VI Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2014

У человека мозжечок расположен под затылочными долями полушарий головного мозга в задней черепной ямке, состоит из 2-х полушарий и узкого непарного срединного отдела – червя. Наружные слои мозжечка образуют кору из серого вещества, состоящего из поверностного слоя тел нервных клеток, под которыми находится сердцевина мозжечка – белое вещество, состоящее из клеток нейроглии и отростков нервных клеток, обложенных миэлином, или миэлиновых нервных волокон. В глубине белого вещества находятся 4 пары центральних ядер мозжечка: кровельные ядра или ядра шатра, шаровидные ядра, пробковые ядра и зубчатые ядра, тесно связанные с корой полушарий мозжечка, с непарным отделом мозжечка, т.е. червем, и с его околочервячными зонами посредством афферентных и эфферентных систем нервных волокон.

Миэлиновые нервные волокна, или аксоны нервных клеток, формирующие белую субстанцию мозжечка, т.е. афферентных и эфферентных проводящих путей мозжечка, по количественному содержанию клеточных суммарных липидных компонентов в несколько раз превышают содержание комплекса общих липидов клеток коркового слоя. При этом серое вещество зубчатого ядра и других подкорковых ядер околочервячной зоны мозжечка имеет существенные отличия от серого вещества коркового слоя в том, что аксоны нервных клеток зубчатого ядра и других подкорковых ядер обложены миелином уже в сером веществе и дают коллатерали, разветвляющиеся возле клеток нейроглии и пронизывающие все межуточное пространство ядер. Поэтому, представляется интересным выделение и количественное определение суммарных клеточных липидных компонентов участка околочервячной зоны, включающий подкорковые ядра мозжечка, по отношению к количеству суммарных липидов белой субстанции мозжечка и коркового слоя.

В исследовании использовался способ определения количественного содержания комплекса общих липидов в отделах ЦНС, запатентованный авторами и получивший положительное решение на выдачу «Патента Украины».

Целью этого способа является выделение общих липидов из различных отделов ЦНС для определения их процентного содержания в различных весовых и возрастных категориях. Метод может быть также использовано в различных аспектах научно-исследовательской деятельности в области морфологических наук, клинической медицины и клинической фармации.

Близким к заявляемому изобретению является способ получения комплекса фосфолипидов из сырья животного происхождения, включающий экстракцию общих липидов смесью хлороформа и метанола, отделение нелипидных примесей промывкой экстракта, перерастворение общин липидов и осаждение фосфолипидов.

Известны также способы получения индивидуальных фосфолипидов, использующихся для изготовления липосомальных препаратов и биологически активных эмульсий в медицинской промышленности. Способ получения сфингомиелина, заключается в том, что мозг крупного рогатого скота очищают, порционно гомогенизируют в ацетоне, гомогенаты объединяют и центрифугируют. Осадок экстрагируют смесью петролейного эфира и этанола в соотношении 1:1. Полученный экстракт упаривают, гидролизуют 1 N раствором едкого кали в метаноле и хроматографируют на колонке с силикагелем. Способ получения фосфатидилэтаноламина, который выделяют из мозга крупного рогатого скота или яичного желтка, основан на экстракции суммарных фосфолипидов смесью хлороформа с метанолом, отделением водорастворимых примесей дистиллированной водой и удалением балластных липидов хлоридом кадмия с последующей хроматографической очисткой.

Фосфатидилсерин выделяют из мозга крупного рогатого скота. Метод выделения основан на экстракции сырья смесью хлороформа с метанолом и последующей очистке суммарного экстракта липидов осаждением солями тяжелых металлов с последующей очисткой. Наиболее близким к заявляемому изобретению по сути и совокупности признаков (прототипом) является способ получения комплекса фосфолипидов из сырья животного происхождения, включающий измельчение сырья, экстракцию общих липидов органическими растворителями, отделение нелипидных примесей путем промывки экстракта 0,1% раствором хлористого натрия, перерастворение общих липидов в органическом растворителе, осаждение фосфолипидов ацетоном. При этом экстракцию общих липидов проводят из промышленных отходов головоногих моллюсков, а в качестве органических растворителей для экстракции и перерастворения используют смесь хлороформа с метанолом, петролейный эфир или диэтиловый эфир,

