IV Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2012

Лечение ран остается актуальной проблемой нашего времени[1]. Кроме того, что доксициклин является антибиотиком широкого спектра действия, он еще известен как синтетический ингибитор матричных металлопротеиназ, т.е. ингибитор протеолиза[3]. Протеолиз имеет важное значение в заживлении ожоговой раны[2]. Поэтому целью исследования явилось изучение особенностей заживления ожоговой раны при применении доксициклина.

Материалы и методы: Эксперименты выполнены на 96 крысах популяции WAG массой 200-250г. Животные были разделены на 3 группы: 1 группа - термический ожог без лечения, животным 2 группы вводили препарат сравнения метилурацил в дозе 0,126 мг/кг, 3 группе вводили доксициклин в дозе 30 мг/кг. Препараты вводили с момента нанесения ожога ежедневно в течение 28 суток. Наблюдения за процессами заживления ожоговых ран проводили на 7, 14, 21, 28 сутки (по 6 крыс в каждой серии). Материалом для морфологического исследования служили ткани (кожа, подкожная клетчатка, мышцы).  Материал фиксировали в 10% нейтральном формалине, после чего иссекались кусочки кожи толщиной около 0,4 см. Материал подвергали спиртовой проводке и парафиновой заливке, изготавливали срезы толщиной 5-6 мкм. Обзорные препараты, окрашенные гематоксилином и эозином, использовались для общей оценки состояния исследуемых тканей. Окрашивание препаратов фукселином на эластические волокна по Вейгерту с докрашиванием пикрофусином по методу Ван Гизон использовалось для выявления и дифференцировки соединительнотканных структур. С помощью ШИК-реакции по Мак Манусу Хочкису (контроль с амилазой) выявляли нейтральные гликозаминогликаны (ГАГ). Гистологические и гистохимические  методики выполнялись по прописям, изложенным в руководствах по гистологической технике и гистохимии [4,5].

Результаты: Визуальные наблюдения в первой группе на 7 сутки показали, что рана представляет собой зону глубокого некроза, заполнена серозно-гнойным экссудатом. Наблюдается отторжение струпа. К 14 суткам зона некроза уменьшается незначительно с присутствием серозно-гнойного экссудата. К 21 суткам отмечается видимое уменьшение зоны некроза с уменьшение количества серозно-гнойного экссудата. На 28 сутки рана частично эпителизируется с образованием нежного рубца.

Во 2 группе животных, получавших препарат сравнения метилурацил, на 7 сутки эксперимента видимых различий с первой группой не выявлено. Лишь на  14 сутки отмечается более интенсивное уменьшение зоны некроза с присутствием серозного экссудата, в отличие от первой группы. К 21 суткам эпителизация раны и уменьшение зоны некроза протекает интенсивнее, что подтверждается морфологически. Однако в 50% наблюдений присутствуют гнойные осложнения и отторжение струпа. На 28 сутки рана практически полностью эпителизирована с образованием тонкого рубца.

В 3 группе животных (лечение доксициклином) на 7 сутки рана заполнена серозным экссудатом. К 14 суткам отмечалось еще более интенсивное уменьшение зоны некроза по сравнению с предыдущими группами. К 21 суткам отмечается видимое уменьшение зоны некроза и уменьшение количества серозного экссудата. К 28-м суткам визуально рана полностью эпителизируется с образованием более прочного рубца.

Таким образом, исходя из данных визуального наблюдения, заживление ожоговой раны наиболее интенсивно происходило в 3 группе животных, получавших лечение доксициклином, что подтверждается отсутствием гнойного экссудата, более активным уменьшением зоны некроза и полной эпителизацией к 28 суткам наблюдения.

Морфологические исследования первой группы показали, что на 7 сутки  в ране присутствуют выраженные деструктивные изменения эпидермиса, дермы, гиподермы и мышц (коагуляционный некроз) с формированием зоны перифокального воспаления и выраженными дисциркуляторными нарушениями. К 14 суткам у животных наблюдается неравномерное созревание грануляционной ткани. Под струпом наблюдается скопление гнойного экссудата. К 21 суткам продолжаются процессы эпидермизации и созревания грануляционной ткани. Однако в большинстве наблюдений встречаются небольшие участки отторжения струпа и нагноения. На 28 сутки сформирован регенерат, в нескольких наблюдений закончена его эпителизация. Вместе с тем имеют место нарушение пролиферации, дифференцировки и ороговения эпидермиса; очаговые нагноительные изменения.

Во 2 группе животных (лечение метилурацилом) на протяжении первых 2-х недель отличий с первой группой не выявлено. К 21 суткам морфологически подтверждается более интенсивная эпителизация, однако с присутствием в 50% наблюдений гнойных осложнений и отторжения струпа. К 28 суткам в половине наблюдений имеет место незаконченная эпидермизация в сочетании с торможением процесса созревания соединительной ткани.

Морфологическое изучение ожоговой раны  3 группы (лечение доксициклином) показало, что на 14-е сутки сформирована зона регенерата с эпидермизацией его по периферии, восстанавливается строение прилегающих тканей.  К 21-м суткам более интенсивное по сравнению с первыми двумя группами уменьшение зоны некроза и продолжается процесс созревания грануляционной ткани с параллельной эпидермизацией зоны регенерата, которая в половине наблюдений носит полный характер. На 28 сутки  во всех наблюдениях имеет место равномерное фиброзирование регенерата с полной эпидермизацией его поверхности.

Выводы:

1. Термический ожог у крыс, не получавших лечение, протекает по типу неполной репаративной регенерации с формированием рубцовой ткани.
2. Применение метилурацила ограничивает деструктивные изменения, вызванные термическим ожогом в пределах эпидермиса, дермы и подкожно-жировой клетчатки, способствует формированию грануляционной ткани, ее созреванию и эпителизации, однако в 50% наблюдений в центральной зоне регенерата имеет место незаконченная эпидермизация в сочетании с торможением процесса созревания соединительной ткани.
3. Использование синтетического ингибитора матричных металлопротеиназ доксициклина для лечения экспериментальных животных с термическим ожогом кожи способствует более интенсивному заживлению повреждения, чем при лечении метилурацилом, что подтверждается морфологически.

Список литературы:

1. Звягинцева Т.В., Кривошапка А.В., Миронченко С.И. Цитокиновый профиль крови при экспериментальной ожоговой ране // Современные наукоемкие технологии. - 2010. - № 12 - С. 36-37.
2. Миронов В.И., Гилёва И.И. Раневой процесс: современные аспекты патогенеза // Сибирский медицинский журнал, 2009, № 6, с. 20-26
3. Brown D.L., Desai K.K., Vakili B.A., Nouneh C., Lee H.M., Golub L.M. Clinical and biochemical results of the metalloproteinase inhibition with subantimicrobial doses of doxycycline to prevent acute coronary syndromes (MIDAS) pilot trial. // Arterioscler Thromb Vasc Biol 2004; 24: 733-8.
4. Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия / Лилли Р. - М.: Мир, 1960. - 648 с.
5. Пирс Э. Гистохимия (теоретическая и прикладная) / Пирс Э. М.:Иностранная литература, 1962. - 962 с.