ФАРММИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МОЛОЧНОКИСЛЫХ КОККОВ

Текст работы размещён без изображений и формул.
Полная версия работы доступна во вкладке "Файлы работы" в формате PDF

Современные особенности питания, образ жизни и бесконтрольный прием антибиотиков изменяют состав нормальной микрофлоры, что в свою очередь приводит к дисбактериозу. Терапия заболеваний, сопровождающихся развитием дисбиотических нарушений, обязательно должна включать лекарственные средства, корригирующие количественный и качественный состав микрофлоры, т.е. средства с пробиотическим действием [1].

В настоящее время на фармацевтическом рынке представлен широкий спектр препаратов, применяемых с лечебно-профилактической целью для формирования и поддержания нормофлоры человека при нежелательных экологических воздействиях, стрессах, антибиотикотерапии и т.д [2].

Разрабатываемый на кафедре общей и клинической фармакологии МИ ПГУ биологически активный конкурентоспособный препарат «Унифарм» представляем собой ассоциированную культуру на основе молочнокислых кокков и лактобацилл. Данный продукт перспективно использовать в профилактике и комплексной терапии дисбиозов, кишечных инфекций, аллергических состояний, для поддержания состояния здоровья в условиях стрессовых воздействий, при коррекции массы тела, в программах, направленных на восстановление защитных сил организма и формирование физического здоровья.

Для скрининга штаммов молочнокислых кокков нами проведен культурально-морфологический и физиолого-биохимический анализ. Для контроля чистоты коллекционных культур молочнокислых кокков использовали кровяной агар с добавлением эритрит-агара и инкубировали при температуре 37°С на протяжении 24 часов. Визуально во всех образцах можно было выделить два морфотипа колоний, которые отличались диаметром и цветом.

Результаты их анализа по культурально-морфологическим признакам представлены в таблице 1.

Таблица 1 Сравнительная характеристика культурально-морфологических признаков коллекционных культур молочнокислых кокков

№	Мор-фо-типы	Тип колоний	Форма колоний	Тип гемолиза	Форма клеток	Размер колоний, мм	Окрас-ка по Граму	Количество клеток в цепочке
1	1	S	круглая	α	овальная	≤1	+	4-5
1	2	S	круглая	α	сферическая	≥1	+	3-4
2	1	S	круглая	α	овальная	≤0,8	+	4-5
2	2	S	круглая	α	овальная	≥1	+	3-5
3	1	S	круглая	α	овальная	≤1	+	3-4
3	2	S	круглая	α	сферически-вытянутая	≥1	+	2-3
4	1	S	круглая	α	сферически-вытянутая	≤1	+	1-2
4	2	S	круглая	α	овальная	≥1	+	2-3
5	1	S	круглая	α	овальная	≥1	+	2-4
5	2	S	круглая	α	овальная	≥1	+	3-5
6	1	S	круглая	α	овальная	≥1	+	2-4
6	2	S	круглая	α	овальная	≥1	+	4-5
7	1	S	круглая	α	овальная	≥1	+	2-4
7	2	S	круглая	α	овальная	≥1	+	3-5

Микроморфологическое исследование показало, что культуры представлены кокками, собранными в пары и короткие цепочки разной длины (от 3-х до 5 клеток). В образцах №3, морфотип 2 и №4, морфотип 1 клетки более вытянутые с заостренными концами. Бактерии неподвижные, грамположительные. Все изучаемые штаммы характеризуются специфическим кисло-молочным запахом. Колонии круглые, гладкие, с ровными краями, влажные; морфотипа 1 имеют серо-белый цвет, а морфотипа 2 - молочного цвета. Их размеры варьируют от 0,8 мм до 1,2 мм, причем у образцов морфотипа 2 диаметр ≥1 мм. На кровяном агаре вокруг колоний наблюдается зона частичного α-гемолиза, окрашенная в зеленоватый цвет. Все образцы дали рост на бульоне с 5% глюкозой. У образцов №1,2,3,4 наблюдался гомогенный рост в виде рыхлого осадка, с диффузным помутнением средней интенсивности надосадочного слоя бульона. У образцов №5,6,7 наблюдался придонный рост, крошковатый осадок со слабым помутнением надосадочного слоя бульона. Такой характер роста у всех образцов указывает на то, что изучаемые штаммы не образует длинных цепочек. При инкубации в микроаэрофильных условиях (концентрации кислорода 9,5%) в течение 24-х часов диаметр колоний достигал у морфотипа 1 - 1,5 мм, 2 - 2 мм.

Исследование дифференциально-диагностических признаков культур проводили на различных селективных и дифференциально-диагностических средах (табл.2).

Способность расти на солевом агаре высокой концентрации показали все выделенные морфотипы образцов №2 и №3. У образцов №4,5,6,7 морфотипа 1 рост на солевом агаре не наблюдался. Образец №3 показал полную толерантность к теллуриту. Ни один из образцов не восстановил 2,3,5-трифенилтетразолия хлорид, колонии были бесцветными. На энтерококковом агаре все образцы дали рост, причем у образцов №1,2,3,4 морфотип 1 дал бесцветные колонии, а морфотип 2 - бледно-розовые. У образцов №5,6,7 все колонии были окрашены в бледно-розовый цвет.

