III Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2011

Цитогенетические эксперименты - это, в первую очередь, эксперименты по изучению хромосом: подсчет их числа, описание структуры, поведения при делении клетки, а также связи между изменением структуры хромосом с изменчивостью признаков.

Вне зависимости от типа клеток общий принцип диагностического исследования сохраняется: накопление метафаз, гипотонизация, фиксация, раскапывание на предметное стекло [Бочков, 2008]. Необходимым условием для получения хороших метафазных пластинок является гипотонизация клеток (гипотонический шок). Обычно для этого используют гипотонический раствор хлорида кальция или цитрата натрия. В гипотоническом растворе клетки набухают, ядерная оболочка разрывается, межхромосомные связи рвутся, и хромосомы свободно плавают в цитоплазме. Гипотонизация является активатором эндоцитоза, происходит накопление воды в клетке из-за разности осмотического давления [Groulx et al., 2006].

В условиях медико-биологических экспериментов по изучению цитогенетических эффектов для гипотонизации, согласно имеющимся методическим рекомендациям, используются  1% раствор цитрата натрия или 0,56% раствор KCl. В то же время, при проведении методик по получению метафазных пластинок нет четких рекомендаций по возможности использования в ходе экспериментов не свежеприготовленных растворов, а «старых», хранившихся при надлежащем температурном режиме. Хотя в реальных условиях сложного, многостадийного медико-биологического эксперимента возникают ситуации использования растворов после хранения.

Таким образом, целью настоящего исследования явилось изучение влияния старых и свежеприготовленных гипотонических растворов на уровень гипотонизации и в конечном итоге - на качество полученных препаратов метафазных хромосом.

Материалы и методы. Эксперименты производились на 60 беспородных белых мышах возрастом 2 месяца, на самцах и самках, весом 24-28 грамм, с учетом всех биоэтических принципов. Получали препараты красного костного мозга по стандартной методике [Хабриев, Серединин, 2009] с различными вариациями гипотонического шока (1 серия: старый 1% раствор цитрата натрия; 2 серия: свежеприготовленный 1% раствор цитрата натрия; 3 серия: старый 0,56% раствор KCl; 4 серия: свежеприготовленный 0,56% раствор KCl). Во всех сериях эксперимента использовался единый режим термостатирования. Полученные препараты анализировались при увеличении 10х2,5х90 на микроскопе «Люмам И 2». Гипотонизированные клетки подсчитывались в 50 полях зрения, метафазные пластинки в 100. Степень гипотонизации оценивали в баллах по оригинальной шкале.

Наименьшую сумму баллов получили препараты 1-й и 3-й серии эксперимента 5-ти бальных препаратов 0% и 1,9% - высушивание, 0,13% и 2,4% - выжигание. Тогда как во 2-й и 4-й серии 5-ти бальных препаратов было 0,9% и 2,2% - высушивание, 1,3% и 2,8% - выжигание.

Таким образом, свежеприготовленные препараты лучше вызывают «гипотонический шок» клеток, при этом, в выбранном режиме термостатирования, 0,56% раствор KCl работает эффективнее цитрата натрия, а способ получения микропрепаратов не влияет на их качество.