Заявляемый способ предусматривает, что выделение комплекса общих липидов производится из тканей центральной нервной системы, которые относятся к препаратам животного происхождения и состоят на 80-85% из фосфолипидов и гликолипидов, остальное приходится на долю нейтральных липидов (глицеридов, стеринов, углеводородов). Способ включает очищение препарата от мозговых оболочек, последующее взвешивание, измельчение и гомогенизацию в ацетоне, 5-кратную экстракцию общих липидов смесью хлороформа с этиловым спиртом в соотношении 2:1, отделение нелипидных примесей промывкой экстракта 0,7% раствором хлористого кальция в делительной колонке. Верхнюю фазу образовавшейся 2-х фазной системы сливают, нижнюю фазу фильтруют и упаривают досуха. Полученный сухой остаток общих липидов взвешивают и определяют процентное содержание комплекса общих липидов в препарате по формуле в/а-* 100%, где «в» – вес сухого остатка общих липидов, «а» – вес исходного препарата.

Данный способ предполагает упрощение технологического процесса, повышение безопасности способа, его экономическую целесообразность.

В настоящей работе в качестве исследуемого материала использовался препарат мозжечка мужчины 65 лет, включающий околочервячную зону с зубчатым ядром и другими подкорковыми ядрами, часть белой субстанции мозжечка без примеси серого вещества и препарат коркового слоя (рис. 1)

Вес зубчатого ядра и других ядер околочервячной зоны составил 3,8 г. Препараты белого вещества и коркового слоя также взяты в количестве 3,8 г.

Препараты измельчают и проводят фиксацию с одновременной гомогенизацией в ацетоне 3-5 мин. при комнатной температуре из расчета 4 мл ацетона на 1 г ткани.

1. Осадок отделяют фильтрованием и заливают 5-ю объемами смеси хлороформа с этиловым спиртом при соотношении 2:1, интенсивно перемешивают и оставляют на 2-3 часа для экстракции, постоянно перемешивая, после чего фильтруют.

2. Фильтрат помещают в холодильник при t 1-3 градуса, а осадок вновь 4-хкратно экстрагируют вышеуказанным способом.

3. Объединяют полученные экстракты вместе и промывают 0,7% раствором хлористого кальция в объеме 0,2-0,3 от общего объема экстракта в делительной колонке для отделения нелипидных примесей. Смесь интенсивно перемешивают и отстаивают 16-18 час. в холодильнике при t 1-3 градуса для разделения фаз и получения 2-х фазной системы (Рис. 2).

4. Отделяют нижнюю фазу, верхнюю фазу сливают. Нижнюю фазу фильтруют и упаривают досуха. Сухой остаток представляет собой комплекс общих липидов состоящий из 80-85% фосфолипидов и гликолипидов, остальное приходится на долю нейтральных липидов с незначительной примесью белков.

5. Проводят взвешивание сухого остатка и вычисляют процентное содержание комплекса общих липидов по формуле в/а*100%, где «в» – вес сухого остатка, «а» – вес исходного препарата (Рис.3).

Сухой остаток общих липидов после взвешивания сохраняют перерастворением в хлороформе.

В ходе исследования определялся вес сухого остатка околочервячной зоны с зубчатым ядром, который составил 0,85 г. откуда по формуле в/а*100%, получаем: 0,85/3,8*100%=22,4%

Вес сухого остатка комплекса общих липидов коркового слоя составил 0,6 г, откуда по формуле вычисляем: 0,6/3,8*100%=16%

Вес сухого остатка белого вещества мозжечка составил 1,4 г. откуда по формуле получаем 1,4/3,8*100%=36,8%

Из полученных результатов можно заключить, что количество липидных компонентов белой субстанции мозжечка превосходит количество суммарных липидов околочервячной зоны с зубчатым ядром в 1,6 раза, а количество суммарных липидов коркового слоя в 2,3 раза.

Рис. 1. Мозжечок мужчины 65 лет. Срез в горизонтальной проекции. Показаны кора полушарий, белое вещество, ядра мозжечка.

Рис. 2. Разделение фаз в делительной колонке для отделения нелипидных примесей.

Рис. 3. Сухие остатки комплекса общих липидов в исследуемых препаратах.

Код для цитирования: Скопировать