Таблица 2

Сравнительная характеристика роста исследуемых штаммовна селективных и дифференциально-диагностических средах

№	Морфо-типы колоний	Тест толерант-ности к теллуриту 0,03-0,04%	Редукция 2,3,5-ТТХ	Солевой агар 6,5% NaCl	Рост на энтерококковом агаре, пигмент колоний
№1	1	-	-	-	+бесцветные
№1	2	+	-	-	+бледно-розовые
№2	1	-	-	+	+бесцветные
№2	2	+	-	+	+бледно-розовые
№3	1	+	-	+	+бесцветные
№3	2	+	-	+	+бледно-розовые
№4	1	-	-	-	+бесцветные
№4	2	+	-	+	+бледно-розовые
№5	1	-	-	-	+бледно-розовые
№5	2	+	-	+	+бледно-розовые
№6	1	-	-	-	+бледно-розовые
№6	2	+	-	+	+бледно-розовые
№7	1	-	-	-	+бледно-розовые
№7	2	+	-	+	+бледно-розовые

С целью изучения принадлежности анализируемых штаммов к серологическим группам по Лансфилду была проведена реакция латекс-агглютинации со специфическими сыворотками групп В, С, F, G, D (табл.3).

Таблица 3

Результаты латекс-агглютинации выделенных морфотипов коллекционных образцов

№образца	Морфотип	В-антиген	С-антиген	F-антиген	G-антиген	D-антиген
1	1	-	-	-	-	+
1	2	-	-	-	-	+
2	1	-	-	-	-	+
2	2	+	+	+	+	+
3	1	-	-	-	-	-
3	2	+	+	+	+	+
4	1	-	-	-	-	-
4	2	+	+	+	+	+
5	1	-	-	-	-	-
5	2	+	+	+	+	+
6	1	-	-	-	-	-
6	2	+	+	+	+	+
7	1	-	-	-	-	-
7	2	+	+	+	+	+

Образцы №1,2 показали групповую специфичность к D-антигену, образцы №3,4,5,6,7 проагглютинировали со всеми антигенами.

Для идентификации микроорганизмов использовали две тест-системы: набор Стрептотест 24 и Стрип API 20 Streр производства Чехия и Франции, соответственно (табл.4,5).

Таблица 4

Ферментативная активность коллекционных культур молочнокислых кокков

Образцы,

морфотипы

СУБСТРАТ

№1

№2

№3

№4

№5

№6

№7

Контрольный тест

Lactococcus lactis subsp. lactis

Enterococcus faecinum

N-ацетил-глюкозаминидаза

(+)

L-лейцин-аминопептидаза

(+)

β-маннозидаза

(-)

β-глюкуронидаза

β-глюкозидаза

(+)

α- галактозидаза

фосфатаза

α-метил-глюкозидаза

(+)

образование пиррилидонил-ариламидазы

(-)

Таблица 5

Оценка способности коллекционных культур утилизировать различные субстраты

Образцы, морфотипы СУБСТРАТ	№1		№2		№3		№4		№5		№6		№7		Контрольный тест
	№1		№2		№3		№4		№5		№6		№7		Lactococcus lactis subsp. lactis	Enterococcus faecinum
	1	2	1	2	1	2	1	2	1	2	1	2	1	2	Lactococcus lactis subsp. lactis	Enterococcus faecinum
эскулин	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	d	+
инулин	-	+	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	d	-
манитол	-	+	-	+	+	+	-	d	-	+	-	+	-	+	d	+
сорбитол	-	+	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
меллибиоза	+	d	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	d
рибоза	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+
лактоза	+	+	+	+	+	+	-	+	+	+	+	+	+	+	d	+
пуллулан	-	d	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
аргинин	+	+	+	+	d	+	-	+	+	+	+	+	+	+	+	+
тагатоза	+	+	-	+	d	+	d	+	+	+	+	+	+	+	-	-
мальтоза	+	+	+	+	+	+	d	+	+	+	+	+	+	+	+	+
рафиноза	+	d	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
трегалоза	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	(+)	+
сорбоза	+	+	-	-	-	-	-	d	-	-	-	-	-	-	d	-
гидролиз гиппурата	-	+	-	+	-	+	+	+	-	+	-	-	-	-	(-)	d

Обозначение:

«-» = отрицательная реакция

(+) = большинством положительная реакция

(-) = большинством отрицательная реакция

d = вариабельная.

Заключение

По результатам проведенных анализов и совокупности изученных признаков и свойств можно сделать вывод, что для включения в создаваемый консорциум «Унифарм» рационально использовать чистые культуры преобладающего морфотипа 1 из образцов № 3,4,5 Создаваемый препарат «Унифарм» может найти применение в производстве бактерийных препаратов, кисломолочных продуктов, биологически активных добавок и другой продукции.

Библиографический список

1. Поспелова В.В., Шабанская М.А., Морозова Л.В. Биологическая характеристика некоторых производственных и свежевыделенных штаммов лактобацилл.- В кн. Медицинские аспекты микробной экологии (ред. Шендеров Б.А.). М.: Медицина, 1992. - Вып.6. - С. 54-57

2. Шабанова Н. А. Технологические свойства пробиотиков / Шабанова Н. А., Гостева В. В., Клицунова Н. В. и др. // Микробиология, 2009. - № 2. - С. 3-4

Просмотров работы: 15

Код для цитирования:

IV Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2012

ФАРММИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МОЛОЧНОКИСЛЫХ КОККОВ

Студенческий научный форум - 2012
IV Международная студенческая научная конференция