1.- 704 с.

7. Зависимость колориметрической реакции галактуроновой кислоты и нейтральных моносахаридов с карбазолом от условий её проведения / М.П. Филиппов [и др.] // Изв. АНМолд. ССР. Серия биолог. и хим. наук.- 1986.- №1.- С. 75.

8. Зяблицева, Н.С. Изучение полисахаридов клубней топинамбура и создание на их основе лечебно – профилактических средств: дис. … канд.фармац. наук: 15.00.02 / Зяблицева Надежда Сергеевна.- Пятигорск, 1998.- 157 с.

9. Извлечение пектина из клубней топинамбура (Helianthus tuberosus L.) с использованием ферментных препаратов / М.Т. Кисиева [и др.] // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / под ред. М.В. Гаврилина.- Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2010.- Вып. 65.- С. 195-196.

10. Исследование взаимодействия пектиновых веществ с солями меди, ртути, цинка и кадмия / Г.П. Кацева [и др.] // Химия природ. соединений.- 1988.- № 2.- С. 171-175.

11. Комиссаренко, С.Н. Пектины – их свойства и применение / С.Н. Комиссаренко, В.Н. Спиридонов // Раст. ресурсы.- 1998.- Т. 34, вып. 1.- С. 111-119.

12. Мелвин-Хьюз, Е.А. Равновесие и кинетика реакций в растворах / Е.А. Мелвин-Хьюз.- М.: Химия, 1975.- 472 с.

13. Оводов, Ю.С. Современные представления о пектиновых веществах / Ю.С. Оводов // Биоорган. химия.- 2009.- Т.5, № 3.- С. 293-310.

14. Определение комплексообразующей способности пектинов и пектинсодержащих препаратов / В.А. Компанцев [и др.] // Охрана окружающей среды.- 1991.- Вып. 3.- С. 25-27.

15. Пат. 2206089 Российская Федерация, МПК G01 N31/16. Способ определения массовой доли функциональных групп полиуронидов / Н.Ш. Кайшева (РФ). - № 2001134132/04; заявл. 13.12.2001; опубл. 10.06.2003. [Электронный ресурс].- Режим доступа: http://ru-patent.info/21/80-84/2181551.html.- Загл. с экрана.

16. Пектин. Тенденции научных и прикладных исследований / И.Л. Новосельская [и др.] // Химия природ. соединений.- 2000.- №1.- С. 3-11

17. Пектин. Производство и применение / Н.С. Карпович [и др.] - Киев: Урожай, 1989.- 88 с.

18. Пектин. ВФС 42-3433.- Введ. 1999.- 08.10.- М., 1999.- 4 с.

19. Полиуронидные комплексообразователи радиопротекторного действия / Г.Н. Румянцева [и др.] // Пища, экология, человек: материалы 6 Междунар. науч.-техн. конф.- M.: МГУПБ, 2001.- С. 26-31.

20. Природные свойства топинамбура // Новые лекарственные препараты.- 2003.- Вып. 12.- С. 6-19.

21. Рациональное питание. Рекомендуемые уровни потребления пищевых и биологически активных веществ: методические рекомендации МР 2.3.1. 19150.- Введ. 2004.- 02.06.- М.: Медицина, 2004.- 25 с.

22. Разработка пищевых продуктов и лечебных препаратов на основе клубней и травы топинамбура / Н.С. Зяблицева [и др.].- Пятигорск, 2009.- 25 с.- Деп. в ВИНИТИ РАН 27.07.2009, № 497- В2009.

23. Топинамбур, химическое и фармакогностическое исследования, применение в медицинских и пищевых целях: монография / Н.С. Зяблицева [и др.].- Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2010. - 136с.

24. Хотимченко, Ю.С. Полисорбовит: монография / Ю.С. Хотимченко, М.В. Одинцова, В.В. Ковалев.- Томск: Изд-во НТЛ, 2001.- 132 с.

25. Хрундин, Д.В. Влияние криообработки на комплексообразующую способность пектина / Хрундин Д.В., Романова Н.К., Решетник О.А. // Актуальные вопросы совершенствования технологии производства и переработки продукции сельского хозяйства: материалы Междунар. науч.-практич. конф.- Йошкар-Ола, 2008.- С. 611-612.

26. Хрундин, Д.В. Изучение влияния замораживания на свойства пектина / Хрундин Д.В., Романова Н.К., Решетник О.А. // Современные проблемы техники и технологии пищевых производств: материалы 10 Междунар. науч.-практич. конф.- Барнаул, 2007. - С. 105-106.

Код для цитирования: Скопировать