ФАРММИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МОЛОЧНОКИСЛЫХ КОККОВ - Студенческий научный форум

IV Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2012

ФАРММИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МОЛОЧНОКИСЛЫХ КОККОВ

 Комментарии
Текст работы размещён без изображений и формул.
Полная версия работы доступна во вкладке "Файлы работы" в формате PDF
Современные особенности питания, образ жизни и бесконтрольный прием антибиотиков изменяют состав нормальной микрофлоры, что в свою очередь приводит к дисбактериозу. Терапия заболеваний, сопровождающихся развитием дисбиотических нарушений, обязательно должна включать лекарственные средства, корригирующие количественный и качественный состав микрофлоры, т.е. средства с пробиотическим действием [1].

В настоящее время на фармацевтическом рынке представлен широкий спектр препаратов, применяемых с лечебно-профилактической целью для формирования и поддержания нормофлоры человека при нежелательных экологических воздействиях, стрессах, антибиотикотерапии и т.д [2].

Разрабатываемый на кафедре общей и клинической фармакологии МИ ПГУ  биологически активный конкурентоспособный препарат «Унифарм» представляем собой ассоциированную культуру на основе молочнокислых кокков и лактобацилл. Данный продукт перспективно использовать в профилактике и комплексной терапии дисбиозов, кишечных инфекций, аллергических состояний, для поддержания состояния здоровья в условиях стрессовых воздействий, при коррекции массы тела, в программах, направленных на восстановление защитных сил организма и формирование физического здоровья.

Для скрининга штаммов молочнокислых кокков нами проведен культурально-морфологический и физиолого-биохимический анализ. Для контроля чистоты коллекционных культур молочнокислых кокков использовали кровяной агар с добавлением эритрит-агара и инкубировали при температуре 37°С на протяжении 24 часов. Визуально во всех образцах можно было выделить два морфотипа колоний, которые отличались диаметром и цветом.

Результаты их анализа по культурально-морфологическим признакам представлены в таблице 1.

 

Таблица 1 Сравнительная характеристика культурально-морфологических признаков коллекционных культур молочнокислых кокков

Мор-фо-типы

Тип колоний

Форма колоний

Тип гемолиза

Форма клеток

Размер колоний, мм

Окрас-ка по Граму

Количество клеток в цепочке

1

1

S

круглая

α

овальная

≤1

+

4-5

2

S

круглая

α

сферическая

≥1

+

3-4

2

1

S

круглая

α

овальная

≤0,8

+

4-5

2

S

круглая

α

овальная

≥1

+

3-5

3

1

S

круглая

α

овальная

≤1

+

3-4

2

S

круглая

α

сферически-вытянутая

≥1

+

2-3

4

1

S

круглая

α

сферически-вытянутая

≤1

+

1-2

2

S

круглая

α

овальная

≥1

+

2-3

5

1

S

круглая

α

овальная

≥1

+

2-4

2

S

круглая

α

овальная

≥1

+

3-5

6

1

S

круглая

α

овальная

≥1

+

2-4

2

S

круглая

α

овальная

≥1

+

4-5

7

1

S

круглая

α

овальная

≥1

+

2-4

2

S

круглая

α

овальная

≥1

+

3-5

Микроморфологическое исследование показало, что культуры представлены кокками, собранными в пары и короткие цепочки разной длины (от 3-х до 5 клеток). В образцах №3, морфотип 2 и №4, морфотип 1 клетки более вытянутые с заостренными концами. Бактерии неподвижные, грамположительные. Все изучаемые штаммы характеризуются специфическим кисло-молочным запахом. Колонии круглые, гладкие, с ровными краями, влажные; морфотипа 1 имеют серо-белый цвет, а морфотипа 2 - молочного цвета. Их размеры варьируют от 0,8 мм до 1,2 мм, причем у образцов морфотипа 2 диаметр ≥1 мм. На кровяном агаре вокруг колоний наблюдается зона частичного α-гемолиза, окрашенная в зеленоватый цвет. Все образцы дали рост на бульоне с 5% глюкозой. У образцов №1,2,3,4 наблюдался гомогенный рост в виде рыхлого осадка, с диффузным помутнением средней интенсивности надосадочного слоя бульона. У образцов №5,6,7 наблюдался придонный рост, крошковатый осадок со слабым помутнением надосадочного слоя бульона. Такой характер роста у всех образцов указывает на то, что изучаемые штаммы не образует длинных цепочек. При инкубации в микроаэрофильных условиях (концентрации кислорода 9,5%) в течение 24-х часов диаметр колоний достигал у морфотипа 1 - 1,5 мм, 2 - 2 мм.

Исследование дифференциально-диагностических признаков культур проводили на различных селективных и дифференциально-диагностических средах (табл.2).

Способность расти на солевом агаре высокой концентрации показали все выделенные морфотипы образцов №2 и №3. У образцов №4,5,6,7 морфотипа 1 рост на солевом агаре не наблюдался. Образец №3 показал полную толерантность к теллуриту. Ни один из образцов не восстановил 2,3,5-трифенилтетразолия хлорид, колонии были бесцветными. На энтерококковом агаре все образцы дали рост, причем у образцов №1,2,3,4 морфотип 1 дал бесцветные колонии, а морфотип 2 - бледно-розовые. У образцов №5,6,7 все колонии были окрашены в бледно-розовый цвет.

