Иммуногистохимия - это метод выявления и точной локализации того или иного клеточного или тканевого компонента (антигена) с помощью иммунологических и гистохимических реакций. Существуют два варианта иммуногистохимических реакций.
Прямой метод предполагает использование меченых антител против изучаемого антигена. Антитела взаимодействуют с антигеном в местах локализации соответствующих клеток. Данные участки выявляются с помощью системы визуализации. Непрямой метод предполагает использование двух различных антител. Первичные антитела реагируют с антигенами ткани. Связанные с меткой вторичные антитела специфически взаимодействуют с первичными, которые для вторичных антител являются антигеном.
Важным этапом любого иммуногистохимического метода является визуализация результатов реакции «антиген-антитело». Выявить антитела, связавшиеся с антигеном, можно, используя различные метки, связанные с Fc-фрагментом антител. Такими метками могут быть: флюорохромы, ферменты, металлы и металлопротеиды, радиоизотопы, промежуточные связующие вещества (например биотин, дигоксин, дигоксигенин).
Все флюорохромы обладают способностью испускать свет в видимом диапазоне спектра при освещении их светом с определённой длиной волны.
Для лейкоцитарных антигенов, выявляемых различными антителами, была разработана CD-классификация (табл). Обозначение CD - cluster designation - было рекомендовано ВОЗ для стандартизации лейкоцитарных антигенов. По мере накопления данных было выяснено, что на некоторых клетках экспрессируются не один, а многие антигены, имеющие место на клетках других линий.
Иммуногистохимические методы исследования в настоящее время являются обязательной частью любых исследований, так как только они обеспечивают специфическую визуализацию локализации в тканях различных клеток, гормонов и их рецепторов, ферментов, иммуноглобулинов, компонентов клеток (сократительных и промежуточных филаментов) и даже отдельных генов, что позволяет изучать секреторные и синтетические процессы.
Таблица CD-антигены, применяющиеся для идентификации типов лейкоцитов
|