IV Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2012

Успех операций аутодермопластики у ожоговых больных во многом зависит от возможности забора аутодермотрансплантатов в достаточном количестве. При обширных ожогах часто не удается завершить пластическое восстановление утраченного кожного покрова до развития необратимых изменений в организме. Возникают трудности, связанные как с дефицитом донорского материала для закрытия ожоговых ран,  так и с необходимостью определения  регенераторных возможностей   структур кожи в зоне не только ожога, но и в донорской ране. Для  изучения пролиферативной активности клеточных элементов в структурах донорской кожи и определения оптимальных сроков повторного проведения аутодермопластики мы использовали метод иммуногистохимической метки пролиферирующих клеток на белок гена  Ki-67.  Парафиновые срезы толщиной 5 мкм монтировали на стёкла, предварительно обработанные в течение 5 минут 0,01 % раствором поли-л-лизина (Poly-l-Lyzine solution 0/01 %, Sigma USA) и высушенные в термостате при 56 С в течение часа. После стандартной процедуры депарафинирования в толуоле и спиртах, срезы для восстановления антигенной структуры, подвергали термической обработке в специальном растворе (Target Retrieval Solution, DAKO, Denmark) на водянолй бане при температуре 95-97 градусов по Цельсию в течение 30 минут. Затем стёкла охлаждали до комнатной температуры, промывали 5 минут 3% раствором перекиси водорода для подавления эндогенной пероксидазы, после чего промывали в 3-х сменах 0,02 М фосфатного буфера (рН 7,5) по 5 минут в каждой. После этого наносили первичные антитела к белку Ki-67 (DAKO, Denmark), инкубировали в течение 30 минут во влажной камере в термостате при 37 С, промывали в  3-х сменах 0,02 М фосфатного буфера  рН 7,5 по 5 минут в каждой. Наносили стрептавидин, коньюгированный с пероксидазой хрена (Streptavidin Peroxidase Conjugated, DAKO, Denmark). Интесивность окрашивания контролировали под микроскопом  (приблизительно инкубировали с ДАБом в течение 3-5 минут). После появления коричневого окрашивания ядер срезы промывали  в дистиллированной воде 5 минут, докрашивали гематооксилином, заключали в бальзам. В результате обработки преппаратов выявляются ядра пролиферирующих клеток, находящихся в S-периоде, когда наблюдается максимум синтеза белка гена Ki-67, коррелирующего с концентрацией ДНК. Нами получена чёткая характеристика динамики регенераторных возможностей структур кожи в донорском участке, определены сроки повторного забора аутодермотрансплантата.