Таблица 2

Сравнительная характеристика роста исследуемых штаммовна селективных и дифференциально-диагностических средах

Морфо-типы колоний

Тест толерант-ности к теллуриту

0,03-0,04%

Редукция

2,3,5-ТТХ 

Солевой

агар

6,5%

NaCl

Рост

на энтерококковом агаре,

пигмент колоний

№1

1

-

-

-

+бесцветные

2

+

-

-

+бледно-розовые

№2

1

-

-

+

+бесцветные

2

+

-

+

+бледно-розовые

№3

1

+

-

+

+бесцветные

2

+

-

+

+бледно-розовые

№4

1

-

-

-

+бесцветные

2

+

-

+

+бледно-розовые

№5

1

-

-

-

+бледно-розовые

2

+

-

+

+бледно-розовые

№6

1

-

-

-

+бледно-розовые

2

+

-

+

+бледно-розовые

№7

1

-

-

-

+бледно-розовые

2

+

-

+

+бледно-розовые

С целью изучения принадлежности анализируемых штаммов к серологическим группам по Лансфилду была проведена реакция латекс-агглютинации со специфическими сыворотками групп В, С, F, G, D (табл.3).

Таблица 3

Результаты латекс-агглютинации выделенных морфотипов коллекционных образцов

№образца

Морфотип

В-антиген

С-антиген

F-антиген

G-антиген

D-антиген

1

1

-

-

-

-

+

2

-

-

-

-

+

2

1

-

-

-

-

+

2

+

+

+

+

+

3

1

-

-

-

-

-

2

+

+

+

+

+

4

1

-

-

-

-

-

2

+

+

+

+

+

5

1

-

-

-

-

-

2

+

+

+

+

+

6

1

-

-

-

-

-

2

+

+

+

+

+

7

1

-

-

-

-

-

2

+

+

+

+

+

Образцы №1,2 показали групповую специфичность к D-антигену, образцы №3,4,5,6,7 проагглютинировали со всеми антигенами.

Для идентификации микроорганизмов использовали две тест-системы: набор Стрептотест 24 и Стрип API 20 Streр производства Чехия и Франции, соответственно (табл.4,5).

Таблица 4

Ферментативная активность коллекционных культур молочнокислых кокков

Образцы,

морфотипы

СУБСТРАТ

 

№1

 

№2

 

№3

 

№4

 

№5

 

№6

 

№7

Контрольный тест

Lactococcus lactis subsp. lactis

Enterococcus faecinum

1

2

1

2

1

2

1

2

1

2

1

2

1

2

N-ацетил-глюкозаминидаза

-

+

-

+

-

+

-

+

+

+

+

+

+

+

d

(+)

L-лейцин-аминопептидаза

+

+

+

+

+

+

+

d

+

-

+

+

+

+

d

(+)

β-маннозидаза

+

+

+

+

+

+

-

+

+

+

+

+

+

+

d

(-)

β-глюкуронидаза

-

-

-

d

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

β-глюкозидаза

+

+

+

+

d

+

+

d

+

+

+

+

+

+

+

(+)

α- галактозидаза

+

+

+

+

+

+

-

+

+

+

+

+

+

+

-

d

фосфатаза

+

+

-

-

-

-

-

d

-

-

-

-

-

-

-

-

α-метил-глюкозидаза

-

d

+

d

-

d

d

d

-

-

-

-

-

-

(+)

d

образование пиррилидонил-ариламидазы

-

-

-

-

-

-

-

-

+

+

+

+

+

+

 

(-)

+

 

Таблица 5

Оценка способности коллекционных культур утилизировать различные субстраты

Образцы,

морфотипы

СУБСТРАТ

 

№1

 

№2

 

№3

 

№4

 

№5

 

№6

 

№7

Контрольный тест

Lactococcus lactis subsp. lactis

Enterococcus faecinum

1

2

1

2

1

2

1

2

1

2

1

2

1

2

эскулин

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

d

+

инулин

-

+

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

d

-

манитол

-

+

-

+

+

+

-

d

-

+

-

+

-

+

d

+

сорбитол

-

+

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

меллибиоза

+

d

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

d

рибоза

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

лактоза

+

+

+

+

+

+

-

+

+

+

+

+

+

+

d

+

пуллулан

-

d

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

аргинин

+

+

+

+

d

+

-

+

+

+

+

+

+

+

+

+

тагатоза

+

+

-

+

d

+

d

+

+

+

+

+

+

+

-

-

мальтоза

+

+

+

+

+

+

d

+

+

+

+

+

+

+

+

+

рафиноза

+

d

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

трегалоза

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

(+)

+

сорбоза

+

+

-

-

-

-

-

d

-

-

-

-

-

-

d

-

гидролиз

гиппурата

-

+

-

+

-

+

+

+

-

+

-

-

-

-

(-)

d

Обозначение:

«-» = отрицательная реакция

(+) = большинством положительная реакция

(-) = большинством отрицательная реакция

d = вариабельная.

Заключение

По результатам проведенных анализов и совокупности изученных признаков и свойств можно сделать вывод, что для включения в создаваемый консорциум «Унифарм» рационально использовать чистые культуры преобладающего морфотипа 1 из образцов № 3,4,5 Создаваемый препарат «Унифарм» может найти применение в производстве бактерийных препаратов, кисломолочных продуктов, биологически активных добавок и другой продукции.

 

Библиографический список

1. Поспелова В.В., Шабанская М.А., Морозова Л.В. Биологическая характеристика некоторых производственных и свежевыделенных штаммов лактобацилл.- В кн. Медицинские аспекты микробной экологии (ред. Шендеров Б.А.). М.: Медицина, 1992. - Вып.6. - С. 54-57

2. Шабанова Н. А. Технологические свойства пробиотиков / Шабанова Н. А., Гостева В. В., Клицунова Н. В. и др. // Микробиология, 2009. - № 2. - С. 3-4

Просмотров работы: 2